常用pH缓冲溶液的配制和pH值.docx

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常用pH缓冲溶液的配制和pH值

（一）溶液配制注意事项1．药品要有较好的质量试剂分为优级纯（保证试剂，Guaranteedreagent，G．R．）、分析试剂（Antalyticalreagent，A．R．）化学纯（Chemicalpure，C．P．）和实验试剂（Laboratoryreagent，L．R．）等等。

工业用的化学试剂，杂质较多，只在个别情况下应用，如配洗液用的硫酸、配干燥剂的氯化钙等。

2．药品称量要精确。

3．配制试剂用水应用新鲜的去离子水或双蒸馏水，比电阻值在50万欧姆以上，pH在~之间才可应用，在组织培养等特殊用途时应注意此项要求，配制一般化验用溶液只要求用双蒸馏水或去离子水。

４．配好后的溶液，应立即除菌处理（如高压灭菌、抽滤或加抑菌物质），以防杂菌生长。

（二）（1/15）Mol/L磷酸缓冲液1．1/15Mol/L磷酸二氢钾溶液的配制：

称取磷酸二氢钾（KH2PO4，A．R．）9.08g，用蒸馏水溶解后，倾入1000ml容量瓶内，再稀释至刻度（1000ml）。

2．１/15Mol/L磷酸二氢钠溶液的配制：

称取无水磷酸氢二钠（Na2HPO4，.）9.47g（或者Na2HPO4·2H2O11.87g）用蒸馏水溶解后，放入1000ml容量瓶内，再加蒸馏水稀释至刻度（1000ml）。

3．按附表的比例，配制成不同pH值的缓冲溶液。

附表1磷酸盐缓冲液配制法（单位：

毫升）pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4（三）LPB液附表2LPB液配制法pHLNa2HPO4（ml）LNaH2PO4（ml）Na2HPO4·2H2O分子量=L溶液含26.7g/L。

Na2HPO4·12H2O分子量=L溶液含53.7g/L。

NaH2PO4·H2O分子量=L溶液含20.7g/L。

NaH2PO4·2H2O分子量=L溶液含23.4g/L。

（四）LPB缓冲液附表3LPB缓冲液配制法pHMol/LNa2HPO4（ml）LNaH2PO4（ml）LNa2HPO4·2H2O溶液35.61g/LNa2HPO4·12H2O溶液含71.64g/LLNaH2PO4·H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4·2H2O溶液含31.21g/L欲配LPB缓冲液则在LPB缓冲液的基础上加H2O稀释1倍即可。

欲配制PBS液时，则在溶液中加％的NaCl溶液即可。

（五）无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）（LPH）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）KH2PO40.2g将上述试剂依次溶于1000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

（六）硼酸盐缓冲液（Boratesalinebuffer）文章来自：

医药园整理：

zfg1．硼酸（Ｈ3BO3）L硼酸：

硼酸12.37g加水至1000ml。

2．硼砂（Na2B4O7）L硼砂：

硼砂19.07g加水至1000ml。

附表4不同pH的L硼酸缓冲液配制法pHL硼砂（ml）L硼酸（ml）pHL硼砂（ml）L硼酸（ml）（七）巴比妥缓冲液1．离子强度L巴比妥缓冲液巴比妥钠47.6g蒸馏水3000mlHCl（NHCl=193ml浓HCl加1807ml蒸馏水）⑴将4.76g巴比妥钠溶于3000ml蒸馏水。

⑵加NHCl55ml。

⑶用HCl调节pH到，并加蒸馏水至4265ml。

2．L巴比妥缓冲液巴比妥1.84g巴比妥钠10.30g加蒸馏水至13．L巴比妥缓冲液巴比妥1.66g巴比妥钠12.76g加蒸馏水1（八）L醋酸盐缓冲液见表附表5附表5L醋酸盐缓冲液配制法pHLTris（ml）LHCl（ml）pHLTris（ml）LHCl（ml）23℃37℃23℃37℃25525252525252525252525252525（九）三羟甲基甲烷—盐酸缓冲液（Tris—HCl缓冲液）不同pH，LL三羟甲基氨基甲烷加х，加水稀释至100ml（见下表）附表6Tris—HCl缓冲液配制法pHLTris（ml）（ml）pHLTris（ml）（ml）23℃37℃23℃37℃2552525252525252525252525252525252525三羟甲基氨基甲烷（Tris）分子量=L三羟甲基氨基甲烷：

Tris24.23g，加水至1000ml。

：

取，加水至1000ml。

（十）L碳酸盐缓冲液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于蒸馏水中即得。

不用时塞紧瓶塞，以免吸收空气中二氧化碳使PH下降。

最好小量配制。

（十一）甘油磷酸缓冲液1．配制磷酸缓冲液LNa2HPO4NaH2PO4混合即可2．9份甘油与1份磷酸缓冲液混合，即为甘油磷酸缓冲液。

用途：

用于免疫荧光试验。

（十二）Hank’s液1．贮存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4·12H2O1.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g％酚红液双馏水加至115℃高压灭菌15min，冰冻保存。

2．工作液贮存液1份双馏水9份115℃高压灭菌15min。

临用时用灭菌的％NaHCO3液调pH值至左右（溶液呈橙红色）。

（十三）萘（钠）氏试剂（Nessler’sreagent）配方1：

氯化汞6.0g碘化钾12.4g20％NaOH30ml加蒸馏水至100ml配方2：

碘化汞11.5g碘化钾8g蒸馏水50ml（完全溶解后）过滤，加20％NaOH50ml。

用途：

检测溶液中氨离子。

（十四）阿氏（Alsever’s）液葡萄糖2.05g柠檬酸钠0.80g氯化钠0.42g蒸馏水100ml溶解后，以10%柠檬酸调节pH至，过滤，分装，10磅10min灭菌，4℃保存。

（十五）青、链霉素混合液（简称S．P．液或双抗液）青霉素（40万U）5支链霉素（200万μg）1支分别溶于100ml灭菌无离子水中或共同溶于200ml灭菌无离子水中，混合后分装小瓶，置-10℃~-20℃冰箱保存备用（1万单位μg/ml）。

临用时，按1%的量加入营养液或其他溶液中，最后浓度是青霉素100U/ml，链霉素100ug/ml。

（十六）洗液（清洁液）配方1：

重铬酸钾150g蒸馏水300ml浓硫酸3000ml将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大坩埚中加热溶解，然后慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，见发热过剧则稍停，冷却后再继续加。

此为强洗液。

盛清洁液的容器要坚固，上加厚玻璃盖，操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。

洗液一旦变绿，表示铬酸已经还原，失去了氧化能力，不宜再用。

如将这样洗液加热，再加适量重铬酸钾，又可重新使用。

配方2：

浓硫酸50%蒸馏水50%重铬酸钾5%此为中等强度洗液。

配方3：

重铬酸钾100g蒸馏水1000ml加热溶解，冷却后缓慢加入工业硫酸100ml此液为弱洗液，为棕红色。

使用此液时，必须预先用热肥皂水将玻璃器皿洗净，经自来水冲洗，沥干然后才能浸入，否则该洗液很快失效

　　缓冲溶液（英文：

buffersolution）是一种能在加入少量或和时大大减低变动的。

pH缓冲系统对维持的正常pH值和正常环境起到重要作用。

多数仅能在很窄的pH范围内进行活动，而且需要有缓冲体系来抵抗在代谢过程中出现的pH变化。

在生物体中有三种主要的pH缓冲体系，它们是缓冲系统、重碳酸盐缓冲系统以及缓冲系统。

每种缓冲体系所占的分量在各类细胞和中是不同的。

　　在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的。

研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到研究工作的成效。

如果“提取”实验体系的pH值变动或大幅度变动，就会下降甚至完全丧失。

所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。

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常用作缓冲溶液

　　常用作缓冲溶液的酸类由及其共轭酸盐组合成的溶液具有缓冲作用。

实验室常用的缓冲系主要有、、、、、（）等系统，生化实验或工作中要慎重地选择缓冲体系，因为有时影响实验结果的因素并不是缓冲液的pH值，而是缓冲液中的某种。

如、柠檬酸盐、磷酸盐和三羟甲基甲烷等缓冲剂都可能产生不需要的化学反应。

　　硼酸盐：

硼酸盐与许多化合物形成、如。

　　柠檬酸盐：

柠檬酸盐离子容易与钙结合，所以存在有钙离子的情况下不能使用。

　　磷酸盐：

在有些实验，它是酶的抑止剂或甚至是一个代谢物，重金属易以磷酸盐的形式从溶液中沉淀出来。

而且它在以上时缓冲能力很小。

　　三羟甲基氨基甲烷：

它可以和重金属一起作用，但在有些系统中也起作用。

其主要缺点时。

这点往往被忽视，在室温pH是的Tris缓冲液，4℃时是，37℃时是，因此，4℃配制的缓冲液在37℃进行测量时，其氢离子浓度就增加了10倍。

在以下，其缓冲能力极为不理想。

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缓冲溶液组成

　　缓冲体系由

　　１、弱酸和它的盐（如HAc---NaAc）

　　2、弱碱和它的盐（）

　　3、多元弱酸的酸式盐及其对应的次级盐（如NaH2PO4---Na2HPO4）

　　的水溶液组成。

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决定缓冲液pH值的因素

　　设缓冲系统的弱酸的为K（），平衡时弱酸的为[酸]，弱酸盐的浓度为[盐]，则由弱酸的电离平衡式可得下式：

　　[H+]=Ka{[弱酸]/[共轭碱]}

　　pH=pKa+log{[共轭碱]/[弱酸]}

　　这就是Henderson-Hasselbach等式。

　　如果[弱酸]=[共轭碱]，

　　pH=

　　根据此式可得出下列几点结论：

　　1缓冲液的pH值与该酸的常数K及盐和酸的浓度有关。

弱酸的pH值衡定，但酸和盐的比例不同时，就会得到不同的pH值。

酸和盐浓度相等时，溶液的pH值与PK值相同。

　　2酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不便。

　　3酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为最高，比例相差越大，缓冲效率越低，缓冲液的一般有效缓冲范围为PK±1pH。

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缓冲溶液的配制

　　只要知道的PK值，和要的缓冲液的pH值（及要求的缓冲液总浓度），就能按计算[盐]和[酸]的量。

这个算法涉及对数换算，较麻烦，前人为减少后人的计算麻烦，已为我们总结出pH值与缓冲液对离子用量的关系列出了。

只要我们知道要配制的缓冲液的pH，经查表便可处所用缓冲剂的比例和用量。

例如配制浓度为0.1M磷酸缓冲液。

　　经查表知浓度为0.2M毫升，而0.2M毫升。

依此可出配制100ml0.1M的磷酸缓冲液需要0.1M，而0.1MNa2HPO4需要毫升。

　　计算好后，按计算结果准确称好化学成分，放于中，加少量溶解，转移入50ml，加蒸馏水至刻度，摇匀，就能得到所需的缓冲液。

　　各种缓冲溶液的配制，均按表格按比例混合，某些试剂，必须标定配成准确浓度才能进行，如醋酸、等。

另外，所有缓冲溶剂的配制计量都能从以上的算式准确获得。