进出口食物中溴化植物油含量的测定编制说明文档格式.docx

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溴化植物油属于抗结剂和干燥剂，由植物油（如油橄榄油、大豆油和玉米油等）溴化而得。

可加有必然的稳定剂。

主要用于稳定剂、增香剂和饮料稳定剂，也可用作乳化香精油的增重剂。

BVO的毒理学ADI未规定（FAO/WHO，1994）。

近几年联合国粮食及农业组织／世界卫生组织食物添加剂联合专家委员会（FAO/WHO）从头对溴化植物油的食用安全作出评估问题，以为它不该用作食物添加剂并于1998年撤销对GRAS的批准，但FCC仍保留，可利用于果香型饮料当中。

在允许利用的BVO的国家（如：

美国）里最终产品不超过15mg/kg的限量，中国不允许利用BVO（中国香精香料行业大全图文集p218），溴化植物油也不获准在香港利用（）。

溴化植物油一般由常见单一来源植物油（vegetableoil）或植物油的混合物（vegetableoils）溴化而生成。

主如果植物油中的不饱和脂肪酸与溴反映生成溴化物，单不饱和脂肪酸生成二取代化合物、双不饱和脂肪酸生成四溴取代化合物，三不饱和脂肪酸生成六溴取代化合物。

经查询“CODEXSTAN210-1999：

CODEXSTANDARDFORNAMEDVEGETABLEOILS”咱们可以发现，常见植物油中所存在的不饱和脂肪酸种类主要有C16:

一、C17:

一、C18:

二、C18:

3、C20:

一、C20:

二、C22:

1、C22:

二、C24:

1等（参见附件1）。

其中含量较高的为C18:

1与C18:

2，仅有菜籽油和芥子油含有少量C20:

1与C22:

1，其他种类的不饱和脂肪酸几乎为零（在本研究中，当植物油该种类不饱和脂肪酸含量小于5%时，对溴化植物油含量的影响极小，咱们可其视为不存在）。

一个不饱和键可以与两个溴原子反映，两个不饱和键则可与四个溴原子作用。

也就是说溴化植物油的有效主成份为9,10-二溴硬脂酸甘油酯和9,10,12,13-四溴硬脂酸甘油酯，除此之外还少量存在诸如二溴二十碳酸甘油酯与二溴二十二碳酸甘油酯等物质。

由于植物油及植物油的混合物中各类不饱和脂肪酸存在的比例不同，且会有不同取代度的溴化植物油出现。

所以溴化植物油实际上是数种溴化脂肪酸甘油酯的混合物。

通过以上分析，咱们可以知道只有清楚地定量出植物油中所有不饱和脂肪酸溴化产物，才能准确的定量出产品中溴化植物油的真实添加情况。

五、本标准方式概述

实验最初阶段本小组拟修改采用“AOACOfficialMethodBrominatedVegetableOilsinNonalcoholicBeverages—GasChromatographicMethod”进行食物中溴化植物油的测定，将试样经充分混合，利用有机溶剂将待测物质中添加的溴化植物油振荡提取，通过衍生反映将待测物质甲酯化，利用气相色谱分离，氢火焰离子化器检测，内标法定量。

可是该方式仅可测定溴化植物油中最大含量的两个成份，而对其他不饱和脂肪酸的溴化产物未进行计算；

另外，由于实验需要大量的进行标准物质的合成与峰面积的模拟修正计算，不仅费时费力也很难保证最后的检测结果。

基于以上情况并结合实际国情，本研究拟借鉴类似蛋白质含量以氮计的模式，成立利用有机溶剂提取饮料样品中的溴化植物油，通过将溴化植物油转化为溴离子，然后利用仪器进行溴离子的分析测定，通过测定溴离子含量来间接反映饮料样品中溴化植物油的添加情况；

六、本标准分析条件的选择

a）待测物质的提取

本法提取进程参照“AOACOfficialMethodBrominatedVegetableOilsinNonalcoholicBeverages—GasChromatographicMethod”中有关步骤进行，只是将样品的体积做适当调整以方便实际操作。

本法中取100mL样品溶液分液漏斗中，将待测溶液利用氯化钠充分饱和（20℃时氯化钠的溶解度为36g，故本方式中统一加入35g氯化钠以标准化操作进程）。

b）待测物质的净化

提取液通过碱洗涤和酸洗涤后再利用水洗去其中可能存在的酸和盐，醚层经无水硫酸钠充分干燥去除水分，所得溶液为溴化植物油的乙醚溶液，残余干扰极少。

c）有机溴的分解

由于溴化植物油是一类溴取代脂肪酸甘油三酯的混合物，需先破坏其结构，将有机溴转化为无机溴离子，然后才能采用相应的仪器分析手腕测定溴离子的含量。

破坏有机溴化物结构的方式很多，常见的方式有氧瓶燃烧法、高温碱熔法、重铬酸钾氧化法、联苯钠法和还原法等等。

实践证明，氧瓶燃烧法取样量过小，若燃烧不充分常造成结果偏低；

重铬酸钾氧化法需要复杂的溴蒸汽吸收装置，处置不妥也容易造成溴的损失。

最后咱们在550℃下利用镍坩埚以高温碱熔法进行溴化植物油的分解，将氢氧化钾与提取物混合，加热条件下进行碳化反映，随后高温熔融，等到的物质冷却后加水溶解。

其分解原理是在高温下氢氧化钾把提取物中的溴分解为溴离子，反映方程式如下：

d）溴离子的测定

在碱解的进程中咱们加入氢氧化钾将有机溴分解产生的溴离子固定下来，当反映结束时，镍坩埚中剩余物质仅剩溴化钾及未反映完的氢氧化钾。

咱们别离测试了不同量的氢氧化钾、不同温度及时间下碱解的效果。

最后肯定，加入2mol/L的氢氧化钾2mL，与提取液残渣混合均匀，在550℃反映3h可完全将溴化植物油分解并定量转化为溴离子。

e）溴化植物油与溴离子的换算系数：

本研究中参考蛋白质测定中以测定氮含量间接表征蛋白质的模式，以植物油中的最大组分油酸为模板，初步成立了溴离子与溴化硬脂酸甲酯和溴化硬脂酸甘油三酯之间的换算关系：

溴原子的相对分子量为；

溴化钾（7758-02-3）的相对分子量为；

二溴化硬脂酸甘油酯的相对分子量为；

二溴化硬脂酸甘油三酯的的相对分子量为

因为6个Br=3个二溴化硬脂酸甘油酯=1个二溴化脂肪酸甘油三酯

所以1个Br相当于1/6个二溴化脂肪酸甘油三酯（以油酸计）

即：

1g溴离子相当于1/（*6）*=溴化植物油（二溴化硬脂酸甘油三酯）

也就是说本方式中溴与溴化植物油（以二溴化油酸甘油三酯计）的换算系数为。

f）色谱条件的肯定

针对被分析物的性质，咱们选择IonPacAS11-HC色谱柱型阴离子分离柱，他的填料是亲水的微孔薄壳型阴离子互换树脂,基核是乙基乙烯基苯的聚合物,离子互换功能基是季铵基-N+（ROH）3,亲水性较强，在30℃时柱具有最佳分离效果，对OH-淋洗液具有很好的选择性可用于食物中阴离子的测定。

实验当选择KOH溶液作为淋洗液，OH-是强亲水性离子,易进入树脂亲水区,能同时分离与树脂亲和能力不同的阴离子,且抑制产物是水,本底电导比较低，作梯度淋洗时无基线漂移，色谱柱平衡时间快，水负峰，小适于大体积进样，对提高方式的信噪比和高灵敏度检测都超级有利。

咱们还实验了不同淋洗液浓度下各类阴离子的分离情况，若是利用较低的淋洗液强度，虽然可以取得很好的分离效果，可是分析时间也成倍增加。

若是利用较高的淋洗液强度，虽然可以降低分析时间但也可能致使各组分保留时间很短，无法取得满意的分离效果。

在本方式中，先利用适当强度的淋洗液等度洗脱弱保留成份（如：

氟离子、溴离子、亚硝酸根等）并将溴离子洗脱下来，再利用梯度洗脱来降低强保留物质（如硝酸根、硫酸根和磷酸根酸等）的保留时间，净化色谱柱，25min内所有成份都能洗脱干净。

咱们还考虑了不同流速对溴离子分析的影响，较高流速时化合物在柱上的保留时间短，各峰无法区分开来。

采用较低流速分离效果较好，但影响了峰形，出现拖尾、双头峰。

考虑到分离度和系统压力等问题，咱们选择ml/min作为最佳流速。

g）仪器的分析条件如下：

1.阴离子保护柱：

IonPacAG11（50mm×

4mm）或相当的色谱柱；

2.阴离子分析柱：

IonPacAS11（250mm×

3.阴离子抑制器：

ASRS-ULTRAⅡ型抑制器或相当的抑制器；

4.抑制器电流：

124mA；

5.淋洗液流速：

mL/min；

6.柱温：

30℃

7.进样量：

25μL；

8.梯度淋洗参考程序见下表：

时间/min

水

氢氧化钾（100mmol/L）

%

0

90

10

65

35

End

h）方式的线性范围

在本方式所肯定的实验条件下，以峰面积和标准溶液浓度作图，液相色谱在1～100mg/L范围内呈良好线性关系，相关系数R2大于；

本标准定量限为mg/L，适用于溴化植物油（以溴计）含量在mg/L以上的样品的检测。

i）方式的精密度与回收率

由于溴化植物油主要被利用于果味饮品中，本实验以果汁饮料为基体，按标准文本所述检测条件对加标样品进行精密度实验，结果数据见下表。

表2.溴化植物油测定的精密度实验

基体

10次测定值（mg/L）

平均值（mg/L）

RSD（%）

果汁饮料

以果汁饮料作为基质，参考中国、美国和其他国家对溴化植物油残留的限量标准进行、、15mg/L三个浓度水平的添加回收实验，每一个样品基体、每一个添加水平重复测定7次，计算添加回收率，回收率与精密度见表3。

表3.溴化植物油（以溴计）测定的回收率与精密度

测定值（mg/L）

回收率（%）

添加mg/L

果味饮料

99.7

平均值（%）

七、该方式的验证

检测方式成立后，经系统内外5家单位对本标准进行进行室间重复性和再现性验证，以饮料、果汁作为基体，、、mg/L三个浓度水平进行离子色谱法的添加回收实验。

验证结果表明本研究所成立的方式操作简单、重复性和再现性都可知足日常检测的要求。

七、参考文献

[1]GB/T《标准化工作导则第1部份：

标准的结构和编写规则》的编写规则。

[2]GB/T2000《标准编写规则第4部份：

化学分析方式》的编写规则。

[3]AOACOfficialMethodBrominatedVegetableOilsinNonalcoholicBeverages—GasChromatographicMethod.

[4]GB/T8538-2008《饮用天然矿泉水检测方式》

[5]《离子色谱方式及应用》（第二版），化学工业出版社。

[6]高春娟，蔡荣华，张雨山，盐业与化工，第38卷第六期。

2099年11月.

附件1.

表1常见植物油脂脂肪酸组成一览

脂肪酸

花生油

菜籽油

椰子油

棉籽油

葡萄籽油

玉米油

芥子油

棕榈油

米糠油

葵花籽油

芝麻油

大豆油

C6:

0

ND

C8:

C10:

C12:

C14:

C16:

14-23

1

ND-

C17:

C18:

38-48

17-30

2

29-40

3

C20:

C22:

>

C24:

※ND代表未检出，概念为≤%