维生素B12检测作业指导书医学检验.docx

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维生素B12检测作业指导书医学检验

《文件已阅声明表》

《Procedurecirculationform》

文件名称:

维生素B12检测作业指导书表号:

KM-MP03.02.02

已阅声明：

本人承诺已了解此文件中的相关内容,今后的工作中将严格按照此文件执行,不随意对外传阅此文件,如有因与文件不相符的操作,责任由本人承担。

（Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument.Iwillkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）

阅读人签名表

姓名（NAME）

职务（POSITION）

签名（SIGNATURE）

签名日期（DATE）

《文件修改记录页》

《Procedureamendmentform》

表号:

KM-MP03.02.03

序号

NO.

页码（Page）

内容更改说明（DescriptionofModifiedcontents）

审批人（Approvedby）

批准生效日期（Approveddate）

1

改版

《文件信息表》

《Procedureinformationform》

表号:

KM-MP03•02•04

文件名称

TitleofDOC.（Doc.Code）

维生素B12检测作业指导书（KM-SOP0300•323）

版本号（EditionNo.）

Edition4.0

生效日期（Operativedate）

2008-03-13

文控部门

（Doc.ControlDept.）

实验室文控室

回顾日期/签名（Reviewdate/signature）

回顾日期（Reviewdate）

回顾人员签名（Signature）

替代文件（Replaces）

维生素B12检测作业指导书（Edition3.0）

存放地点（Location）/持有人（Holder）

No.地点（Location）持有人（Holder）

1诊断部文控室陈彬

2发光室段学成

作者签名/日期（Authorsignature/date）

姜小琴

审批人签名/日期（Authorizedby:

Signature/Date）

陈建波

接收人签名/日期

（Receiptor/Date）

副本数（copyNo.）

本文件是第个文件拷贝/共发放2个文件拷贝。

维生素B12检测作业指导书

（StandardoperationprocedureforanalysisofVitaminB12）

1原理（Testprinciple）：

采用竞争法原理，整个过程27分钟完成。

●第1步：

15μl标本与维生素B12预处理试剂1和预处理试剂2混匀，结合的维生素B12被内源性内因子释放。

●第2步：

将预处理标本与钌标记的内因子混匀，形成维生素B12-结合蛋白复合物，其数量取决于标本中待测物的浓度。

●第3步：

加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的维生素B12，后者与钌标记的内因子上仍未占据的位点结合，形成钌标记的内因子-生物素标记的维生素B12复合物。

此复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。

●反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。

●检测结果由机器自动从标准曲线上查出。

此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。

2样本收集和储存（SpecimenCollectionandStorage）：

2.1采集要求（specimencollection）：

采血前病人应空腹。

●血清（serum）：

按标准常规方法采集。

●血浆（plasma）：

肝素锂和EDTA-K3抗凝。

2.2标本用量（volume）：

常规抽血量最少2ml,最少血清/血浆标本量为0.6ml,单次用量50ul,仪器加样量（samplevolume）15ul。

2.3标本储存条件（samplestorage）：

标本2-8℃可稳定2天，-20℃可稳定2个月。

只能冻融1次，避光保存。

含沉淀的标本使用前需离心。

不要使用加热灭活的血清。

标本和质控品禁用叠氮钠防腐。

2.4拒收（specimenrejection）：

溶血、脂血、黄疸标本拒收，

3试剂（Reagent）：

3.1Elecsys维生素B12试剂盒，货号11820753

3.1.1试剂内组份：

试剂包装，100个测试

PT1：

预处理试剂1

PT2：

预处理试剂2

M：

链霉亲和素包被的微粒

R1：

钌标记的内因子

R2：

生物素化的维生素B12

3.1.2未随试剂盒提供的组分

●Elecsys维生素B12定标液（CalSet）货号11820869

●Elecsys通用质控品（PreciControl）货号11731416或伯乐质控品（BL）1和3

●Elecsys通用稀释液货号1732277

●Elecsys系统缓冲液（ProCellM）货号12135019

●Elecsys测量池清洗液（CleanCellM）货号12135027

●Elecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141

●Elecsys反应杯/吸样头盒（AssayCups/AssayTipsCombimagazineM）

货号12102137

●Elecsys废物盒（wasteliner）货号03023150

●Elecsys系统清洗液支架（SysCleanAdapterM））货号03027651

●Elecsys系统清洗液（SysClean）货号11298500

3.1.3储存和稳定性：

●存放在2－8度，切莫倒置。

●未开封，可稳定至标明的保质期

●开封后，2－8度12周；

●放在Elecsys601上，8周；

3.2试剂准备（reagentpreparation）：

将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。

Putreagentfromrefrigeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recordtheresults.

4仪器（Instrument）：

ElecsysCobas601。

仪器准备（Prepareapparatus）：

使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统清洗液（SysClean）、测量池清洗液（CleanCellM）、反应杯/吸样头盒（AssayCups/AssayTipsCombimagazineM）、废物袋（WasteLiner）、系统缓冲液（ProCellM）的足够。

然后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。

如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。

将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。

仪器自动控制试剂温度和开/并试剂瓶盖。

5安全防范（SafetyPrecautions）：

操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。

6校准（Calibration）：

6.1校准品：

ElecsysCobas601原装校准品。

要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。

Stopusingoverduecalibrationmaterial。

Useitwithinexpirationdate，storagein2-8℃。

复溶：

用复溶专用加样枪准确吸取1ml去离子水于瓶中，溶解静置30分钟，混匀并用盖容器分装200ul/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，于-20℃冻存备用。

Labelconfectingdate,calibrationlot。

Personwhoconfected，expirationdate。

复溶后校准品成分的稳定性：

保存于-20℃，可稳定2个月。

6.2每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求：

●试剂批号改变（Reagentlotchanges）

●同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）。

●同一试剂盒在分析仪上使用超过7天

●根据需要：

如质控数据超过额定的限度。

Recalibrationbasedonqualitycontrolproblem

6.3步骤：

在校准（CALIBRATION）菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少200ul的1、2校准品并放到已指定位置的校准架中，后放入样本通道中。

然后在计算机屏幕上选取相应的项目及所需的定标方式（BLANK、2POINTS或FULL、SPAN），后点击SAVE键，再点击START键。

6.4结果判断：

仪器会自动提示是否通过校准。

如果未通过会有相应的原因解释以及解决方法的指导。

校准后必须及时做质控且须获得通过。

6.5校准周期：

质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。

如果质控超过限度有需要校准时，应重新校准。

7操作过程（ProceduralSteps）：

7.1样本准备：

先检查标本是否合格（标本与作业指导书上标本要求是否一致），核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。

将带有编号的标本离心取血清（serum）/血浆（plasma），将待测物加入相应的样本管。

7.2取出空样本架，将含有血清（serum）/血浆（plasma）的样本管加入样品架中，并将实验号与对应的样品架位置记录下来，将样品架推入样品槽中。

因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul（样本用量15ul）。

实验号与样本架号“一一”对应以便于联机。

7.3在[WORKLIST]界面点[TestSelection]输入实验号，指定VB12项目。

结果出来后，在[WORKLIST]中的[DataReview]可看到该样本所做的项目和结果。

点击打印，作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。

数据联机入系统：

计算机：

设备管理→接口管理→点击罗氏全自动化学发光仪→点击开始，出现预处理窗口→仪器：

进入[WORKLIST]中的[DataReview]→选择需要传送实验号→按Senttohos，再按sent，结果即传输。

数据审核：

在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下（即数据传送和接收无中断），仔细核对每一个数据有无错误（如：

误传、漏传），是否与临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。

8质量控制（Qualitycontrol）：

使用伯乐质控品1和3做质控。

在测定时，对于不同浓度范围的标本，每24小时必须进行一次质控测试。

每次更换试剂盒或进行定标后也须进行质控测试。

每个实验室须根据各自的情况确定合适的质控间隔和范围。

测定值必须处于规定的范围内。

VB12最大允许误差ALE为30%，室内质控CV为L:

2.98;H:

3.34，偏移为7.29%,过程稳定性<2%.根据公式:

△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得,低值选择的质控规则:

13s/22s/R4s/41swN=2;高值选择的质控规则13s/22s/R4s/41swN=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理

9稀释（Dilution）：

高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。

建议手工1:

2稀释。

稀释后的标本维生素B12含量必须高于1000pg/ml（738pmol/l）。

结果应乘上2。

注意：

稀释标本的维生素B12含量可能不呈线性，这可能是因为通用稀释液中含有低浓度的内源性维生素B12。

如要做线性，建议用低维生素B12的混合血清。

稀释后的标本维生素B12含量高于2000pg/ml（1476pmol/l）时，这种内源性维生

素B的干扰可忽略不记。

10计算（Calculations）：

对每一个标本，仪器会自动计算维生素B12含量，单位是pg/ml或pmol/l。

换算方法是pg/ml×0.738=pmol/lpmol/l×1.36=pg/ml

11参考范围（ExpectedValues）：

243-894pg/mL

12结果解释（InterpretationofResults）：

可以直接报告所检测结果，无须进行结果解释。

13方法的局限性（MethodLimitations）：

13.1精密度（Precision）：

13.1.1批间精密度：

Mean

SD

CV（%）

379.835

11.311

2.98

918.377

30.645

3.34

13.1.2批内精密度：

Mean

SD

CV（%）

281.6600

2.8749

1.02

13.2灵敏度（Sensitivity）：

<30pg/ml（厂商30pg/ml）

13.3特异性（Specificity）：

N/A

13.4分析测试范围（AMR）：

135.6~1627.8pg/ml（厂商30-2000pg/ml）

VB12浓度低于检测最低限则报告为<30pg/ml,而高于检测上限则报告为>2000pg/ml

13.5病人结果报告范围（CRR）：

135.6~3255.6pg/ml（厂商30-4000pg/ml）

VB12浓度低于检测最低限则报告为<30pg/ml,而高于检测上限则报告为>4000pg/ml

13.6干扰物质（InterferingSubstances）：

●该方法不受黄疸（胆红素<65mg/dl）、溶血（血红蛋白<1000mg/dl）、脂血（脂质1500mg/dl）和生物素<50ng/ml干扰。

●接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。

●不受类风湿因子干扰（1500IU/ml）。

●54种常用药物经试验对本测定无干扰。

●Elecsys维生素B12测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。

13.7注意事项（Notices）：

仅供体外诊断使用。

13.8其他（Others）：

方法学比较或项目的特殊要求等。

14临床意义（Clinicalsignificance）：

胃肠道手术后，胃肠道疾病、舌乳头萎缩、脊髓联合变性、巨幼红细胞性贫血时VB12下降。

一般缺乏3-6年后才表现症状。

母乳VB12不足可引起婴儿VB12严重缺乏。

肝病、增生性疾病、慢粒、真性红细胞增多症时VB12升高。

15参考文献（References）：

1）HerbertV.Drugseffectiveinmegaloblasticanemias.InGoodmanLSandGilmanA（eds）:

ThePhar-macologicalBasisofTherapeutics,5thEd.MacMillanCo.1975;324–1349.

2）RossGIM.VitaminB12inbodyfluids.Nature.1950;166:

270.

3）BarakatRM,EkinsP.AssayofvitaminB12inblood:

Asimplemethod.Lancet.1961;i:

25–26.

4）RothenbergSP.AssayofserumvitaminB12concentrationusingCo57-B12andintrinsicfactor.Pro-ceedingsoftheSocietyforExperimentalBiologyandMedicine.1961;108:

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5）RothenbergSP,DaCostaM,RosenbergBS.Aradioassayforserumfolate:

Useofatwo-phasese-quentialincubation,ligand-bindingsystem.NewEngJMed.1972;285（25）:

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6）GutchoS,MansbachL.SimultaneousradioassayofserumvitaminB12andfolicacid.ClinChem.1977;23:

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7）KolhouseJF,KondoH,AllenNC,PodellAB,AllenRH.Cobalaminanaloguesarepresentinhumanplasmaandcanmaskcobalamindeficiencybecausecurrentradioisotopedilutionassaysarenotspecificfortruecobalamin.NewEngJMed.1978;299（15）:

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9）DepartmentofLabor,OccupationalSafetyandHealthAdministration–29CFRPart1910.1030–Occu-pationalSafetyandHealthStandards.BloodbornePathogens.Fed.RegisterJuly1,1998;6:

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10）CouncilDirective（90/679/EEC）.OfficialJ.oftheEur.Communities.No.L374fromDec.31,1990:

1–12

11）DataonfileatRocheDiagnostics.

12）NCCLSProposedStandard:

PSLA-12,GuidelinesforEvaluatingaB12（COBALAMIN）Assay,March1980.

13）BablokWetal.AGeneralRegressionProcedureforMethodTransformation.JClinChemClinBiochem.1988;26:

783–790.

14）ELECSYS维生素B12试剂说明书

15）中华医学检验全书

16）ELECSYSCOBAS601操作说明书