微生物实验报告.docx

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微生物实验报告

一环境中的微生物的检测和分离纯化

实验目的：

1学习并掌握无菌操作技术原理和方法

2学习用稀释涂布法分离微生物

3认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理

实验材料：

1土样溶液0.5ml，无菌生理盐水

2取液器（1000μL一支，100μL一支），培养箱，培养皿（12个），无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000μL无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架

实验步骤：

A培养基的制备（已提前制备好）

B周围环境中的微生物的检测，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上作如下实验

1取三个平板，用100μL的取液器分别吸取100μL的河水、豆浆、豆奶，均匀加在三个培养基上，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀（要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布）。

2再取三个平板，三个同学分别用手指（未洗过）在培养基上涂抹几秒钟，一个同学对应一个平板。

3再取一个平板，其中一个同学将手用肥皂洗过后，再在培养基上涂抹。

4再取一个平板，打开皿盖，一个同学对着培养基咳嗽，使口腔中的气流和飞沫落到培养基上。

5再取一个平板，打开皿盖，在空气中放置10min左右，关上皿盖。

6将上述9个平板放置在35℃的培养箱中培养24h。

C土壤中分离微生物

1采土样，制备土壤稀释液（已准备好）

2取三个平板，每个培养基上用取液器添加100μL的土壤稀释液，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀（要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布）。

3将平板依旧放在35℃的培养箱中培养24h。

D菌落计数

培养24h后，取出培养平板，算出每个平板上的菌落数量。

其中，土样中的微生物含量可用以下式子计算

土壤中的细菌含量（个/g土壤）=菌落平均数×10×稀释倍数

实验结果及数据：

实验结果如附图。

开盖10min手指直接按压

手指直接按压手指直接按压

1号的手指经肥皂洗后按压对着培养基咳嗽

豆奶河水

土壤溶液土壤溶液

豆浆土壤溶液

实验讨论及感想：

1根据你对周围环境中微生物存在的观察，你认为无菌操作要注意什么？

在进行无菌操作的时候，应该要注意始终在明火旁边操作，既不能离得太远，也不能离得太近。

因为在明火旁边可以减少空气中的微生物进入操作器具中的概率。

2在日常生活中如何让讲究饮食和生活卫生？

生活中，剩菜剩饭应该存放在冰箱内或是干燥低温处，尽量避免适宜微生物生长繁殖环境。

3试解释夏天时煮好的饭如果放在锅中保持盖着锅盖不动，不容易变质，而一旦盛在碗里饭就容易变质，如果是吃剩的剩饭就更容易变质的原因。

煮好的饭由于高温，本身含有的微生物被杀死，保持盖着锅盖不动，外界的微生物难以进入，但是一旦盛在碗里，抑或是吃剩的剩饭，由于跟空气直接接触，大量微生物会在其表面生长繁殖，导致其变质。

4根据实验结果，试从微生物的角度批驳“洁癖行为”。

完全的洁癖行为是不存在的。

就算东西收拾的再干净，也有无数肉眼看不见的微生物依然停留在器具表面，无法完全清除掉，所以，“洁癖行为”是永远无法达到的。

二固定化酵母细菌发酵啤酒实验与酸奶制作

实验目的：

1了解固定化细胞技术的方法和意义

2了解酵母发酵产生啤酒的过程

3学习酸奶制作方法

4了解纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的区别

实验材料：

1无菌滴管，无菌封口膜封好的100ml三角瓶

2发酵培养基：

100ml8%-10%的麦芽汁装于250ml三角瓶中

3浓度为2.5%的海藻酸钠溶液5ml，灭菌

4浓度为1.5%的CaCl250ml，灭菌

5浓度为0.9%的无菌生理盐水，5ml

6袋装巴氏消毒的牛奶，

7啤酒菌种：

啤酒酵母

8酸奶菌种：

市售酸奶

实验步骤：

A固定化酵母细胞发酵啤酒

1菌体培养：

将培养了24h的新鲜斜面菌种接种于三角瓶中培养。

2细胞固定化：

在预热至35℃的海藻酸钠溶液中加入2ml预热至35℃的酵母培养液，混合均匀，以无菌滴管（离液面5cm以上，离液面太近无法制得凝胶珠）缓慢而稳定的滴入CaCl2溶液中，即可得到直径约为3mm左右的凝胶珠。

注意无菌操作。

钙化30分钟左右。

3固定化细胞发酵啤酒：

在无菌玻璃棒的帮助下倒掉CaCl2溶液，将生理盐水倒入制得的固定化好的酵母细胞的瓶子中，洗一次凝胶珠，倒掉生理盐水。

将100ml发酵培养基（麦芽汁）倒入制得的固定化小球的瓶子中，用无菌封口膜封好瓶口。

20-28℃静置培养24h。

注意无菌操作。

4放置在4℃的冰箱中冷藏一段时间，品尝啤酒。

B制作酸奶

1取1000ml鲜奶搅拌煮沸消毒，加白糖60g搅拌溶解，乘热分装到干净无菌的100ml三角瓶中，用无菌封口膜封好瓶口。

让其自然冷却（冷却中最好能摇晃三角瓶2-3次，以免乳脂结皮）。

用洁净的封口膜将三角瓶口盖住。

冷至40℃（不烫手）时，取市面上销售的未经过灭菌的原味酸奶按5%（体积分数）比例倒入溶解好的糖的牛奶中，摇匀。

2或直接把是受经过巴氏消毒的“无抗牛奶”分装到干净无菌的100ml三角瓶中，加入6%（质量分数）白糖，摇晃确保使糖分充分溶解，取市面上销售的未经过灭菌的原味酸奶按5%（体积分数）比例倒入溶解好糖的牛奶中，摇匀。

三角瓶可用一次性纸杯或塑料杯代替，封口膜可用白纸代替。

3在42℃的情况下，三角瓶（纸杯或塑料杯）静置发酵培养6-8h（如果用纸杯盛牛奶，白纸封口，由于传热慢，需要发酵10-12h）。

牛奶变为不流动的酸奶时，停止发酵。

4置于4℃的冰箱中24h以上，待冷却老熟后便得到酸奶。

5品尝酸奶。

实验附图

我制作的酸奶 我制作的酸奶

实验讨论及心得

1谈谈固定化细胞技术的意义。

固定化技术就是将生物酶或细胞固定在一定的基质上。

与传统方法相比，该技术具有能多次使用菌体的特点，简化了操作步骤。

2试述纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的差异。

纯种发酵对无菌操作的要求较高，因为是在成分单一的发酵基质中，仅接入一种微生物，通过对该种微生物的培养，得到纯度较高的单一性产物，所以对无菌操作的要求也较高一些。

3为何有的同学用无菌滴管把海藻酸钙与酵母菌混合液滴加入CaCl2溶液时，未得到凝胶珠，而得到了不规则形状的固体？

可能是在滴加的时候没有保证逐滴加入，使得大量的混合液聚集在一起，形成了不规则形状的固体。

4在制作酸奶时，为什么要使用“无抗奶”作为原料？

“无抗奶”即不含抗生素的牛奶，在制备酸奶的时候，如果不使用无抗奶的话，牛奶中含有的抗生素会杀死原味酸奶中的乳酸菌，导致无法正常发酵，也就无法制成酸奶。