制药企业QA的学习资料二.docx

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制药企业QA的学习资料二

制药企业QA的学习资料【二】

28. 洁净区浮游菌测试标准操作规程

5.1 方法概述：

本测试方法收集悬浮在空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数。

并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

5.2 所用的仪器和设备

5.2.1 采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。

5.2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行定检。

5.2.3 培养皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。

5.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见附件A

5.3 测试步骤

5.3.1  测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。

5.3.1.1  采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。

5.3.1.2  用消毒剂擦净培养皿的外表面。

5.3.1.3  采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。

5.3.1.4  采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。

如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并晾干。

5.3.1.5  采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。

5.3.2  狭缝式采样器的采样程序

5.3.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量、转盘转速。

5.3.2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样器缝隙高度。

5.3.2.3  置采样口于采样点后，依次开启采样器、真空泵，转动定时器，根据采样量设定采样时间。

5.3.3  培养

5.3.3.1  全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

5.3.3.2  在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

5.3.3.3  每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

可每批选定3只培养皿作对照培养。

5.3.4  菌落计数

5.3.4.1  用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，有否遗漏。

5.3.4.2  若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。

5.3.5  注意事项

5.3.5.1  使用前仔细检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。

5.3.5.2  采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。

5.3.5.3  对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

5.3.5.4  由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

5.4  测试状态

5.4.1 浮游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）温、湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。

5.4.2 浮游菌测试前，被测试洁净室（或洁净区）已经过消毒。

5.4.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.5 测试人员

5.5.1 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。

5.5.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

5.6 测试时间

5.6.1 对单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。

5.6.2 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

5.7 浮游菌浓度计算

5.7.1 采样点数量及其布置

5.7.1.1 最少采样点数目

浮游菌测试的最少采样点数目分为日常监测及环境验证两种情况，见表1。

表1 最少采样点数目

面   积

m2

洁 净 度 级 别

A、B

C

D

验证

监测

验证

监测

验证

监测

<10

2～3

1

2

1

2

—

≥10～<20

4

2

2

1

2

—

≥20～<40

8

3

2

1

2

—

≥40～<100

16

4

4

1

2

—

≥100～<200

40

—

10

—

3

—

≥200～<400

80

—

20

—

6

—

400

160

—

40

—

13

—

注：

1）表1中的面积，对于单向流洁净室（包括层流工作台），指的是送风口表面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。

2）日常监测的采样点数目由生产工艺的关键操作点来确定。

—— 对A、B级洁净操作区域，可在离药物敞开口处30cm处设测点，每班一次。

—— 对C级洁净工作区域（如药物开口工作区）可在工作面处设测点，每班一次。

5.7.1.2 采样点的位置：

采样点位置可以同悬浮粒子测试点。

—— 工作区测点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。

—— 送风口测点位置离开送风面30cm左右。

—— 可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。

—— 采样点布置的规则见附录B（标准的附录）。

5.7.1.3 最小采样量

采样量根据日常检测及环境验证定，每次最小采样量见表2。

表2 最小采样量

洁净度级别

采样量，L/次

日常监测

环境验证

A、B级

600

1000

C级

400

500

D级

0

100

5.8 采样次数

每个采样点一般采样一次。

5.8.1 采样注意事项

5.8.1.1 对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向；对于非单向流，采样管口向上。

5.8.1.2 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。

5.8.1.3 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。

5.9 记录

测试报告中应记录房间温度、相对湿度、压差及测试状态。

5.10 结果计算

5.10.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

5.10.2 每个测点的浮游菌平均浓度的计算，见式

（1）。

平均浓度（个/m3）=          ·········

（1）

例1：

某测点采样量为400L，菌落数为1，则：

        平均浓度=    =2.5个/m3

例2：

某测点采样量为2m3，菌落数为3，则：

        平均浓度=   =1.5个/m3

5.11 结果评定

用浮游菌平均浓度判断洁净室（区）空气中的微生物。

5.11.1 每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于细菌浓度的界限。

5.11.2 若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新采样两次，两次测试结果必须合格。

6 附件

6.1 附件A：

培养基的准备及灭菌

6.1.1 培养基的准备

培养基应购买省药检所以上国家认可的培养基。

6.1.2 培养基平皿的制备

6.1.2.1 将Ф90mm 的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或160℃干热灭菌2h。

6.1.2.2 将培养基加热熔化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。

6.1.2.3 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

6.1.2.4 制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

6.2 附件B：

采样点布置

洁净室和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域于稀疏。

下列采样点布置的图示可作参考。

29. 洁净区沉降菌测试标准操作规程

1 方法概述：

本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。

2 所用的仪器和设备

2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器说明书操作。

2.2 恒温培养箱必须定期对培养箱的温度计进行定检。

2.3 培养皿一般采用Ф90mm×15mm 的硼硅酸玻璃培养皿。

2.4 普通肉汤琼脂培养基，其配制方法见附件A

3 测试步骤

3.1 采样方法

 将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基面暴露30分钟（静态），再将培养皿盖盖上后倒置。

动态监测可使用多个沉降碟连续进行监控，但单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时。

3.2 培养

3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。

3.2.2 在30℃-35℃培养箱中培养，时间不少于48h。

3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

可每批选定3只培养皿作对照培养。

3.3 菌落计数

3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5-10倍放大镜检查，有否遗漏。

3.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4 注意事项

4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性，准确性。

4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。

4.3 对培养基、培养条件及其他参数做详细的记录。

4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。

4.5 采样前仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质，破损或污染的应剔除。

5 测试规则

5.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速控制在规定值内。

5.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。

5.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中注明测试状态。

5.2 测试人员

5.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。

5.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于二人。

5.3 测试时间

5.3.1 对单向流，测试应在净化空调系统运行不少于15min后开始。

5.3.2 对非单向流，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。

5.4 沉降菌计数

5.4.1 采样点数目及其布置

—— 最少采样点数目如下表

面 积

m2

洁净度级别

A

B

C

D

<10

≥10-<20

≥20-<50

≥50-<100

≥100-<200

2-3

5

8

16

50

2-3

5

8

16

50

2

2

2

5

10

2

2

2

2

3

注：

表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。

对于非单向流洁净室是指房间的面积。

—— 在满足最少测点数的同时，还宜满足最少培养皿数见下表

洁净度级别

所需Ф90mm培养皿数（以沉降30分钟计）

A、B

C

D

14

2

2

—— 采样点的布置

工作区采样点的位置离地0.8m-1.5m左右（略高于工作面）。

可在关键设备或关键工作活动范围处增加采样点。

采样点位置的详细规则见附件B。

—— 房间采样点超过10个点，每7天对所有采样点轮流监测一次。

5.5 记录监测记录中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。

5.6 结果计算

5.6.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。

5.6.2 平均菌落数的计算，见式

（1）。

                         M1+M2+…+Mn

平均菌落数M= -----------………..

（1）

                             n

    式中：

M     平均菌落数；

          M1      1号培养皿菌落数；

          M2      2号培养皿菌落数；

              Mn       n号培养皿菌落数；

              n     培养皿总数。

5.7 结果评定标准：

静态：

洁净度级别

微生物（沉降菌）最大允许数

洁净度级别

微生物（沉降菌）最大允许数

个/皿

个/皿

A、B级

l

D级

10

C级

3

动态：

洁净

级别

浮游菌

沉降菌（φ90mm）

表面微生物

Cfu／m3

cfu／4小时 （b）

接触碟（  55mm）

cfu／碟

5指手套

cfu／手套

A级

<1

<1（单点总数≤1）

<1

B级

10

5（单点总数<8）

5

5

C级

100

50

25

-

D级

200

100

50

-

注：

（a）表中各数值均为平均值。

（b）可使用多个沉降碟连续进行监控，但单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时。

5.7.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。

5.7.2 若某洁净室（区）内的平均菌落数超过评定标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。

6 附件

6.1 附件A：

培养基的准备及灭菌

6.1.1 培养基的准备

培养基应购买省药检所以上国家认可的培养基。

6.1.2 培养基平皿的制备

6.1.2.1 将Ф90mm 的培养皿置于121℃湿热灭菌20min或160℃干热灭菌2h。

6.1.2.2 将培养基加热熔化，冷至55℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15mL。

6.1.2.3 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃恒温培养箱中培养58h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。

6.1.2.4 注：

制备好的培养基平皿宜在2℃-8℃的环境中存放。

6.2 附件B：

采样点布置

洁净和洁净区采样点的布置力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏。

下列采样点布置图示可作参考。

30.洁净区悬浮粒子测试标准操作规程

1 测试方法

1.1 方法提要

本测试方法采用计数浓度法，即通过测定洁净环境内单位体积空气中含大于或等于某粒径的悬浮粒子数，来评定洁净室（区）的悬浮粒子洁净度等级。

1.2 测试仪器：

尘埃粒子计数器。

1.3 操作步骤

1.3.1 仪器开机接通电源，预热10分钟至稳定后，将采样管接入仪器自净口，仪器开始自净至悬浮粒子数为零。

1.3.2 采样管口置采样点采样时，在确认计数稳定后方可开始连续读数。

2 测试规则

2.1 测试条件：

洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（温度控制在18℃--26℃，相对湿度控制在45%--65%之间为宜）。

2.2 测试状态

有静态测试和动态测试。

静态测试时，室内测试人员不得多于2人。

测试报告见洁净区悬浮粒子监测记录。

2.3 测试时间

2.4 A、B级洁净区测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于15min后开始

C、D级测试应在净化空气调节系统正常运行时间不少于30min后开始。

3 悬浮粒子计数

3.1 采样点数目及其布置

悬浮粒子洁净度监测的采样点数目及其布置应根据产品的生产及工艺关键操作区设置。

3.2 悬浮粒子洁净度测试的最少采样点数目见下表

面 积

m2

洁净度级别

A

B

C

D

<10

≥10-<20

≥20-<50

≥50-<100

≥100-<200

2-3

5

8

16

50

2-3

5

8

16

50

2

2

2

5

10

2

2

2

2

3

注：

表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风面面积。

对于非单向流洁净室是指房间的面积。

3.3 采样点的位置

3.3.1 采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。

3.3.2 采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m—1.5m高度的区域内分层采样，但每层不少于5点。

3.4 采样点的限定

3.4.1 对任何小洁净室或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。

每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。

3.4.2 采样点分布：

按《洁净区沉降菌测试标准操作规程》中附录B设定。

3.5 采样量：

不同洁净度级别每次最小的采样量见下表

洁净度级别

采样量，L/次

≥0.5μm

≥5μm

A、B

C

D

5.66

2.83

2.83

----

8.5

8.5

3.6 采样注意事项

3.6.1 采样管口宜向上。

3.6.2 布置采样点时，应避开回风口。

3.6.3 采样时，测试人员应在采样口的下风侧。

4 结果计算

悬浮粒子浓度的采样数据应按下述步骤作统计计算：

4.1 采样点的粒子浓度

  CI =C0 *1000/2.83  ……………

（1）

   式中：

CI -----某一采样点的平均粒子浓度，粒/m3；

C0-----某一采样点的粒子浓度（仪器读数），粒/L；

4.2 采样点的平均粒子浓度

                 C1+C2+…+CN

        A＝---------------……………

（2）

                    N

           式中：

A-----某一采样点的平均粒子浓度，粒/m3；

       Ci-----某一采样点的粒子浓度（i=1,2，…，N），粒/m3；

       N-----某一采样点上的采样次数，次。

4.3 平均值的均值

                A1+A2+…+AL

          M＝-----------…………………（3）

                    L

           式中：

M-----平均值的均值，即洁净室（区）的平均粒子浓度，粒/m3；

       Ai-----某一采样点的平均粒子浓度（i=1,2，…，L），粒/m3；

   L-----某一洁净室（区）内的总采样点数，个。

4.4 标准误差：

…………（5）

式中：

SE—平均值均值的标准误差，  粒/m3

4.5 置信上限：

UCL=M+t×SE………………………………………（5）

式中：

t—95％置信上限的分布系数，见下表：

      UCL—平均值均值的95％置信上限，  粒/m3

采样点数L

2

3

5

5

6

7

8

9

>9

t

6.31

2.92

2.35

2.13

2.02

1.95

1.90

1.86

——

注：

当采样点数多于9点时，不需计算UCL。

*

5 结果评定

判断悬浮粒子洁净度级别应依据下述条件：

5.1 每个采样点的平均粒子浓度必须低于或等于规定的级别界限，即Ai  ≤级别界限。

5.2 置信上限必须低于或等于规定的级别界限，即UCL≤级别界限。

5.3 评定标准见下表

    悬浮粒子最大允

许数／立方米（a）

洁净度级别

    静态（b）

    动态（b）

  ≥0．5m（d）

    ≥5μm

  ≥0．5μm（d）

    ≥5μm

    A级

    3500

    1（e）

  3500

    1（a）

    B级（c）

    3500

    1（e）

  350000

    2000

    C级（c）

    350000

    2000

  3500000

    20000

    D级（c）

    3500000

    2，0000

  不作规定（f）

  不作规定（f）

注：

（a）指根据光散射悬浮粒子测试法，在指定点测得等于和／或大于粒径标准的空气悬浮粒子浓度。

应对A级区“动态”的悬浮粒子进行频繁测定，并建议对B级区“动态”也进行频繁测定。

A级区和B级区空气总的采样量不得少于1米3，C级区也宜达到此标准。

（b）生产操作全部结束，操作人员撤离生产现场并经15～20分钟自净后，洁净区的悬浮粒子应达到表中的“静态”标准。

药品或敞口容器直接暴露环境的悬浮粒子动态测试结果应达到表中A级的标准。

灌装时，产品的粒子或微小液珠会干扰灌装点的测试结果，可允许这种情况下的测试结果并不始终符合标准。

（c）为了达到B、C、D级区的要求，空气换气次数应根据房间的功能、室内的设备和操作人员数决定。

空调净化系统应当配有适当的终端过滤器，如：

A、B和C级区应采用不同过滤效率的高效过滤器（HEPA）。

（d）本附录中“静态”及“动态”条件下悬浮粒子最大允许数基本上对应于ISO14644-10．5μm悬浮粒子的洁净度级别。

（e）这些区域应完全没有大于或等于5μm的悬浮粒子，由于无法从统计意义上证明不存在任何悬浮粒子，因此将标准设成1个／米3，但考虑到电子噪声、光散射及二者并发所致的误报因素，可采用20个／米3的限度标准。

在进行洁净区确认时，应达到规定的标准。

 （f）须根据生产操作的性质来决定洁净区的要求和限度。

6  填写测试记录，并附上打印记录。

31. 风速、风量、换气次数测试标准操作规程

1 原理：

风速是指送风口截面上的气流速度，送风口的风量是由测定截面积与流经该截面上的气流平均速度相乘得到。

截面积可用尺子量出后计算得出。

2 仪器：

热球式风速仪、微风测速仪、辅助风管（能刚好罩住风口，高度约为1.2米）

3 测试人员：

空调机组管理人员、QA

4 测试周期  

参见《洁净室环境、人员监测管理规程》

5 测试条件：

在空调系统正常运转不少于30分钟后。

6 测试

6.1 风速

6.1.1 用风速仪贴近风口处测量。

按定点测量法要求，根据风口截面大小将其划分为若干面积相等小块，在其中心处测量。

对距形风口，一般测5个点即可；对尺寸较大者，可分为相等大小的小格进行测量。

如下图：

一般定点尺寸较大者定点

6.1.2  非单向流可用辅助风管罩上风口并贴近辅助风管底端进行测量，也可用风速仪贴近风口测量。

6.1.3 单向流距离风口10cm进行测量。

6.2 风量

风口截面平均风速乘以风口截面积得到风口风量。

6.3 换气次数该房间各送风口风量值之和除以房间体积得出该房间的换气次数。

7  计算

7.1 风口平均风速（V）：

式中：

V1+V2…Vn——各测点风速（m/s）；

n——测点总数（个）。

7.2 风口风量L的计算：

L=3600×F×V

式中：

 F——风口通风面积（m2）；

              V——测得的风口平均风速（m/s）。

7.3 再计算出房间换气次数n：

式中：

 L1+L2+…Ln——房间各送风口风量（m3/h）；

A——房间体积。

32.不合格品销毁标准操作规程

1 不合格品处理方法

1.1 不合格及过期成品处理方法如下：

1.1.1 将外包装（大箱、小盒、说明书）卸下，按GMP要求严格执行双人监督销毁制度，进行撕毁或烧毁。

1.1.2 将药瓶用水浸泡，泡掉瓶签，撕毁；无瓶签而印字的药瓶，用