分子免疫学思考题（高宏彬）Word文档格式.docx

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3.Ig基因重排过程及必要的条件。

答重排过程首先是重链发生基因重排，随后是轻链重排。

Ig基因VDJ两端为重排信号序列，根据12-23原则，带12-bp-RSS只与23-bp-RSS结合，基因片段两端

RSS互相靠拢，它们间DNA环被剪除，D，J连接。

必要条件

A.重组信号序列

B.重组活化酶。

4.Ig多样性产生的机制。

A.编码Ig基因的多样性（原始因素）

B.随机重排产生的多样性（主要因素）

C.H、L链的随机组合

D.不准确连接、核苷酸插入

e.体细胞高频突变

f.基因转换，类别转换。

BB

C.人体奥妙之细胞的暗战TRIM21蛋白（一种防御蛋白）-对抗病毒的新途径（识别抗体，召集蛋白酶体，消灭病毒），比如促进免疫系统制造更多的TRIM21

5.简述膜补体调节蛋白（CD35,CD55,CD46,CD59）的结构特点及活性，解释一般情况下正常组织细胞为何不会被补体溶解

答CD35为单链穿膜糖蛋白。

活性抑制补体活化，清除免疫复合物，免疫调节，调理作用。

CD55为单链糖蛋白。

活性促进C3和C5转化酶衰变，抑制补体的活化，保护宿主细胞免遭补体介导的溶解破坏。

CD46为单链穿膜糖蛋白。

活性抑制补体的活化。

CD59为单链穿膜糖蛋白。

活性抑制C8与C9的结合。

防止MAC对同种或自身细胞的溶解作用。

（种属限制性）

机体的正常细胞对自身补体的攻击是有抵抗作用的，这种抵抗作用是由于CD55、

CD35、

CD46、CD59等膜表面的补体调节蛋白所发挥效应的结果。

6.简述C1q，MBL,Ficolin,C3，C5,C9的结构和功能特点。

答C1q为18条肽链组成的胶原蛋白样分子，3条肽链一组形成6个亚单位,之间由二硫键连接。

功能清除凋亡细胞，维持细胞的稳态，

排除病原体，抗感染和抗肿瘤，

免疫调节，参与炎症和自身免疫。

MBL为18条肽链组成的胶原蛋白样分子，3条肽链一组形成1个亚单位，6个亚单位组成6聚体,也有三聚体、四聚体和五聚体的形式。

功能MBL直接结合病原菌，介导吞噬细胞的吸附、吞噬和杀伤。

与MASP1、2结合激活补体系统。

Ficolin为12

条肽链组成的胶原蛋白样分子，3条肽链一组形成1个亚单位,4个亚单位组成四聚体。

功能同MBL。

C3为2肽链结构，分别为α、β链。

功能处于补体三条激活途径的汇合点，起枢纽作用。

C3敲除小鼠表现易于感染、TD抗原的免疫应答缺陷。

C5为2肽链结构，分别为α、β链。

功能过敏毒素、趋化作用，

参与攻膜复合体的形成。

C9为单链糖蛋白。

功能活化后导致细胞溶解。

7.试述细胞因子及其受体未来发展的趋势和展望。

答利用系统生物学破解复杂细胞因子调节网络作用机制；

新型细胞因子还会不断发现天然细胞因子发现（反向生物学）；

已知因子改良；

重组细胞因子的创制；

细胞因子相关药物开发；

细胞因子与疾病的因果关系。

8.举（2例）说明细胞因子与疾病发生密切的关系。

答IL-2R亚家族的g链缺陷，将引起SCID。

免疫细胞迅速大量产生细胞因子（TNF,IL//18等）引起异常免疫应答，全身炎症反应综合征，多器官功能障碍综合征，ARDS

9.举（2例）说明细胞因子在临床的成功应用。

A.G-CSF（粒细胞集落刺激因子）临床应用粒细胞减少症、肿瘤化疗引起血细胞减少症、贫血和骨髓发育异常综合症。

B.重组细胞因子IFN-α治疗肝炎、G-CSF治疗白细胞减少、多种细胞因子用于肿瘤病人的细胞治疗。

C.免疫毒素DAB389-IL-2免疫毒素治疗T细胞淋巴瘤。

10.白细胞介素的概念；

举例说明不同白细胞介素家族成员的特点。

答白细胞介素是由单核/巨噬细胞、淋巴细胞及其他细胞所分泌的某些非特异性发挥免疫调节和在炎症反应中起作用的因子。

IL-1

家族如IL-1能活化内皮细胞，促进黏附分子表达和趋化性细胞因子释放。

IL-2家族如IL-21能促进B细胞的扩增，协同促进T细胞增殖，促进NK细胞杀伤活性。

IL-6家族如IL-30促进原始T细胞增殖，促进早期Th1细胞的形成。

11.举例说明发现新白细胞介素的技术路线。

答反向生物学策略生物信息学分析---基因ORF克隆---功能研究（蛋白质）。

如CCDC134的研究CCDC134基因—生物信息学分析—猜测CCDC134为分泌蛋白—证实CCDC134为分泌蛋白—探究CCDCC134与免疫系统的关系

（CCDC134在免疫细胞中的表达谱—活化T淋巴细胞中CCDC134的表达—

CCDC134蛋白对CD8+T淋巴细胞的影响—CCDC134蛋白抗肿瘤效应—

CCDC134蛋白抗肿瘤的机制）—CCDC134可能是一个新的γc家族成员。

12.请结合本人专业举例说明趋化因子的功能和作用机制。

答MCP-1

与膀胱间质中肥大细胞表面的CCR2受体相结合，并诱导激活肥大细胞，使肥大细胞活化脱颗粒释放组胺和其它炎症因子，从而加重间质性膀胱炎炎性和纤维化的病理过程。

CCR7通过与其配体CCL21相互作用在淋巴细胞的归巢过程中起重要作用。

非小细胞肺癌中CCR7上调VEGF-D表达，影响肿瘤的淋巴管形成，促进肺癌转移。

13.请设计实验证明某分子是新的白细胞分化抗原。

答根据筛查标准确定所研究分子—染色体定位分析—表达谱分析—氨基酸序列分析、表达和纯化—鉴定所研究分子的pAb功能（可通过SDA-PAGE、Westernblot、

IIF等方法）—过表达该分子后mAbs的反应性—该分子在造血肿瘤细胞系，如

AML中的表达情况及机制—AML患者治疗后该分子的表达情况。

14.结合本专业举例说明免疫细胞膜分子的结构、功能及可能的临床应用。

答MHC分子MHCⅠ类分子α链和β2微球蛋白组成，α链胞外有3个结构域

α1,2,3，α1,2组成抗原肽结合槽，两端封闭。

MHCⅡ类分子分子量相似的α链和β链组成，α1和β1形成抗原肽结合槽，两端开放。

功能

（1）参与T细胞发育，赋予T细胞识别的MHC限制性

（2）呈递抗原，参与适应性免疫应答

（3）免疫功能相关基因，参与固有免疫应答。

临床应用用于亲子鉴定

HLAⅡ抗体用于治疗自身免疫病。

15.重组蛋白药物表达系统有哪些各自的特点答

（1）外源基因表达系统。

大肠杆菌优点表达量高，成本低，安全，表达成功机率较高。

缺点内毒素污染，表达产物无修饰过程，分子构型可能发生改变，后处理困难。

酵母菌优点无内毒素污染，成本低，安全，可有翻译后修饰，后处理较容易。

缺点表达量可能不稳定，表达成功率较低，表达产物的修饰可能不同于天然过程。

昆虫细胞优点可高表达，可有翻译后修饰，与酵母相比，表达蛋白与天然蛋白构型更相近，安全性高，后序处理容易。

缺点成本高。

哺乳动物细胞优点表达产物与天然产物结构无异，生物活性高，无内毒素污染，后处理较容易。

缺点表达量较低，成本高。

16.简述蛋白质工程技术及其应用。

答以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系为基础，通过生物技术，对现有蛋白质加以定向改造，设计、构建、生产出性能比自然界存在的蛋白质更加优良或更加符合需要的新型蛋白质。

应用

（1）应用蛋白质工程可改变某些分子特性

1.根据蛋白质三维结构确定残基突变；

2.突变、插入、删除等方法可用于鉴定功能残基和蛋白质分子改造；

3.利用蛋白质同源比对推测功能残基，指导蛋白质设计；

4.根据结构-稳定性相关知识设计改变蛋白质的理化特性；

（2）改善蛋白抗原性、活性和稳定性。

17.如何鉴定一个克隆的新基因是凋亡相关基因解释所用的凋亡检测技术以及原理。

答

（一）形态学方法。

借助光学显微镜、荧光显微镜或电镜观察凋亡小体的形成及其被临近细胞或吞噬细胞吞噬清除的过程。

（二）电泳法。

用胰酶消化体外培养细胞，经PBS洗涤，用蛋白K消化，酚-氯仿抽提凋亡细胞的基因组DNA，琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察可见特征的“梯状”DNA条带。

（三）原位缺口末端标记法。

细胞凋亡有一项重要的特征为细胞内的DNA碎裂成片段，TUNEL可以有效的去探测DNA片段的产生，传达细胞凋亡的讯息。

（四）流式细胞术测定法。

AnnexinⅤ能与细胞凋亡过程翻转到膜外的磷酯酰丝氨酸高亲和力特异性结合。

以标记FITC的AnnexinⅤ作为探针，利用流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

18.如何鉴定一个新的自噬相关基因简述Autophagy的检测方法以及原理。

电子显微镜检测自噬体和自噬溶酶体。

（二）自噬的特异标志物检测。

1LC3-II含量增多,LC3-II/LC3-I比例的升高:

westernblot。

2内源性斑点状LC3增多免疫荧光染色，免疫电镜。

3GFP-LC3斑点增多，定量检测荧光显微镜。

（三）自噬流的检测。

p62/SQSTM1和freeGFP检测。

p62/SQSTM1表达下调，freeGFP表达上调。

PolyQ80/PolyQ19降解检测。

Q80/Q19降低。

RFP-GFP-LC3荧光信号检测。

（四）长寿命蛋白降解,同位素标记。

ZFYVE1/DFCP1,ATG9,ATG12-ATG5,ATG16L,BECN1

mTOR,AMPK和Atg1/ULK1激酶活性

（五）自噬抑制剂的应用。

3-甲基腺嘌呤（3-Methyladenine,3-MA）

渥曼青霉素（Wortmannin）

巴佛洛霉素A1（BafilomycinA1，Baf.A1）,

氯喹chloroquine（CQ）

ATGsiRNA的应用

19.简述自噬在肿瘤发生发展中的作用。

答自噬在不同肿瘤或同一肿瘤的不同阶段发挥不同的作用。

自噬对肿瘤有抑制增殖和保护肿瘤细胞的双重作用。

肿瘤生长的早期阶段自噬增强，抑制肿瘤。

肿瘤进入发展阶段后基因变异积累，众多抑癌基因失活，自噬活力降低。

肿瘤生长的后期，在肿瘤中央缺血区域癌细胞处于营养缺乏和低氧的环境，自噬增强。

其可通过降解胞内蛋白质及细胞器为肿瘤细胞的生长提供营养及能量，以利于肿瘤细胞在低血管化的环境中生长。

还可以保护癌细胞免受药物的攻击。