酶联免疫分析检测LH.docx

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酶联免疫分析检测LH

酶联免疫分析检测（LH）

人促黄体生成素

概述

人促黄体生成激素（hLH）是由垂体前叶分泌的糖蛋白激素，其分子量大约为30000，由两条多肽链（即a和b亚单位）组成。

LH的a亚单位由89个氨基酸残基组成，并与FSH和hGG的a亚单位的结构相同，b亚单位在上述激素之间是不同的，从而赋予各激素各自的生物及免疫特性。

在女性体中，LH在卵泡期与FSH一起促进卵泡的成熟、雌性激素的合成和分泌：

促进排卵和使排卵后的卵泡转变为黄体。

促进间质生长。

并促进黄体合成和孕激素与雌性激素的分泌。

男性LH促进睾丸间质细胞增生，并促进其合成和分泌睾酮。

由于LH和FSH的作用提互相协同的，故二者常同时测定。

LH增高见于Klindfelter综合症，Turner综合症，性腺切除后及促性腺激素产生肿瘤；减低见于西蒙氏病，席汉氏综合症，肥胖性生殖器退化综合症，垂体性侏儒，睾丸肿瘤，卵巢肿瘤，神经性厌食及使用雌激素后。

原理

本公司生产的LH微孔法检测试剂盒采用双抗体夹心酶标免疫技术定性检测血清中hLH水平，这种方法应用高亲合性、高选择性、高敏感度度的单克隆及多单克隆hLH抗体配伍，快速检测出标本中hLH水平，此方法使标本、酶标抗体及固相抗体同步反应，当标本中含有hLH时，特异性的形成固相抗体——抗原——酶标抗体复合物，并结合在微孔壁面，洗去多余的酶标抗体，再加入酶底物显色。

试剂组成

1.微孔反应板：

96孔，用抗人促黄体生成激素多克隆抗体包被孔反应板，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2.酶结合物：

一瓶，5ml，含抗单克隆与辣根过氧化物酶的结合物，含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂,2-8℃保存,有效期内稳定.

3.标准品:

七瓶,每瓶1ml,含人促黄体生成激素浓度分别为0,5,10,25,50,100,200mIU/ml的血清标准品,含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂,2-8℃保存,有效期内保持稳定.

4.显色A;一瓶,7.0ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存,有效期内保持稳定.

5.显色B：

一瓶，7.0mL,含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存,有效期内保持稳定。

6.洗液：

一瓶，25ml，10倍浓缩洗液，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存,有效期内保持稳定。

7.终止液：

一瓶，7ml，含INU2SO4溶液2-8℃保存,有效期内保持稳定。

注：

病人标本无需特殊制备（前处理）

操作步骤

1.将所需用量的微孔条放置在支架上：

2.在分别注明标号的反应微孔中依次加入50u标准品，质控血清，待测定标本（用微量加样器加样）；

3.每孔加入100ul酶结合物，轻轻振荡微孔支架，充分混匀；

4.在37℃水浴箱或温箱中温育60分钟。

5.将各孔液体弃尽，用洗液（或蒸馏水PH=7.0±0.5）冲洗五次,每次冲洗应将水分弃尽,最后一次冲洗后将微孔支架倒置在吸水纸上吸尽残余水分,切勿擦拭反应微孔内壁

6.每孔加1滴（50ul）显色液A,再加1滴（50ul）显色液B,充分混匀,在室温（18-25℃）下避光反应15分钟.

7.显色反应15分钟后,每孔加1滴（50ul）终止液,并混匀;

8.以显色液A、B、终止液（各1滴）的混合液体用空白孔，用微孔型酶标仪在450nm波长下依次以空白、标准品，标本的顺序读记吸光度；

9.应在加终止液后的30分钟内读取吸光度。

结果计算

1.在普通坐标纸上，以标准品吸光度对各个标准品浓度（mIU/ml）用图，吸光度值作Y轴，浓度作X轴，画出标准曲线。

2.在标准曲线上，以各待测标本的吸光度值，查出其对应的hLH的浓度。

3.所有稀释的标本需乘以相应的稀释倍数来进一步推算其浓度。

正常值范围

每个实验室都应根据本实验室条件及接触的人群作出自己实验室正常值范围。

下列正常值范围。

下列正常值范围为本公司提供的参考值：

儿童：

〈2mIU/Ml

男性：

青春期3.4-5.0mIU/ml

成人2.6-12.6mIU/ml

女性:

卵泡期5-30mIU/ml

排卵期25-150mIU/ml

黄体期3-30mIU/ml

绝经期30-130mIU/ml

技术指标:

灵敏度:

2mIU/ml

注意事项:

1.实验室水箱温度:

37℃,实验前必须检查.

2.试剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程室温18-25℃。

3.定期检验移液器是否准确。

4.严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。

5.每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。

6.注意冼板时间，每次冼后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。

7.酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免避免仪器内有液体未发现影响结果。

8.六项指标相互关联，遇异常情况及时与临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。

9.试剂使用后应及时放回冰箱。

10.显色B存取时，应避免光线直接照射。

11.未用完的微孔板放在封口袋内保存。

酶联免疫分析检测（FSH）

促卵泡生成激素

概述

促卵泡生成素（FSH）可刺激睾丸支持细胞发育，并促进产生一种能结合雄性激素的蛋白质。

通过这种蛋白质，可使发育生殖细胞发育，并分化为成熟的精子。

促卵泡生成素（FSH）对女性有促进卵泡生成、成熟，促进颗粒细胞增值、引起卵泡分泌，与LH协同作用促进排卵等作用。

它是研究和判断下丘脑——垂体——性腺轴功能的检查方法，用于预测排卵时间、对内分泌治疗的监测，对不孕症的诊断都有重要的意义。

原理

本公司的促卵泡生成素试剂盒采用双抗体夹心法测定FSH。

FSH由a亚基和B亚基组成。

试剂盒中将抗——a亚基的单克隆抗体包被于微孔板上，制备成固相抗体，用辣根过氧化物酶标记抗——B亚基的单克隆抗体若检测标本中含FSH，则FSH被微孔板及酶联捕获。

洗去多余的酶联抗体，再加入酶底物显色。

试剂组成

1.微孔反应板：

96孔，用抗促卵泡生成激素单克隆抗体包被微孔反应，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2.酶结合物：

一瓶，5ml，含促卵泡生成激素单克隆抗体与辣根过氧化物酶的结合物，含有防腐剂及蛋白稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

3.标准品：

六瓶，每瓶1ml，含促卵泡生成素浓度分别为0，5，10，25，50，100mIU/ml的血清标准品，含有防腐剂及蛋白稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

4.显色A：

一瓶，7ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

5.显色B：

一瓶，7ml，含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存，有效期内保持稳定。

6.洗液：

一瓶，25ml，10倍浓缩洗液，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

7.终止液：

一瓶，7ml，含1NH2SO4溶液，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

注：

病人标本无需特殊制备（前处理）

操作步骤

1.将所需用量的微孔条放置在支架上；

2、在分别注明标号的反应微孔中依次加入50ul标准品，质控血清，待测标本（用微量加样器加样）；

3、每孔加入100ul酶结合物，轻轻振荡微孔支架，充分混匀；

4、在37℃水浴箱或温箱中温育60分钟；

5、将各孔液弃尽，用洗液（或蒸馏水PH=7.0±0.5）冲洗五次,每次洗应将水分弃尽,最后一次冲洗后将微孔支架倒置在吸尽残余水分,切勿擦拭反应微孔内壁;

6、每孔加1滴（50ul）显色液A,再加1滴（50ul）显色液B,充分混匀;在室温（18-25℃）下避光反应15分钟;

7、显色反应15分钟后,每孔加1滴（50ul）终止液,并混匀;

8、以显色液A、B、终止液（各1滴）的混合液体作空白孔，用微孔型酶标仪在450nm波长下依次以空白、标准品，标本的顺序读记吸光度；

9、应在加终止液后的30分钟内读取吸光度。

结果计算

1、以标准品浓度（mIU/ml）为横坐标，OD值为纵坐标，在对数坐标纸上绘制标准曲线。

2、在标准曲线上查出待测标本浓度。

正常值范围

每个实验室都应根据本实验室条件及接触的人群作出自己实验室促卵泡生成素正常值范围。

下列正常值范围为本公司提供的参考值：

儿童：

〈5mIU/ml

成人男性：

2.5-15mIU/ml

女性:

0.6-17.2mIU/ml

技术指标

灵敏度:

2mIU/ml

注意事项

1、实验室水箱温度：

37℃，实验前必须检查。

2、实剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程中室温18-25℃。

3、定期检验移液器是否准确。

4、严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。

5、每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。

6、注意洗板时间，每次洗后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。

7、酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免仪器内有液体未被发现时影响结果。

8、六项指标相互关联，遇异常情况及时临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。

9、试剂使用后应及时放回冰箱。

10、显色B存取时，应避免光线直接照射。

11、未用完的微孔板放在封口袋内保存。

血清泌乳素试剂

概述

人体的催乳素（Prolactin）是由198个氨基酸残革组成的单链多肽激素，分子量约22000道尔顿。

它是在下丘脑调节垂体前叶分泌的。

在生命的头六周血清催乳素明显增高。

然后，在儿童期的大部分时间内催乳素的浓度逐渐下降并保持在大约5ng/ml的平均浓度上。

男女从发育期前到发育期再到成年期，催乳素浓度进行性地增高，一直达到大约20ng/ml。

尽管成年女子与男子之间的浓度值有相当一部分重叠，但是通常前者比后者高。

孕妇、口服避孕药或哺乳妇女高。

绝经后妇女的催乳素浓度下降，低于那些正常月经周期妇女的数值。

许多和垂体腺瘤无关的病理情况也可以伴随催乳素的升高。

随着慢性肾功能衰竭的加剧，循环中的催乳素浓度也会发生进行性升高。

但慢性疾病患本身不出现催乳素浓度的异常。

有时高催乳素血症可在原发性甲状腺功能低下的病人中见到。

原理

在包被有抗人PRL抗体的微孔中加入标本和酶结合物保温。

洗掉未结合的组分。

结合上的酶结合物通过与过氧化氢和四甲基联苯胺反应，显色的光密度与最初结合在微孔中的PRL成比例。

试剂组成

1、微孔反应板96孔

2、酶结合物1瓶，11ml

3、标准品7瓶，浓度分别为0，5，10，25，50，100，200ng/ml

4、底物A1瓶，7ml

5、底物B1瓶，7ml

6、终止液1瓶，7ml

7、浓缩洗涤液1瓶，25ml，10倍浓缩洗涤液，作用前用蒸馏水稀释10倍。

操作步骤

1、取所需用量的反应微孔条，用加样器加入25ul标准品（0，5，10，25，50，100，200ng/ml）质控血清及待测标本。

2、每孔分别加入100ul酶结合物，充分混匀，放置37℃水浴中反应60分钟。

3、将各孔液弃净，用洗液或蒸馏水冲洗洗五次。

4、扣干后，每孔加1滴（50ul）显色液A，再加工厂滴（50ul）显色液B，充分混匀，在室温下避光15分钟。

5、每孔加1滴（50ul）终止液，并混匀。

6、用酶标仪在450nm波长读记吸光度，并计算出标本浓度。

敏感度

2ng/ml（按照WHO第一国际标准）

正常参考值

男性：

6.440.94-11.94ng/ml

女性:

14.278.39-20.15ng/ml

注意事项:

1、实验室水箱温度:

37℃,实验前必须检查.

2、实剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程中室温18-20℃

3、定期检验移液是否准确。

4、严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。

5、每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。

6、注意洗板时间，每次洗后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。

7、酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免仪器内有液体未被发现时影响结果。

8、六项指标相互关联，遇异常情况及时临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。

9、试剂使用后应及时放回冰箱。

10、显色B存取时，应避免光线直接照射。

11、未用完的微孔板放在封口袋内保存。

血清睾酮试剂

概述

内分泌腺所合成与释放的性激素，通过血液循环传送到远距离的特异靶组织和靶器官，引起特异的生物学效应。

检测这些激素有助于对男性病，特别是男性不育症综合分析。

睾酮（Testo）是睾丸细胞合成，并主要由睾丸，肾上腺和卵巢分泌；其主要功能是促进男性第二性征的发育和维持。

在临床上血清中障碍、类无睾症、Reifenstein综合症、女子性征异常、性早熟、性幼稚等的诊断有帮助。

尤其对于完全性性早熟和不完全性性早熟症的确诊意义最大。

女性多毛症患者的血清睾酮值常常高于正常值，垂体前叶功能减退时血清睾酮水平可能降低。

原理

本公司的睾酮试剂盒采用抗体杯竞争法测定血清中睾酮水平。

试剂盒中将抗睾酮抗体包被于微孔板上，制备成固相抗体，酶结合物含有用辣根过氧化物酶标记的睾酮抗原。

反应过程中，若检测标本含有睾酮，则与标记抗原竞争固相抗体，形成跑龙套相抗体——抗原——（睾酮）或固相抗体——标记抗原（睾酮）复合物，并结合在微孔壁表面，洗去多余抗原，再加入酶底物显色。

试剂组成

1、微孔反应板：

96孔，用抗睾酮抗体包被微孔反应板，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2、酶结合物：

一瓶，4ml，含睾酮与辣根过氧化物酶的结合物，含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

3、标准品：

六瓶，每瓶1ml，含睾酮浓度分别为0，0.2，0.6，2.0，6.0，25.0ng/ml的血清标准品，含有0.02%柳硫汞及蛋白稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

4、显色A：

一瓶，7ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

5、显色B：

一瓶，7ml，含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存，有效期内保持稳定。

6、洗液：

一瓶，25ml，10倍浓缩洗液，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

7、终止液：

一瓶，7ml，含1NH2SO4溶液，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

注：

病人标本无需特殊制备（前处理）

操作步骤

1、将所需用量的微孔条放置在支架上；

2、在分别注明标号的反应微孔中依次加入50ul标准品，质控血清，待测标本（用微量加样器加样）；

3、每孔加入100ul酶结合物，轻轻振荡微孔支架，充分混匀；

4、在37℃水浴箱或温箱中温育60分钟；

5、将各孔液弃尽，用洗液（或蒸馏水PH=7.0±0.5）冲洗五次,每次洗应将水分弃尽,最后一次冲洗后将微孔支架倒置在吸尽残余水分,切勿擦拭反应微孔内壁;

6、每孔加1滴（50ul）显色液A,再加1滴（50ul）显色液B,充分混匀;在室温（18-25℃）下避光反应15分钟;

7、显色反应15分钟后,每孔加1滴（50ul）终止液,并混匀;

8、以显色液A、B、终止液（各1滴）的混合液体作空白孔，用微孔型酶标仪在450nm波长下依次以空白、标准品，标本的顺序读记吸光度；

9、应在加终止液后的30分钟内读取吸光度。

结果计算

1、分别计算出各标准品，质控及病人标本的B/B0%。

B=标准品、标本OD值

B0=标准品“0”点OD值

2、以标准品浓度（ng/ml）为横坐标B/B0%为纵坐标，在对数坐标纸上绘制标准曲线。

3、在标准曲线上查出待测标本浓度。

正常值范围

每个实验室都应根据本实验室条件及接触的人群作出自己实验室睾酮正常值范围。

下列正常值范围为本公司提供的参考值：

男性：

青春期前〈0.2ngl

成人3-10ng/ml

女性:

青春期前<0.2ng/ml

成人0.2-0.8ng/ml

绝经期<0.35ng/ml

技术指标

灵敏度:

0.1g/ml

注意事项:

1、实验室水箱温度:

37℃,实验前必须检查.

2、实剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程中室温18-20℃

3、定期检验移液是否准确。

4、严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。

5、每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。

6、注意洗板时间，每次洗后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。

7、酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免仪器内有液体未被发现时影响结果。

8、六项指标相互关联，遇异常情况及时临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。

9、试剂使用后应及时放回冰箱。

10、显色B存取时，应避免光线直接照射。

11、未用完的微孔板放在封口袋内保存。

血清孕酮试剂

概述

孕酮是一种重要的性激素，不仅在月经周期的调节中起重要作用，也是维持妊娠所必须的一种激素，由卵巢分泌，主要功能是为促进子宫内膜增厚，腺体增生，为受精卵植入作准备。

血清孕酮的增高于葡萄胎，轻度妊娠高血压综合症、糖尿病孕妇，多胎、厚发性高血压、先天性17-a羟化酶缺乏症。

先天性肾上腺增生、卵巢颗粒层膜细胞瘤、卵巢脂肪样瘤。

孕酮的降低见于先兆流产、黄体功能不良、胎儿发育迟缓、死胎、严重的妊娠高血压综合症。

原理

本公司的孕酮试剂采用抗原标记竞争法测定血清中孕酮的水平。

试剂盒中将抗体孕酮抗体包被于微孔板上，制备成固相抗体一抗菌素原（孕酮）或固相抗体一标记抗原（孕酮）复合物，并结合微孔壁表面，洗去多余的标记抗原，再加入酶底物显色。

试剂组成

1、微孔反应板：

96孔，用抗孕酮抗体包被微孔反应板，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2、酶结合物：

一瓶，4ml，含孕酮与辣根过氧化物酶的结合物，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

3、标准品：

六瓶，每瓶1ml，含孕酮浓度分别为0，0.5，2.5，10，25.0ng/ml的血清标准品，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

4、显色A：

一瓶，7ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

5、显色B：

一瓶，7ml，含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存，有效期内保持稳定。

6、洗液：

一瓶，25ml，10倍浓缩洗液，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

7、终止液：

一瓶，7ml，含1NH2SO4溶液，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

注：

病人标本无需特殊制备（前处理）

操作步骤

1、将所需用量的微孔条放置在支架上；

2、在分别注明标号的反应微孔中依次加入100ul标准品，质控血清，待测标本（用微量加样器加样）；

3、每孔加入25ul酶结合物，轻轻振荡微孔支架，充分混匀；

4、在37℃水浴箱或温箱中温育60分钟；

5、将各孔液弃尽，用洗液（或蒸馏水PH=7.0±0.5）冲洗五次,每次洗应将水分弃尽,最后一次冲洗后将微孔支架倒置在吸尽残余水分,切勿擦拭反应微孔内壁;

6、每孔加1滴（50ul）显色液A,再加1滴（50ul）显色液B,充分混匀;在室温（18-25℃）下避光反应15分钟;

7、显色反应15分钟后,每孔加1滴（50ul）终止液,并混匀;

8、以显色液A、B、终止液（各1滴）的混合液体作空白孔，用微孔型酶标仪在450nm波长下依次以空白、标准品，标本的顺序读记吸光度；

9、应在加终止液后的30分钟内读取吸光度。

结果计算

1、分别计算出各标准品，质控及病人标本的B/B0%。

B=标准品、标本OD值

B0=标准品“0”点OD值

2、以标准品浓度（ng/ml）为横坐标B/B0%为纵坐标，在对数坐标纸上绘制标准曲线。

3、在标准曲线上查出待测标本浓度。

正常值范围

每个实验室都应根据本实验室条件及接触的人群作出自己实验室睾酮正常值范围。

下列正常值范围为本公司提供的参考值：

男性：

〈0.6ng/ml

女性:

卵泡期0.3-1.7ng/ml

绝经期<1.7ng/ml

黄体期3.0-32ng/ml

妊娠期>250ng/ml

技术指标

灵敏度:

0.2ng/ml

注意事项:

1、实验室水箱温度:

37℃,实验前必须检查.

2、实剂从冰箱取出后，放室温平衡15分钟，实验过程中室温18-20℃

3、定期检验移液是否准确。

4、严格按说明书操作，不同批号试剂不得混用，不要混肴试剂瓶盖。

5、每次实验必须带1-2个质控血清，加样后轻摇微孔条，一定要充分混匀，实验结果必须是质控血清在质控范围内，方可发报告。

6、注意洗板时间，每次洗后需拍干后再洗杜绝连续冲洗；无洗板机时，最好用振荡器洗板，确保质量，若冲洗不净会影响结果。

7、酶标仪测定前需提前预热，经调“0”重复结果后再测定样品，最好每次测一空板，避免仪器内有液体未被发现时影响结果。

8、六项指标相互关联，遇异常情况及时临床联系，查询病员是否服药等特殊情况。

9、试剂使用后应及时放回冰箱。

10、显色B存取时，应避免光线直接照射。

11、未用完的微孔板放在封口袋内保存。

血清雌二醇试剂

概述

雌二醇是雌激素中活性最强的一种，主要由卵巢产生，肾上腺皮质睾丸也能少量分泌，妊娠三个月且主要由胎盘分泌。

血液循环中的雌二醇主要结合在性激素结合球蛋白上，在肝脏中代谢成水溶性的硫酸酯和葡萄糖醛酸酯，经肾脏排出体外。

血清雌二醇浓度是检查丘脑下部——垂体——生殖腺轴功能的指标之一。

主要用于青春期前内分泌疾病的鉴别和闭经或月经异常时卵巢功能评价的指标。

也是男性睾丸或肝脏疾病的诊断指标之一。

原理

本公司的雌二醇试剂盒采用抗原标记竞争法测定血清中雌二醇的水平。

试剂盒中将抗雌二醇抗体包被于微孔板上，制备成固相抗体，酶结合物含有用辣根过氧化物酶标记的雌二醇抗原。

反应过程中若检测标本含有雌二醇，则标记抗原竞争固相抗体，形成固相抗体——抗原或固相抗体——标记抗原复合物，并结合在微孔壁表面，洗去多余的标记抗原，再加入酶底物显色。

用INH2SO4终止酶反应后，在450nm波长下测定吸光度。

试剂组成

1、微孔反应板：

96孔，用抗雌二醇抗体包被微孔反应板，2-8℃干燥保存，有效期内保持稳定。

2、酶结合物：

一瓶，4ml，含雌二醇与辣根过氧化物酶的结合物，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

3、标准品：

五瓶，每瓶1ml，含雌二醇浓度分别为0，50，200，600，1200pg/ml的血清标准品，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

4、显色A：

一瓶，7ml含过氧化氢和稳定剂，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

5、显色B：

一瓶，7ml，含色素基质和稳定剂，2-8℃避光保存，有效期内保持稳定。

6、洗液：

一瓶，25ml，10倍浓缩洗液，使用前用蒸馏水稀释10倍，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

7、终止液：

一瓶，7ml，含1NH2SO4溶液，2-8℃保存，有效期内保持稳定。

注：

病人标本无需特殊制备（前处理），采用可行医用技术收集全血标本，然后将其离心，分离提取血清标本。

操作步骤

4、将所需用量的微孔条放置在支架上；

2、在分别注明标号的反应微孔中依次加入100ul标准品，质控血清，待测标本（用微量加样器加样）；

3、每孔加入25ul酶