常用缓冲溶液配制方法.docx
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常用缓冲溶液配制方法
常用缓冲溶液配制方法
常用缓冲溶液的配制方法
1.甘氨酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L甘氨酸+Y毫升0.2mol/L
HCI，再加水稀释至200毫升
甘氨酸分子量=75.07,0.2mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
2.邻苯二甲酸-盐酸缓冲液（0.05mol/L）
X毫升0.2mol/L邻苯二甲酸氢钾+0.2
mol/LHCl，再加水稀释到20毫升
pH（20
X
Y
pH（20
X
:
Y
°C）
C）
邻苯二甲酸氢钾分子量=204.23,0.2
mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
3•磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
H
（p2mol/L
NazHP
O4
（毫升）
0.1mol/
L
H
0.2mol/LNa2HPO4
（毫升）
0.1mol/
L
柠酸
（升）
檬
毫
柠酸
（升）
檬
毫
20.40
10.
510.7
9.2
.2
1.24
60
.2
2
8
2
2.18
18.
5
11.1
8.8
.4
3.17
76
.4
5
5
2
4.11
17.
5
11.6
8.4
.6
4.94
82
.6
0
0
2
5.70
16.
5
12.0
7.9
.8
6.44
83
.8
9
1
3
7.10
15.
6
12.6
7.3
.0
7.71
89
.0
3
7
3
8.28
15.
6
13.2
6.7
.2
8.82
06
.2
2
8
3
9.35
14.
6
13.8
6.1
.4
9.86
30
.4
5
5
3
10.3
13.
6
14.5
5.4
.6
0
56
.6
5
5
3
12.
6
15.4
4.5
.8
90
.8
5
5
4
12.
7
16.4
3.5
.0
29
.0
7
3
4
11.7
7
17.3
2.6
.2
2
.2
9
1
4
11.1
7
18.1
1.8
.4
8
.4
7
3
4
10.
7
18.7
1.2
.6
65
.6
3
7
4
10.
7
19.1
0.8
.8
14
.8
5
5
5
9.7
8
19.4
0.5
.0
0
.0
5
5
Na2HPO4分子量=14.98,0.2mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO42H2O分子量=178.05,0.2mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7・出0分子量=210.14,0.1mol/L溶液为21.01克/升。
4•柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液
H
钠离子浓度
（mol/L
）
柠檬酸（克）
C6H8O7・H
20
氢氧化钠
（克）
Na
OH
97%
盐酸（毫升）
HC
l（浓）
最终体积
（升）
①
.2
20.20
0.20
210
210
4
81
60
1
0
3
0.20
210
8
1
1
.1
0.20
210
3
16
0
3
0.35
245
8
1
1
.3
0.45
285
3
06
0
4
0.38
266
8
4
1
.3
3
5
0
5
1
6
1
.3
44
8
0
5
1
1
1
.8
86
05
0
6
1
1
1
.5
56
26
0
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50%氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
5•柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L）
H
0.1mol/
L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/
L
柠檬酸钠
（毫
升）
H
0.1mol/
L
柠檬酸
（毫升）
0.1mol/
L
柠檬酸钠
（毫
升）
3
18.6
1.4
5
8.2
11.8
.0
17.2
2.8
.0
7.3
12.7
3
16.0
4.0
5
6.4
13.6
.2
14.9
5.1
.2
5.5
14.5
3
14.0
6.0
5
4.7
15.3
.4
13.1
6.9
.4
3.8
16.2
3
12.3
7.7
5
2.8
17.2
.6
11.4
8.6
.6
2.0
18.0
3
10.3
9.7
5
1.4
18.6
.8
9.2
10.8
.8
4
6
.0
.0
4
6
.2
.2
4
6
.4
.4
4
6
.6
.6
4
.8
柠檬酸C6H8O7・出0:
分子量210.14,0.1
mol/L溶液为21.01克/升
柠檬酸钠Na3C6H5O7・2出0:
分子量
294.12,0.1mol/L溶液为29.41克/毫升。
6•乙酸-乙酸钠缓冲液（0.2mol/L）
0.2mo
0.3mo
0.2mo
0.3mo
pH（
l/L
l/L
pH（
l/L
l/L
18°C）
18C）
NaA
HAc
NaAc
HAc
c
（毫
（毫
（毫
（毫
升）
升）
升）
升）
2.
0.
9.
4.
5.90
4.
6
75
25
8
7.00
10
3.
1.
8.
5.
7.90
3.
8
20
80
0
8.60
00
4.
1.
8.
5.
9.10
2.
0
80
20
2
9.40
10
4.
2.
7.
5.
1.
2
65
35
4
40
4.
3.
6.
5.
0.
4
70
30
6
90
4.
4.
5.
5.
0.
6
90
10
8
60
Na2Ac・3H2O分子量=136.09,0.2mol/L溶液为27.22克/升。
7•磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液（0.2）
H
0.2mol/
pL
Na2HPO
4
匾升）
0.2mol/
L
NaH2PO
4
（毫升）
H
0.2mol/pL
Na2H
PO4
（毫升）
0.2mol/
L
NaH2PO
4
（毫升）
5
8.0
92.0
7
61.0
39.0
.8
10.0
90.0
.0
67.0
33.0
5
12.3
87.7
7
72.0
28.0
.9
15.0
85.0
.1
77.0
23.0
6
18.5
81.5
7
81.0
19.0
.0
22.5
77.5
.2
84.0
16.0
6
26.5
73.5
7
87.0
13.0
.1
31.5
68.5
.3
89.5
10.5
6
37.5
62.5
7
91.5
8.5
.2
43.5
56.5
.4
93.0
7.0
6
49.5
51.0
7
94.7
5.3
.3
55.0
45.0
.5
6
7
.4
.6
6
7
.5
.7
6
7
.6
.8
6
7
.7
.9
6
8
.8
.0
6
.9
Na2HPO42H2O分子量=178.05,0.2mol/L
溶液为85.61克/升。
Na2HPO412H2O分子量=358.14,0.2
mol/L溶液为71.628克/升
NaH2PO42H2O分子量=156.01,0.2mol/L溶液为31.202克/升。
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由于它们是二级解离，有二个pKa
值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：
NaH2PO4:
pKal=2.12,pKa2=7.21;
Na2HPO4：
pKa1=7.21,pKa2=12.32
配酸性缓冲液：
用NaH2PO4,pH=1〜4,
配中性缓冲液：
用混合的两种磷酸盐，pH
=6〜8,
配碱性缓冲液：
用Na2HPO4,pH=10〜12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为
SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为：
①容易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释10倍后pH的变化小于0.1。
其缺点为：
①易与常见的钙Ca2+离子、镁
Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。
（2）磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液（1/15
mol/L）
pH
mol/L/15
mol/L//1
P
mol/L//15
mol/L//1
Na2HPO4
5KH2PO
H
Na2HPO4
5KH2PO
（毫
4
（毫
4
升）
（毫
升）
（毫
升）
升）
4.9
0.10
9.90
7.
7.00
3.00
2
0.50
9.50
1
8.00
2.00
5.2
1.00
9.00
7
9.00
1.00
9
2.00
8.00
7.
9.50
0.50
5.9
3.00
7.00
3
9.75
0.25
1
4.00
6.00
8
9.90
0.10
6.2
5.00
5.00
7.
10.0
0
4
6.00
4.00
7
0
6.4
3
7
8.
6.6
4
6.8
1
6.9
8
0
4
8.
3
4
8.
6
7
8.
1
8
Na2HPO42H2O分子量=178.05,1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量=136.09,1/15M溶液为9.078克/升。
8磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2MK2PO4+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至29毫升
pH（20°C）
X
（毫升）
Y
（毫升）
pH（20
C）
X
（毫升）
Y
（毫升）
5.8
5
0
7.0
5
2
6.0
5
.372
7.2
5
.963
6.2
5
0
7.4
5
3
6.4
5
.570
7.6
5
.500
6.6
5
0
7.8
5
3
6.8
5
.860
8.0
5
.950
1
4
.260
.280
1
4
.780
.520
2
4
.365
.680
9•巴比妥钠-盐酸缓冲液（18°C）
P
0.04M
0.2V
pH
0.04M
0.2N
H
巴比妥钠溶液
盐酸
巴比妥钠溶液
（毫升）
盐酸
（毫升）
6.8
100
18.4
8.4
100
5.21
7.0
100
17.8
8.6
100
3.82
7.2
100
16.7
8.8
100
2.52
7.4
100
15.3
9.0
100
1.65
7.6
100
13.4
9.2
100
1.13
7.8
100
11.47
9.4
100
0.70
8.0
100
9.39
9.6
100
0.35
8.2
100
7.21
100
巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克
/升
10.Tris-盐酸缓冲液（0.05M,25°C）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与
X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升
pH
X（毫升）
pH
X（毫升）
7.10
45.7
8.10
26.2
7.20
44.7
8.20
22.9
7.30
43.4
8.30
19.9
7.40
42.0
8.40
17.2
7.50
40.3
8.50
14.7
7.60
38.5
8.60
12.4
7.70
36.6
8.70
10.3
7.80
34.5
8.80
8.5
7.90
32.0
8.90
7.0
8.00
29.2
HOCH2NH2
分子量=121.14;
0.1M溶液为12.114克/升。
Tris溶液可从空气中
吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。
11・硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）
pH
0.05M
硼砂
（毫升）
0.2M
硼酸（毫升）
pH
0.05M
硼砂
（毫升）
0.2M
硼酸
（毫升）
7.4
1.0
9.0
8.2
3.5
6.5
7.6
1.5
8.5
8.4
4.5
5.5
7.8
2.0
8.0
8.7
6.0
4.0
8.0
3.0
7.0
9.0
8.0
2.0
硼砂Na2B4O710H2O,分子量=381.37;0.05M溶液
（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H3BO3，分子量=61.83,0.2M溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
12•甘氨酸-氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀
释至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
8.6
50
4.0
9.6
50
22.4
8.8
50
6.0
9.8
50
27.2
9.0
50
8.8
10.0
50
32.0
9.2
50
12.0
10.4
50
38.6
9.4
50
16.8
10.6
50
45.5
甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升
13•硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释
至200毫升
pH
X
Y
pH
X
Y
9.3
50
6.0
9.8
50
34.0
9.4
50
11.0
10.0
50
43.0
9.6
50
23.0
10.1
50
46.0
硼砂Na2B4O710H2O,分子量=381.43;0.05M溶液
为19.07克/升。
14•碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用
pH
0.1MNa2CO3（毫升）
0.1MN2HCO3（毫升）
20°C
37C
9.16
8.77
1
9
9.40
9.12
2
8
9.51
9.40
3
7
9.78
9.50
4
6
9.90
9.72
5
5
10.14
9.90
6
4
10.28
10.08
7
3
10.53
10.28
8
2
10.83
10.57
9
1
Na2CO210出0分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。
N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。
15.“PBS缓冲液
pH
7.6
7.4
7.2
7.0
H2O
1000
1000
1000
100ml
NaCl
8.5
8.5
8.5
8.5g
Na2HPO4
2.2
2.2
2.2
2.2g
NaH2PO4
0.1
0.2
0.3
0.4g
pH标准缓冲溶液
StandardpHBufferSolutions
名称
（Name
）
配制
（Compoundingway）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0C
5C
10C
15C
20C
25C
30C
35C
40C
草酸盐标准缓冲溶液
c[KH3（C2O4）2•2H2O]为0.05mol/L。
称取12.71g四草酸钾
[KH3（C2O）2•2"0]溶于无二氧化碳的水中，稀释至1000ml
1.67
1.67
1.67
1.67
1.68
1.68
1.69
1.69
1.69
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45C
50C
55C
60C
70C
80C
90C
95C
-
1.70
1.71
1.72
1.72
1.74
1.77
1.79
1.81
-
酒石酸盐标准缓冲溶液
在25C时，用无二氧化碳的水溶解外消旋的酒石酸氢钾
（KHC4HO），并剧烈振摇至成饱和溶液
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0C
5C
10C
15C
20C
25C
30C
35C
40C
-
-
-
-
-
3.56
3.55
3.55
3.55
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45C
50C
55C
60C
70C
80C
90C
95C
-
3.55
3.55
3.55
3.56
3.58
3.61
3.65
3.67
-
苯二甲酸氢盐标准缓冲溶液
C（C6HCOHCOK）为0.05mol/L，称取于（115.0士5.0）C干燥2〜3h的邻苯二甲酸氢钾（KHCHO4）10.21g，溶于无CQ的蒸馏水，并稀释至1000ml
（注：
可用于酸度计校准）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0C
5C
10C
15C
20C
25C
30C
35C
40C
4.00
4.00
4.00
4.00
4.00
4.01
4.01
4.02
4.04
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
45C
50C
55C
60C
70C
80C
90C
95C
-
4.05
4.06
4.08
4.09
4.13
4.16
4.21
4.23
-
磷酸盐标准缓冲溶液
分别称取在
（115.0士5.0）°C干燥2〜3h的磷
酸氢二钠
（NazHPO）（3.53士0.01）g和磷酸二氢钾（KHPQ）
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
0C
5C
10C
15C
20C
25C
30C
35C
40C
6.98
6.95
6.92
6.90
6.88
6.86
6.85
6.84
6.84
不同温度时的pH值（pHindifferenttemperatures）
（3.39士0.01）g,
溶于预先煮沸过
15〜30min并迅速
冷却的蒸馏水中，
并稀释至1000ml
（注：
可用于酸度计校准）
45C
50C
55C
60C
70C
80C
90C
95C
-
6.83
6.83
6.83
6.84
6.85
6.86
6.88
6.89
-
硼酸盐标准缓冲溶液
c（Na2B4O•
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