郓城县职教中心应用技术培训教材Word文档格式.docx
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菌丝都是多细胞的，一般呈管状，无色、透明，有隔膜将菌丝隔成多个细胞。
食用菌菌丝内细胞核的数目不一，有单核、双核核多核细胞。
双核菌丝是大多数担子菌的基本菌丝形态。
④菌丝体功能：
吸收营养；
运输作用；
储藏代谢产物；
繁殖作用。
⑤菌丝的类型
A、初生菌丝：
由孢子萌发形成的菌丝。
B、次生菌丝：
由两条初生菌丝质配萌发形成的菌丝。
C、三生菌丝：
由次生菌丝进一步发育成菌丝束称为三生菌丝。
⑥菌丝的组织体
A、菌丝束：
由菌丝平行排列一起形成肉眼可见的叫菌丝束。
B、菌索：
由菌丝形成的绳状。
C、菌核：
由菌丝形成核状。
D、菌膜：
由食用菌表面一层菌皮。
E、子座：
由菌丝组织和疏丝组织构成的容纳子实体的褥座状结构。
2、子实体的形态结构：
①子实体：
是食用菌产生孢子病繁殖后代的器官，也是共人们使用的主题部分，通常人们使用的“菇、菌、蘑、耳、蕈”就是指的这一部分。
②主要组成部分：
有菌盖、菌褶、菌柄、菌环、菌丝等组成。
第二节食用菌的分类
1、生物的分类：
植物、动物、菌物三界。
2、食用菌的种类：
种类多，分布广，全世界已发现2000余种。
第三节毒菌的识别
1、毒菌及中毒类型
①毒菌类型：
毒鹅膏菌、春生鹅膏菌、鳞柄白鹅膏菌、肉褐鳞小伞、
毒丝膜菌、细鳞线膜菌、秋盔孢伞
②中毒类型：
胃肠中毒型、神经精神型、溶血型、肝脏损害型、呼吸与循环衰竭型、光过敏性皮炎型。
2、毒菌中毒后的急救措施
立即呼叫救护车赶往现场；
呼救时最重要的是让中毒者大量饮用加入少量温开水或稀盐水，然后把手指伸进咽喉催吐，以减少毒素的吸收；
在等待救护车期间，最好让患者饮用少量的食盐和食用糖的“糖盐水”补充体液，防止反复呕吐发生脱水和休克；
对于已昏迷的患者不要强行向其口内灌水，防止窒息；
为患者加盖毛毯保温。
第二章食用菌的生理生态
掌握食用菌的营养；
掌握食用菌的理化环境；
了解食用菌的生
物环境。
食用菌的理化环境
食用菌的形态结构、分类相关知识
第一节食用菌的营养
1、营养物质：
碳源、氮源、无机盐及生长因子
2、生理类型：
腐生、寄生及共生
第二节食用菌的理化环境
1、温度
食用菌的生长繁殖都在一定的温度下进行。
除草菇外，菌丝生长的温度范围为5～32℃，最适宜的温度是24～26℃。
2、水分和湿度
水分指培养料的含水量。
菌丝生长阶段棉籽壳含水量60～65%；
木屑含水量30～50%。
指空气相对湿度。
菌丝生长阶段：
60～70%；
子实体生长阶段：
85-95%。
3、空气
经常保持食用菌生长场所空气新鲜、氧气充足，是食用菌正常发育生长的重要条件。
4、光照
菌丝生长阶段一般不需要光照。
子实体生长阶段不同的食用菌有不同的要求。
5、酸碱度
大多数食用菌喜酸性环境。
适宜菌丝生长的PH值在3～8间，最适pH值为5.0～5.5。
第三节食用菌的生物环境
1、食用菌与微生物
存在着复杂的关系。
2、食用菌与动物
存在某些微妙的关系。
3、食用菌与植物
关系密切而复杂。
章节、课题
第三章食用菌的生活史与遗传育种
本章要求学生掌握食用菌的生殖方式；
掌握食用菌的生活史；
了解食用菌的良种选育。
食用菌的有性生殖。
难点：
良种选育
食用菌的营养、理化环境相关知识
第一节 食用菌的生殖方式
第一节
1、有性生殖
通过两性生殖细胞的结合而产生新个体者。
有性生殖方式产生的子代，兼有双亲的遗传特性，比无性生殖所产生的新个体生活力强，变异性打。
2、无性生殖
指不经过两性生殖细胞的结合，由母体直接产生后代的生殖方式，其后代能很好地保持亲本原有的性状。
3、准性生殖
不通过减数分裂而导致基因重组的一种生殖方式，常见于丝状菌中。
第二节食用菌的生活史
1、担子菌中食用菌的生活史：
担孢子→初生菌丝→次生菌丝→子实体
2、几个有代表性的生活史：
双孢蘑菇、草菇、香菇、滑菇。
第二节食用菌的生活史
一、生活史的概念
所谓生活史，是指生物一生所经历的生长发育和繁殖阶段的生活周期（全过程）。
食用菌的生活史是指从孢子到孢子的整个生长发育过程。
即从孢子在适宜的条件下萌发开始，先形成单核菌丝，单核菌丝融合形成双核菌丝，当双核菌丝发育到生理成熟阶段，菌丝扭结生长成子实体，子实体产生新一代孢子，至孢子散落而告终。
二、食用菌中伞菌类的典型生活史
食用菌中伞菌类的典型生活史由以下六个阶段组成：
1担孢子萌发，生活史开始。
2单核菌丝（初生菌丝）开始发育。
3两条可亲和的单核菌丝融合（质配）。
4形成异核的双核菌丝（次生菌丝）
5在适宜的环境条件下，双核菌丝发育成结实性菌丝（三生菌丝）并组织化，产生子实体。
6子实体菌褶表面或菌管内壁的双核菌丝的顶端细胞发育成担子，进入有性生殖阶段。
三、食用菌中几种有代表性的生活史类型
第三节食用菌的良种选育
食用菌栽培是一系列复杂操作的工作程序，包括种菇选择、母种选育与保存、菌种制备、出菇管理及市场销售等，每个程序都有至关重要的细节操作。
但育种是这些工作中首要的一项工作，没有优良的菌种，不管其他工作程序准备及管理得多么好，都会造成减产或失败。
一、引种与选择育种
（一）引种
引种应遵照以下原则和程序进行：
1．了解供种单位
2．了解品种
3．了解拟引进品种的生物学特性和栽培要点
4．先试种再扩大
5．品种配套
（二）选择育种
选择育种是最古老、最简便、应用最广的选种方法。
它是先分离和收集各地的有关菌株，然后通过生产试验比较各菌株的生产性能，选留最优者。
只要我们经常注意菌种的选育，不断淘汰劣等菌株，选留优秀菌株，就能使生产丰收，质量稳定，具体步骤如下：
1．资源的收集与采集
2．生理性状测定
（1）菌珠撷颃性试验
（2）同工酶谱和酶活性测定
将有撷颃性菌株做酯酶同工酶测定，以确定亲缘关系的远近，同时测定其他酶活性并比较差异。
（3）菌丝生长速度测定
在适宜的平板培养基上适温培养菌株，测定菌落直径，最后计算菌丝的生长速度。
3．菌株出菇性能比较试验
经生理生化试验选出的菌株，进一步比较它们的出菇性能。
试验按生物统计原理设计，各菌株产量要单收单计，同时对每个菌株的菇形、色泽、温型、始菇期、菇潮情况和干鲜比等都要作详细观察和记录。
4．扩大栽培试验
每个品种一地一次的代料栽培面积不少于50m2,段木栽培不少于是100根。
最好多点重复试验。
5．示范推广试验
选择有代表性试验点进行较大面积的栽培试验，以进一步考察和拟推广的优良菌株。
二、杂交育种
杂交育种是培育菌种的有效手段。
杂交是通过2个或几个亲株的染色体片段的交换或重行组合而获得新性状的。
进行杂交时，亲代必需有标记。
凡同宗接合的食用菌，可用营养缺陷型来标记。
营养缺陷型是指在营养特征上表现某种缺陷的变异菌株。
它在不含氨基酸、维生素等有机物的基本培养基上不能生长。
我们可以把2个不同品种的营养缺陷型混合接种在基本培养基上，如果它们能生长，即就意味着它们可能进行了杂交。
对于异宗接合的食用菌，可以利用菌丝的性别来进行杂交，取来自两种不同品系的单孢子分离物混合接种在一起，经培养后，凡出现双核菌丝的组合，并能正常结实，就证明能杂交。
通过杂交亲代的选择，就能得到融合亲代优点而除去亲代缺点的优良菌种；
使生产水平大幅度地提高。
（一）杂交育种的基本原则
1．亲本的选择
（1）双亲本都要有突出的优点
（2）亲本之间要有较大的遗传差异
（3）杂交亲本应具有较好的配合力
2．杂交的方式
3．杂交子的选择
（二）杂交育种的方法
杂交育种的一般程序为：
选择亲本单孢分离杂交配对转管繁殖初筛
复筛试验示范推广。
1．单孢分离
（1）玻片稀释分离法
（2）平板稀释分离法
（3）显微操作器分离法
2．单×
单杂交
3．单×
双杂交
核化，即可挑取少量菌丝至斜面培养基上培养。
4．优良菌株筛选和确证
三、诱变育种
（二）诱变剂
1．碱基的类似物，如5-溴尿嘧啶（BU）
2．碱基化学修饰物
3．嵌合剂和移码突变
常用的嵌合剂有吖啶橙、二氨基吖啶和吖啶黄素等。
4．辐射诱变
紫外线（UV）诱变
电离辐射诱变
激光诱变
离子束诱变
（三）诱变育种的基本方法
1．制备菌悬液
细胞诱变处理最好是单核的。
处理时最好使细胞处于悬浮状态，悬浮浓度应控制在106个/mL，配制孢子悬浮液可用生理盐水或缓冲液。
一般物理因子处理时可用生理盐水，如当诱变剂随着PH值改变会产生不同效应时，则必须用缓冲液配制。
2．诱变剂的选择
物理诱变剂中，紫外线具有无需特殊设备、成本低廉、对人体的损害作用易于防止等优点，诱变效果也较好，因此，尽管新的物理诱变因子不断出现，紫外线仍是最常用的物理诱变因子之一。
常用化学诱变剂可归为两类：
烷化剂和碱基类似物。
常用的烷化剂有EMS、NTG、EES和芥子气，碱基类似物有5-BU和2-AP。
一般而言，若对一个菌株进行多次诱变处理，使用多种诱变剂比每次都使用同一种诱变剂的效果好。
3．诱变的处理
各种诱变剂都有不同的剂量表示方式，育种工作中常用杀菌率来表示各种诱变剂的相对剂量。
诱变率随剂量的增高而增高，但并不是越高越好。
（1）物理诱变
实验室普遍使用的是无需特殊设备的紫外线。
在暗室的诱变箱中装15W的紫外灯管，诱变前先预热20min，然后将5mL孢子悬浮液移入直径6cm的培养皿或10-12mL孢子悬浮液移入直径9cm的培养皿中，打开盖放在距离紫外灯管30cm处照射0.5-5min，处理后可直接稀释涂平板，增殖培养时必须用黑纸包住三角瓶。
（2）化学诱变
现仅用应用较多的化学诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）为例，简要介绍其使用方法。
处理食用菌孢子时，甲基磺酸乙酯的浓度一般为0.1-0.4mol/L，下面以0.15mol/L为例：
a．将食用菌孢子悬浮在0.1mol/L，PH7.0的磷酸盐缓冲液中，孢子浓度为106个/mL。
b．9cm孢子悬浮液中加入浓度为0.15mol/L甲基磺酸乙酯溶液1mL，摇匀后保温3-6小时，也可适当延长或缩短时间。
c.离心、洗涤，稀释涂平皿或加入基培养过夜后再涂平板。
4．挑选突变株
诱变后的孢子以培养长出菌落后应及时挑选菌落。
同宗结合的菌株选择发育健全的单个菌落。
异宗结合的选择两个可亲和的单核菌落配对。
最后进行栽培实验，比较生产性能。
选出的菌株中，发生突变的仅占少数。
而产生显著高产优质正向突变的菌株更是极少数。
因此，诱变育种中，初筛的菌株不可过少，通常选择100-1000个菌株，并设置重复，以确保实验的可靠性。
四、生物技术在食用菌良种选育中的应用
（一）原生质体融合技术
1．原理
细胞是遗传物质贮存的仓库，每个多细胞生物的单细胞都能代表该物种的基因型，并且具有生长发育成完整个体的潜势。
通过原生质体融合，可以使遗传性状不同的两个细胞融合人一个细胞，从而导致两套基因组之间的接触、交换而进行重组。
然后就可以在再生细胞中，筛选出遗传性状变异的后代。
2．原生质体融合育种的特点
（1）重组频率较高。
（2）受结合型的限制较小。
（3）遗传物质传递更为完整。
（4）重组体种类多。
（5）有助于外源基因的转化。
3．原生质体融合育种的一般程序和方法
（1）原生质体分离
主要步骤包括菌丝培养、酶解、洗涤并纯化原生质体等。
菌丝体的生理状况、酶和酶解条件以及渗透压稳定剂等都影响原生质体的制备。
a．菌丝体的生理状况
b．酶及酶解条件
c.渗透压稳定剂
无机盐、糖类和糖醇类都可作为渗透压稳定剂，常用浓度为0.4-1.2mol/L。
几丁质是细胞壁的主要成分，故几丁质酶的作用比-葡聚糖酶和-葡聚糖酶更为重要。
（2）原生质体融合
（3）原生质体再生
（4）亲本的标记
（5）融合子的鉴定
第四章 食用菌菌种生产
掌握菌种、制种的概念；
掌握菌种的类型和制种的工艺流程；
掌握一级菌种、二级菌种、三级菌种的制备方法及菌种保藏；
明确制种所需的设备和菌种场建筑的合理布局。
菌种、制种的概念；
菌种的类型和制种的工艺流程；
一级菌种、二级菌种、三级菌种的制备方法；
菌种保藏。
食用菌的生殖方式、生活史的知识
教学内容与步骤
第一节食用菌制种的条件
1、厂房布局
2、厂房设施
3、制种的主要设备
第二节食用菌菌种分离
1、组织分离法
选取一小部分菇体或耳片组织分离培养基成纯菌丝体的方法。
有伞菌组织分离法、胶质菌类组织分离法、菌核组织分离法、生长点分离法、菌素分离法。
2、孢子分离法
利用子实体产生的成熟有性孢子分离培养，获得纯菌种的方法。
分为多孢分离和单孢分离。
多孢分离：
贴褶法、褶上涂抹法和悬挂法；
单孢分离：
平板稀释法和连续稀释法。
第三节固体菌种的接种培养
1、一级种（母种）的扩大培养
相应地种源条件：
无论是引进、受赠，还是保藏、分离等渠道获得的种源，首要条件必须是适应当地气候条件，并有相应的出菇试验、品比试验，以及市场对该品种或菌株的认可。
且菌龄在60日内常规制作的。
相应的设施设备：
包括操作（配料）间、灭菌室、手消（手提式蒸气消毒器）、接种箱等，大量生产时尚需有冰箱、显微镜等。
相应的工具、材料：
包括配料工具、分装工具、棉花、牛皮纸以及消毒、杀菌药物如酒精、甲醛、高锰酸钾等。
相应的操作技术：
包括菌种制作生产、检查检测的操作技术及经验。
培养基灭菌处理标准为：
高压0．11MPa×
0．5小时（具体操作略）。
相应的培养条件：
一般品种以25℃左右为宜，个别品种或低或高，应“因种制宜”。
技术要点：
保证种源质量；
严格无菌操作；
及时检查剔杂；
适温适时保存。
2、二级种（原种）的扩大培养
在一级种质量得到保证的条件下，种源已不再作为问题讨论。
高压蒸汽灭菌设备，或常压灭菌灶；
小型制种单位以常压灶灭菌即可，中大型单位应配备相应容积的高压灭菌设备。
必要的操作间、场地，洁净、通风且密闭性良好的培养室，有条件的应予以调控室温。
相应的材料，包括原料、种瓶（袋）、封口膜（塞）等。
相应的消杀药物，包括酒精、甲醛、高锰酸钾以及DDV等。
必要的工具，包括配料、拌料、装瓶（袋）、运输以及接种、检查等常用工具。
灭菌处理标准：
高压0．15MPa×
2小时；
常压100℃×
8小时左右。
——相应的操作人员：
包括各生产环节的操作工，其中尤以接种人员为重，必须达到熟练、负责的要求。
——相应的培养条件：
同一级种。
除部分品种外，一般要求配料PH在7～9之间；
常压灭菌时，应尽量缩短装瓶（袋）与灭菌间的时间距离；
3、三级种（栽培种）的扩大培养
三级种的生产与二级种基本相同，只是生产数量扩大了十几倍甚至更多，劳动强度亦有所增加，限于篇幅，不予赘述。
培养检查剔杂菌种培养温度范围一般在5℃～35℃，以25℃为最适宜，但应根据品种的特性具体确定，实际生产中可掌握在20℃～30℃。
就山东气候条件而言，培养室相对空气湿度一般在50％～75％之间。
但在春季应适当洒水增湿，夏秋季节应坚持通风。
菌种的检查。
自接种算起，1级～3级菌种的初始检查应分别为第2天、第3天和第3天；
此后检查的间隔时间分别为1天、2天、3天。
检查的重点：
菌种萌发情况、菌丝生产态势等是否符合其种源特性；
对于斜面上任何透明、半透明或浆糊状的污染斑块（细菌）及桔、黑、灰、绿、黄（真菌）等污染的1级种，应及时剔出，尤其应注意检查的及时性，某些细菌污染斑点在1天～2天后即可被食用菌菌丝掩盖；
对2级～3级种，以检查杂（真）菌污染为主。
注意要点：
夏秋季节生产时，尤其要严格防治桔色霉菌（链孢霉）的污染，及时剔杂，及时深埋处理，否则，一旦暴发污染，将导致“全军覆没”。
.玻璃纸封口保藏：
用明胶15g（粘合剂），硫酸铜2g，美蓝1～2滴（指示剂），溶于100毫升热水中，配制成封口剂。
将新长满的母种拔去棉塞，管口朝下，蘸上封口剂，贴上用95％酒精浸泡过的玻璃纸（赛珞璐），再用石蜡熔封。
在室温下，菌种至少可保存8个月，并能防止霉菌或螨的浸染。
在斜面注入无菌矿油（液体石蜡），可大大延长保藏时间。
厩肥保藏：
此法适合保藏双孢菇等草腐菌类。
将腐熟牛粪等堆肥晒干、打碎，取300g干堆肥，用5㎜孔径筛过筛，加1000毫升水调湿，装入试管，占管深1/3～1/2，在0.15兆帕压力下灭菌2小时。
确认无菌后，接种，菌丝长满后，放在3℃冰箱内保藏，每隔2年移植一次。
在长期保藏中，如培养基失水，应将保藏菌种及时接种在琼脂斜面上进行活化，再继续保存。
此法连续保藏4年后，其生产性状未出现明显变化。
4、母种、原种和栽培种质量的鉴定
第四节菌种的保藏
1、继代保存法：
每隔3～6个月转管，4～6℃保藏。
2、矿物油保存法：
将液体石蜡油保存菌株的斜面。
3、液氮超低温保存法：
将菌种用-196℃液氮冻结。
第五节液体菌种简介
1、概念：
采用液体培养基制备的菌种，是将菌种培养在发酵罐或圆锥瓶内，通过不断通气搅拌或振荡，是菌丝体在液体深层处繁殖的方法。
2、制备条件
3、制备工艺
第五章 平菇栽培
平菇熟料、发酵料袋栽技术
菌丝培养、出菇管理
食用菌菌种分离方法、过程；
固体菌种的接种培养。
第一节概述
1、在真菌中的分类：
担子菌亚门、伞菌目、侧耳科、侧耳属。
2、栽培历史
3、营养价值与药用价值
4、常见的平菇品种：
鲍鱼菇、凤尾菇、红平菇、金顶蘑菇等。
第二节形态特征及生活条件
1、形态特征
①菌丝体：
营养器官
②子实体：
繁殖器官，也是食用部分。
2、生活条件
①营养条件
平菇属木质腐生菌类，分解本质素和纤维素的能力很强，在其生长发育过程中所需要的营养物质主要为碳水化合物（纤维素、半纤维素以及淀粉、糖等）和木质素。
也需要少量的氮素如有机氮、硝酸铵和尿素等。
一般段木和稻草。
甘蔗渣、棉籽壳、玉米芯、麦秆等代料；
添加一些辅助料均能满足其营养要求。
②环境条件
温度：
低温型菌类。
孢子的形成以12～18℃为适温。
孢子的萌发以24～28℃最适宜。
菌丝的适应性较强，在5～35℃的范围都能生长，以24～27℃条件下，生长旺盛，健壮。
7℃以下生长缓慢，但耐寒力很强；
即使在-30℃下菌丝冻僵也不会死亡。
子实体的形成要求温度较低（5～20℃）以1O～15℃子实体生长迅速，菇体肥厚。
昼夜温差大，有利子实体的形成和生长。
在较高温度（室温23℃以上）下，易长成畸形菇。
湿度：
平菇生长要求较高的湿度，野生菇常于多雨、潮湿的环境下生长。
菌丝阶段要求培养基的含水量为60～70％。
子实体生长要求空气相对湿度85％～90％。
低于85％子实体发育缓慢，瘦小。
高于95％，菌盖易变色，腐烂。
空气：
平菇为好气性真菌。
子实体在通气不良的条件下，很难形成，即使能出菇，菌柄往往细长，菌盖变薄、变小，畸形菇多。
所以，要保持栽培场所的空气新鲜，以利子实体的正常生长发育。
光线：
平菇菌丝对光照条件要求不严，在明亮或黑暗条件下均能生长。
但子实体发育要有一定的散射光，在黑暗的地方，只长菌柄，不形成菌盖。
一般光照不足菇色白，光照强菇色暗。
PH：
平菇喜偏酸性环境，pH3～7之间均能生长，以pH5.5～6.5发育最好。
第三节栽培技术
1、常用配方：
棉籽壳、蔗渣、木屑为主的配方。
2、出菇棒的制作：
配料、装袋、灭菌、接种。
3、菌丝培养：
萌发期、定值期、快速生长期、生理成熟期的管理。
4、出菇管理：
原基期、桑葚期、珊瑚期、发育期、成熟期的管理。
5、后期管理：
采收、2潮菇的处理。
第六章 金针菇栽培
了解金针菇的的形态特征及生活条件、理解金针菇工厂化熟料袋栽技术与自然栽培技术
金针菇工厂化熟料袋栽技术
平菇的形态特征及生活条件。
无隔担子菌亚纲、金钱菌属。
2、栽培历史：
最早见于我国唐代。
3、营养价值与药用价值：
氨基酸丰富，可以预防高血压，能治疗肝脏疾病及肠胃溃疡病。
4、常见的金针菇品系：
黄色、浅黄色和白色。
洁白
丛生，菌盖直径2～15cm。
①营养条件：
碳源、氮源及微量元素
②环境条件：
温度、湿度、空气、光线、PH
棉籽壳、蔗渣、木屑、玉米芯为主的配方
2、栽培工艺流程
3、菌棒的制作：
配料、装袋、灭菌、接种
4、菌丝培养：
适宜温度和湿度，暗光条件下培养
5、工厂化栽培：
诱导原基形成→开袋→催雷→套袋→拉袋→吊袋→采收
6、自然栽培：
捎菌诱导原基形成→折袋→拉袋→采收
第七章 双孢蘑菇栽培
了解双孢蘑菇的生物学特性；
掌握双孢蘑菇栽培技术
培养料的前发酵技术
金针菇的形态特征及生活条件、金针菇工厂化栽培。
伞菌目，担子菌亚纲、伞菌科，蘑菇属。
2、栽培历史与现状
4、常见的双孢蘑菇品种
①菌丝体
②子实体
畜禽粪、稻草或麦秸、石膏、过磷酸钙、尿素、石灰等物质。
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