细胞工程简答论述.docx
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细胞工程简答论述
简答
1.何为单倍体的培养
答:
主要是指花药培养,即将花药在工人培养基上进行培养,从小孢子直接发育成胚状体.然后长成单倍体植株;或通过愈伤组织诱导分化出芽和根,最终长成植株.
2.植物组织培养基的主要成份包括哪些？
植物细胞培养基的组成？
答：
无机盐类、碳源、植物生长激素、有机氮源、天然物质、支持物质
3.植物单细胞的制备方法
答：
机械法、酶解法和愈伤组织诱导法
4.植物单细胞培养方法？
答：
平板培养发、看护培养法与饲养层培养、液体静置培养法、细胞悬浮培养法。
5.植物细胞的保存方法？
答：
继代培养保存法、低温保存法和冰冻保存法。
6.植物悬浮培养细胞的同步方法？
答：
物理方法：
提及选择法、冷处理法
化学方法：
饥饿法、抑制法、有丝分裂法
7.植物细胞的特性？
答：
比微生物细胞大；以非均相集合细胞团存在；生长周期长。
8.植物细胞悬浮培养生长和增殖有哪几个阶段？
答：
延迟期、对数生长期、直线生长期、减缓期、静止期和衰亡期。
9.影响植物细胞培养的因素？
答：
细胞遗传性；培养的环境条件、PH、通气、营养盐、前体、生长调节剂、搅拌和混合、光照
10.怎样建立植物细胞的两相培养？
/植物细胞的两相培养有哪两相？
答：
在培养体系中加入水溶性或脂溶性的有机物或者具有吸附作用的多聚化合物，使培养体系形成上下两相，细胞在水相中生长，合成的次生代谢物转移到有机相中。
11.★简述（植物细胞）悬浮培养具有的优点？
答：
1）可以增加培养细胞与培养液的接触面，促进营养的吸收
2）可带走培养物产生的有害代谢产物，避免高浓度集聚对细胞的伤害。
3）保证良好的单混合状态，从而获得良好的气体传递效果。
12.★简述原生质体的特征？
答：
原生质体无细胞壁障碍，可以方便的进行有关遗传操作，并可以对膜、细胞器进行基础研究；具有全能性，并能进行人工培养发育成完整植株；原生质体适合进行诱导融合形成杂种细胞。
13.植物原生质体的鉴定与活力测定方法？
答：
植物原生质体的鉴定：
1）低渗爆破法；2）荧光染色法。
植物原生质体活力测定方法：
1）染色法2）胞质环流法3）渗透压变化；4）氧电极法。
14.★简述利用培养的植物细胞诱发和筛选突变体的优点？
答：
通过植物组织或细胞培养可以获得大量的可供选择的各种变异的群体，这些群体的生长容易控制；在很短时间内完成突变体的筛选；在变异的细胞中选择突变体有利于在分子水平上研究突变机制。
15.简述由外植体或单个细胞形成愈伤组织需经过的三个步骤？
答：
启动期（或诱导期）：
主要是指细胞或原生质体准备分裂的时期，需要采用合适的诱导剂；
分裂期：
即开始分裂并不断增生子细胞的过程；
分化期：
细胞内部开始发生一系列形态和生理上的变化，分化出形态和功能不同的细胞
16.简述用于培养和其他细胞工程研究的原生质体的主要来源?
答：
主要来自于各种植物的叶片/根尖;也有来自于花粉,尤其是适合制备单倍体的原生质体;也可以从组织培养产生的愈伤组织中获得.
17.体外培养的动物细胞根据其生长方式,可分为哪几种类型?
答：
体外培养的动物细胞根据其生长方式,可分为贴附型细胞/上皮型细胞/游走型细胞/多形型细胞和非贴附型细胞.
18.动物细胞培养的特点?
答：
1）细胞之间连接复杂2）无细胞壁,比微生物细胞大;3）倍增时间长4）需氧量少5）以聚集体形式存在;6）原代细胞繁殖50袋左右即退化死亡.
19.动物细胞培养的培养办法?
答：
被称为微量培养法,是现代体外培养技术最为常用的方法之一.具体做法是将培养细胞接种在培养板的孔内,然后在二氧化碳培养箱内培养.最常用的培养板有6/24/96孔板,后者最为常用.一般都是一次性使用
20.体外培养动物细胞生长的增殖有哪几个阶段?
/动物细胞培养过程分哪几个阶段?
答：
1）原代培养期2|）传代期4）衰退期
21.动物细胞体外培养的常用培养基和细胞消化液有几类?
答：
常用培养基:
天然培养基、合成培养基、无血清培养基
细胞消化液：
胰蛋白酶溶液和乙二胺四乙酸钠溶液
22.动物细胞培养中贴壁培养的优点？
答：
1）比较容易更换培养基
2）容易采用灌注培养，从而达到提高细胞密度的目的
3）更有效的表达同一产品
4）可以方便的调节培养液和细胞比例
5）易于观察细胞生长状况
23.无血清培养基根据其成分分为哪三类？
答：
1）不含蛋白质，只有成分已知的小分子物质和带微粒元素的聚合物，价格便宜，适用于某些确立的细胞系。
2）含有大分子物质，使用的细胞株较多，但成本较高，大多无血清培养基属于此类。
3）所含成分不完全清楚，以成分简单、成本低而适用于大规模生产使用。
24.动物细胞培养必须的溶液？
答：
平衡盐水、培养基pH调整液、细胞消化液、抗生素溶液
25.动物细胞之间的连接形式有哪些？
答：
紧密连接、间隙连接、隔壁连接、中间连接、桥粒连接
26.在细胞分离技术中，常采用的细胞分离技术有哪些？
答：
1）梯度沉降分离法：
主要是根据细胞大小不同分离细胞。
2）等密度沉降分离法：
主要是根据细胞密度不同来分离细胞。
3）流式细胞仪分离法：
主要是根据细胞免疫荧光法使荧光体与细胞膜表面抗原结合，利用特殊仪器进行检测分离不同种类的细胞。
27.常用抗体检测方法有哪些？
答：
1）ELISA用于可溶性抗原（蛋白质）、细胞核病毒等抗体检测.
2）RLA用于可溶性抗原、细胞抗体检测。
3）FACS用于检查细胞表面抗原的抗体检测。
4）IFA用于细胞核病毒抗体的检测。
28.胚胎干细胞的鉴定方法？
答：
碱性磷酸酶染色；特异性表面抗原（SSEA-1）免疫荧光标记
29.简述制备单克隆抗体的过程
答：
包括动物免疫、细胞融合、选择杂交交瘤、检测抗体、杂交瘤细胞克隆化、冻存以及单克隆抗体的大量生产
30.单克隆抗体大量生产的方法有哪两种？
答：
1）体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞，从上清中获取单克隆抗体。
但此法产量低。
一般含量为10-60微克、毫升
2）体内接种杂交瘤细胞，制备血清。
此法产量较高，是目前常使用的方法。
一般含量为1-20毫克/毫升。
31.★简述ES细胞体外生长的特点？
答：
ES细胞在体外分化抑制培养中，呈现克隆状生长，细胞紧密聚集，形似鸟巢，细胞界限不清晰。
克隆周围有时会有单个ES细胞核分化的扁平状上皮细胞。
E细胞增殖迅速，一般没18-24小时分裂增殖一次。
32.何为胚胎移植？
答：
指一母畜发情排卵并经过配种后，在一定时间内从其生殖道取出受精卵或胚胎，或者体外培养受精卵发育至囊胚期，然后把它们移植到另外一头与供体同时发情排卵、但没有经配种的母畜的相应部位。
这个来自供体的胚胎能够在受体的子宫着床，并继续生长发育，最后产下供体的后代。
33.简述单倍体的优点
答：
1）由于单倍体只有一套染色体，染色体上的每个基因都能出现相应的性状，所以极易发现所产生的突变，尤其是隐形突变，所以，单倍体是研究基因或基因剂量效应，进行染色体遗传分析的理想实验材料。
2）由于通过人工方法使单倍体的染色体加倍就可以获得纯合二倍体，因此在育种上具有极高价值。
34.简述细胞重组的集中方式。
答：
1）胞质体与完整细胞重组形成胞质杂种
2）为细胞与完整细胞重组形成微细胞异核体
3）胞质体与核体重新组合形成重组细胞
35.在细胞分离技术中，根据细胞哪些特性将其分离？
答：
1）细胞大小5）细胞中的一个或多个成份的荧光强弱
2）细胞密度6）细胞对其他介质的吸附作用
3）细胞便面电荷
4）细胞便面标志
36.常用哺乳动物细胞转染的方法有哪两种？
答：
1）暂时转染：
质粒在宿主细胞中不必停留很长时间，DNA被转录成mRNA，随后翻译成蛋白，并不进入细胞基因组。
2）永久性转染：
反转录病毒载体法可以产生永久有效的转染。
37.简述外源基因导入受体细胞所采用点穿孔法的概念、特点及过程？
答：
这种方法是利用脉冲电场提高细胞膜的通透性，在细胞膜上形成纳米级的微孔，从而使外源DNA转移至细胞中。
特点：
具有简单、高效，因而广泛应用于培养细胞的基因转移。
具体操作过程是将受体细胞悬浮于含有待转化DNA的溶液中，在含有上述悬浮的电击池两端试驾短暂的脉冲电场，是细胞膜产生细小的空洞达到增加通透性的效果。
此时，外源DNA片段能不经过胞饮作用就能直接进入细胞质。
38.简述胚胎工程队家畜繁殖的意义
答：
1）可发挥优良母畜的繁殖潜力
2）可促进家畜改良的速度
3）可保存遗传资源
4）作为胚胎操作的基础
39.简述细胞融合几个主要步骤
答：
细胞融合主要经过了两原生质体或细胞相互靠近、细胞桥形成、胞质渗透、细胞核融合几个步骤。
40.简述转基因动物的意义
答：
利用此技术在建立人类疾病动物模型、加速动物育种、研究真核生物基因表达调控机制，一级在哺乳动物特意组织系统内生产药用蛋白等方面具有重要的意义。
41.用于动物细胞与组织培养的生物反应器应具备哪些要求？
答：
1）混合系统设计应能均匀、温和的混合状态、剪切力小、保证良好的传质效果。
2）反应器内空间利用率高，选用合适的载体系统和材料
3）能严格保证无菌环境
4）能够方便、快速的实现培养液的连续添加、样品的采样和观察
42.简述细胞融合技术中生物法中的病毒促使细胞融合的主要步骤
答：
1）两个原生质体活细胞在病毒联接作用下彼此靠近
2）通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间想和渗透。
胞质相互渗透
3）两个原生质体的细胞核相互融合，融为一体。
4）进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种子细胞。
43.胚胎工程采用的技术主要有哪些？
答：
体外受精、胚胎移植、胚胎分割与融合、胚胎性别鉴定、胚胎冷冻技术和基因导入。
其中前两者是胚胎工程的核心技术。
44.简述多倍体产生的途径有哪些？
答：
原种或杂种所形成的未减数配子的受精结合。
原种或杂种的合子的染色体加倍
45.简述胚胎细胞核移植法过程
答：
将没有着床的早期胚胎分散成单个的细胞球，在电流的作用下，是单个细胞与去除染色体的没有受精的卵母细胞融合。
发育成胚胎后，移入受体妊娠产仔。
原则上一个早期胚胎有多少个细胞，通过这种方法就可以克隆出多少个个体。
还可将细胞反复克隆出更多的胚胎，产生更多克隆动物。
46.简述利用原生质体融合培育新植物的过程及意义
答：
原生质体的培养一般经过细胞壁再生、细胞分裂成细胞团、愈伤组织、分化成芽和根、完整植株这几个过程。
从而可实现优良品种的快速繁殖，而且当与其它改变遗传的技术相结合，就有可能实现新品种的培育。
47.什么是染色体工程？
有何意义？
答：
是人们按照一定的设计，有计划的消减、添加或代换同种或异种染色体，从而达到定向改变遗传性和选育新品种的一种技术。
染色体工程在培育抗病新品种上有重要意义，而且也是基因定位和染色体转移等基础研究的有效手段。
由于染色体数目上的变异，尤其是染色体组数目上的改变在动物新品种培育方面也具有重要意义。
48.转然后细胞是如何进行鉴定的？
答：
可以设计含有抗性药性基因的外源DNA载体，然后通过选择性培养基进行转染细胞的筛选。
除此之外，还可以通过提取染色细胞的DNA，以适当限制性内切酶酶切后进行Southern转移分析，检测细胞中是否有被转移的外源基因。
49.进行胚胎移植时，是如何使受体和供体同步发情的？
答：
1）母体加孕酮激素类药物，并在血液中保持一定量的水平，造成人为的黄体期，使卵巢内卵泡的发育和成熟受到抑制。
在卵泡发育状态处于同一时期时，解除人工抑制，墓处即可同步发情排卵。
2）通过药物认为的控制黄体技能，促使黄体溶解是孕酮水平下降，导致卵泡发育一致，母畜就可以比较同期的发情排卵了。
50.简述基因转移的生物学方法中反转录病毒载体的特点。
答：
是一种传染性病毒，含有RNA遗传物质，可将非病毒基因转移至分裂细胞，（2分）感染进细胞的RNA反转录产生DNA互补链，该DNA又可作为合成第二条DNA链的模板。
这两条DNA链可渗入受体细胞的基因组DNA中。
（2分）之后，病毒利用宿主细胞的酶体系自行转录与复制，从而可以是病毒拷贝基因组稳定的进入宿主细胞。
反转录病毒载体可以获得稳定、有效的转染。
可用于不易转化的细胞或原代培养细胞。
51.简述胚胎干细胞核移植法。
答：
将胚胎或胎儿的原始生殖细胞经过抑制分代培养后，细胞和单细胞数量增多，（1分）因此，每个细胞仍然具有细胞全能性而发育成个体的能力，这称为胚胎干细胞系。
（2分）在利用细胞核移植技术
可以比胚胎核移植产生更多的动物个体。
目前仅成功克隆出成体鼠。
52.何为脂质体包埋？
答：
脂质体为人工膜泡，可作为体内外物质传送的载体。
将需转移的外源DNA或RNA包埋于脂质体内，由于脂质体具有磷脂双层结构，与细胞膜类似。
因此可以与受体细胞膜融合，从而将外源DNA转入宿主细胞。
53.简述梯度沉降分离法
答：
根据细胞大小不同分离细胞。
细胞在单位重力的作用下，在密度介质或在低离心力作用下通过梯度密度溶液沉降。
由于细胞大小不同，沉降速度不同，细胞大，沉降快。
54.简述染色体在数目和结构变异时可能出现的几种情况
答：
结构变异；染色体易位；染色体缺失；染色体倒拉；染色体重复。
数目变异：
正被踢；非整倍体。
55.简述染色体分离时采用的流式细胞分类器法的原理
答：
利用不同染色体上，基因碱基不同对DNA特异性染料结合量的不同，从而产生不同荧光波长，这样就可以将相同的染色体收集在一起而分离。
56.何谓胚胎性别鉴定？
胚胎性别鉴别采用的方法主要有哪些？
答：
胚胎性别鉴别是通过细胞生物学和分子生物学的方法识别胚胎性状，有效地控制动物后代的性别比例，从而达到提高畜禽生产力的一种技术。
一般有细胞遗传分析、X染色体关联酶测定、胚胎发育速率的差异性分析、雄性特异性抗原检测、Y染色体特异性DNA探针杂交等。
57.简述细胞核移植的定义和主要技术要点
答：
细胞核移植是一种利用显微操作技术，将一种动物的细胞核移入同种动物的去核成熟卵内的精细技术。
主要包供体和受体的准备、去卵膜和卵核、供体细胞制备、移核等步骤。
58.简述单倍体育种的优越性有哪些？
答：
1）可以克服杂种分离的困难，缩短杂交育种时间，一般只需一年就可迅速获得自交系，两年就可获得纯系。
2）大大提高选育效率
3）能克服远缘杂交的不孕性，创造出新物种。
论述题
1.试说明细胞工程的主要研究内容?
答:
细胞工程涉及的领域相当广泛,根据研究对象不同,可以将细胞工程分为微生物细胞工程、植物细胞工程和动物细胞工程三大类。
就其技术范围而言，既有长期以来得到了广泛引用的动物细胞与组织培养技术，又有近20年来才发展起来的细胞融合技术、细胞拆合技术、染色体导入技术、胚胎和细胞核移植技术，更有与基因工程技术结合以基因转移技术为核心的细胞遗传工程。
从研究水平来划分，细胞工程可分为细胞水平、组织水平、细胞器水平和基因水平等几个不同研究层次。
具体内容如下：
①动植物细胞与组织培养
②细胞融合
③染色体工程
④胚胎工程
⑤细胞遗传工程
2.试综述细胞工程的重要应用？
答:
1）优质植物的快速繁殖
2）动物胚胎工程快速繁殖优良、濒危品种。
3）利用动、植物细胞培养生产活性产物、药品
4）新型动植物品种的培育
5）供医学器官修复或移植的组织工程
6）转基因动植物的生物反应器工程
7）珍稀动植物资源的保存与保护
8）在遗传学、发育学等领域的理论研究
9）在能源、环境保护等领域的应用
3.请写出细胞工程的定义？
并试谈细胞工程的重要应用？
答:
细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或细胞产品的一门综合性科学技术。
应用:
细胞工程利用基因工程的一些技术实现转基因动物的制备，实现转基因生物反应器、人体器官的动物来源培养、基因重组细胞的培养等。
细胞工程技术为微生物工程、生物化学工程提供经过遗传性改良的微生物、融合细胞、筛选出稳定的动植物细胞系等培养对象。
细胞工程可以通过国细胞融合、转基因等技术改变生物的遗传性状或实现新型生物的构建，这样就为蛋白质药物或酶制剂生产提供可能的途径。
4.试写出植物组织培养的分类及基本步骤？
答:
分类：
根据外植体不同，可分为植株培养、器官培养、组织培养。
根据培养方式不同，可分为固体培养和液体培养。
液体培养又可分为振荡培养、旋转培养和静止培养。
基本步骤:
1）培养材料的选择
2）培养材料的消毒
3）制备外植体
4）接种和培养
5）根的诱导
6）组织苗的联苗移栽
5.试说明为什么植物细胞工程成为植物新品种选育的重要技术手段?
答:
与传统大田育种相比,利用组织培养技术进行新品种选育具有效率高、周期短、纯度高等优点。
1、突变育种：
所谓突变是指植物遗传物质DNA碱基数目的改变。
突变可以由自然环境的改变而引起，也可由人为改变环境因素而引起。
前者叫自发突变，后者称诱发突变。
诱发突变可以大大提高突变率。
2、原生质体融合核细胞杂交：
通过原生质体融合和细胞杂交可以克服远源有性杂交中的不亲核性，提供新的核质组合，从而获得新物种。
3、花药、花粉培养与单倍体植株：
花药培养因其取材培养的是植物雄性生殖器官的一部分——花药而得名。
由于单倍体植物没有显性基因的掩盖作用，易于选择，并能在很短时间内获得纯合二倍体植株，因此在育种实践中具有独特的优越性。
6.植物细胞培养的意义并举例说明其应用？
答:
1）植物细胞代谢产物的生产在可控条件下生产，可提高产物产量，而且不受季节、地域等限制
2）无菌条件下生产，排除病菌和害虫的影响。
3）可以通过特定的生物转化途径获得均一的有效成分
4）可以探索新的生物合成路线，获得新产物。
举例：
药用代谢物生产
人参天然资源有限，而且人工栽培周期长，可以在生物反应器中悬浮培养人参细胞或毛状根，从中生产人参皂苷。
7.试述传代培养技术的概念、关键和主要步骤？
答:
当原代培养成功后，细胞分裂增殖扩展成片，沾满器皿表面。
这是需要对其分离重新培养，这一操作过程称之为传代。
根据细胞的特点，适度掌握细胞消化时间和选择适宜的方法很关键。
步骤如下：
吸出培养瓶内旧的培养液；加入胰蛋白酶和EDTA混合液盖满瓶底；2~5min后检查，如有细胞间隙变大或细胞间质回缩现象。
终止消化；吸出消化液，加入Hanks液，轻轻转动一面细胞流失，洗去残留的消化液。
如果单用胰蛋白酶，可直接加入培养液；用吸管轻轻吹打瓶壁，使细胞脱落制成悬液，技术后记录其浓度；重新接种培养。
8.什么是干细胞？
几类干细胞分化功能有什么不同？
干细胞培养有什么意义？
答:
干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
从具有的分化功能上讲，干细胞可分为单能干细胞、多能干细胞、和全能干细胞。
意义：
组织和器官修复——
基因治疗——
9.简述基因导入受体细胞的化学方法的主要原理和类型?
答:
主要原理:
改变细胞膜透性,增加DNA与细胞的吸附。
类型：
1）DEAE-葡聚糖法：
这是最早的动物转染方法，主要是将外源DNA片段与DEAE—葡聚糖等高分子碳水化合物混合，这样DNA链上带负电的磷酸骨架便被吸附于DEAE的正电荷基团上，从而形成DNA大颗粒。
后者粘附于受体细胞表面，并通过胞饮作用进入细胞内。
该方法的转化率较低
2）磷酸钙—DNA共沉淀法：
这种方法是受二价金属离子能促进细胞吸收外源DNA的启发而发展起来的。
当核酸以磷酸钙—DNA共沉淀的形式存在时，细胞摄取DNA的能力显著加强。
3）脂质体载体包埋法：
脂质体为人工膜泡，可作为体内外物质传送的载体。
将需要转移的外源DNA或RNA包裹于脂质体内，由于脂质体具有磷脂双层结构，与细胞膜类似，因此可以与受体细胞膜融合，从而将外源DNA转入宿主细胞。
10.试说明动物细胞生物反应器的特点、类型及其应用？
答:
特点：
剪切力小；空间利用率高；无菌；温度、溶解氧、酸碱度和二氧化碳浓度控制；实现培养液的连续添加、样品的采样和观察。
类型：
微载体式；中空纤维式；灌注培养式；旋转壁式等
应用：
生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗、激素和抗体等。
11.简述不同转基因生物反应器的特点比较？
答:
微生物反应器：
1）优点：
可以利用发酵工程技术大规模生产；胞外活性物质制备容易。
2）不足：
哺乳动物或人类的基因往往不能表达。
有些表达了，却没有活性，需要进一步修饰；真核生物蛋白质翻译后加工的精确性有限；需要大型发酵设备和车间；细胞菌发酵常形成不溶聚合物，使下游加工成本增加。
植物反应器：
1）优点可大规模种植，上游成本较低。
作为食物可省去下游加工步骤；转基因植物自交后可得到稳定遗传的遗传性状；可利用植物细胞和细胞培养技术实现大量制备。
2）不足：
植物种植受季节、环境影响；需要专门的活性物质分离设备与技术；植物细胞培养需要发酵罐等设备和技术支持，成本较高。
动物细胞反应器：
1）优点：
易培养，实现大规模制备；通过乳腺和血液制备活性物质简单易行；可以通过动物细胞培养实现大量制备。
2）不足：
细胞培养需要昂贵的培养基和设备；转基因动物制备成本昂贵；转基因动物易产生一些伦理问题。
12.多倍体育种的技术方法有哪些？
答:
1）生物学方法主要包括利用胚乳培养、体细胞杂交等。
2）物理学方法主要包括温度激变、机械创伤、电离辐射、离心、水静压法和高盐高减法。
其中温度激变法包括冷休克法和热休克法两种，该法廉价、易操作，是诱导动物细胞多倍体的常用手段，也适合大规模生产使用。
水静压法，就是采用较高的水静压抑制第二极体的放出或第一次卵裂来产生多倍体，该法有诱导率高，处理时间短，对受精卵损失小、成活率高的特点。
3）化学方法主要是利用一些化学物质可阻止第二极体的排出或受精卵的有丝分裂而产生三倍体或四倍体，主要有细胞松弛素B和秋水仙素两种化学试剂。
13.动物细胞融合过程中，哪些因素影响其融合过程？
答:
在动物细胞融合过程中，除促溶剂外，其他如细胞性质、温度、pH、离子强度及离子种类等均会影响细胞融合效率。
1）首先，亲本细胞表面性质影响较大，表面覆盖绒毛而不规则者较易融合，而表面光滑者较难融合
2）细胞种类琐，融合效果也不同，如腹水癌及株化细胞较易融合，而淋巴细胞或血球细胞几乎不融合
3）细胞融合时需要适宜温度和运动状态
4）细胞融合过程中，通常耗氧量较大，缺氧时经常不融合
5）有些细胞融合时需要Ca2+，否则不融合，细胞蛋白质也发生变化
6）最适合的pH为7.4-7.8之间，在此范围之外，融合率均较低
14.请述细胞破碎的方法有哪些种类？
答:
1）超声波破碎法：
原理是超声波发生器产生高强度超声信号，经换能器传至与其接触的细胞溶液中，有声波冲击和振动产生的剪切力是细胞破碎，不足是破碎过程中会产热，应该注意冷却，有些生物大分子不宜采用。
2）反复冻融法：
可使细胞溶液或组织细胞浆在超低温冰箱或液氮罐内冻结后，在37°C复温融化,重复3-4次操作使细胞壁破碎.
3）化学裂解法:
在细胞悬浮液中加入某些化学物质如十二烷基硫酸钠等实使细胞膜裂解.在使用该方法的同时经常要辅助以一些机械的方法才能使细胞在短时间内完全破碎,由于化学裂解剂会干扰分析,在细胞裂解后应注意清除化学裂解剂.
4）高速组织捣碎法:
主要是借助高速使组织细胞被高速旋转的叶片破碎,由于也会发热,可能导致分离物的降解,因此不能时间过长,必要时可使用循环水冷却.
15.简述原核胚胎期显微注射法的基本原理及主要步骤？
答:
是通过显微操作仪将外源基因直接用注射器注入受精卵，利用受精卵繁殖中DNA
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