薄层层析常用显色剂配制及显色方法.docx
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薄层层析常用显色剂配制及显色方法
碘：
适用于不饱和或者芳香族化合物
配制方法：
在100ml广口瓶中，放入一张滤纸，少许碘粒。
或者在瓶中，加入10g碘粒，30g硅胶
高锰酸钾
适用于含还原性基团化合物，比如羟基，氨基，醛
配制方法：
1.5gKMnO4+10gK2CO3+1.25mL10%NaOH+200mL水.使用期3个月
磷钼酸（PMA）
广谱
配制方法：
10gof磷钼酸+100mL乙醇
紫外灯
适用于含共轭基团的化合物，芳香化合物
硫酸铈
生物碱
配制方法：
10%硫酸铈（IV）+15%硫酸的水溶液
氯化铁
苯酚类化合物
配制方法：
1%FeCl3+50%乙醇水溶液.
桑色素（羟基黄酮）
广谱,有荧光活性
配制方法：
0.1%桑色素+甲醇
茚三酮
适用于氨基酸
配制方法：
1.5g茚三酮+100mLof正丁醇+3.0mL醋酸
二硝基苯肼（DNP）
适用于醛和酮
配制方法：
12g二硝基苯肼+60mL浓硫酸+80mL水+200mL乙醇
香草醛（香兰素）
广谱
配制方法：
15g香草醛+250mL乙醇+2.5mL浓硫酸
溴甲酚绿
适用于羧酸，pKa<=5.0
配制方法：
在100ml乙醇中，加入0.04g溴甲酚绿，缓慢滴加0.1M的NaOH水溶液，刚好出现蓝色即至。
钼酸铈
广谱
配制方法：
235mL水+12g钼酸氨+0.5g钼酸铈氨+15mL浓硫酸
茴香醛（对甲氧基苯甲醛）1
广谱
配制方法：
135乙醇+5mL浓硫酸+1.5mLof冰醋酸+3.7mL茴香醛，剧烈搅拌，使混合均匀.
茴香醛（对甲氧基苯甲醛）2
适用于萜烯，桉树脑（cineoles）,withanolides,出油柑碱（acronycine）
配制方法：
茴香醛:
HClO4:
丙酮:
水（1:
10:
20:
80）
胺类物质常用的是：
（1）磷钼酸显色剂：
磷钼酸5%-10%乙醇溶液，淡黄色，久置变为浅绿色，不影响使用。
浸板或喷板，加热，浅黄色背景，还原性物质显蓝绿色斑点，如果斑点太浓，可能显深黄色。
（2）CAM显色剂:
钼酸铵9.6g,硫酸铈0.4g,10%硫酸水溶液200ml,混匀，极淡的黄色溶液，棕色瓶密闭保存，喷板，加热，白色背景，还原性物质显深蓝色斑点。
显色的方法各种各样，主要根据化合物的性质选择不同的显色方法。
许多关于植物有效成分提取与分离的书上都有介绍，通用的有碘、硫酸乙醇、香草醛－硫酸等，当然还有许多专用的显色剂，如：
溴甲酚绿使有机酸显黄色，三氯化铁使酚羟基显蓝色，碘化铋钾使生物碱显桔黄色.....
显色剂化合物
苯胺邻苯二甲酸酯碳水化合物，糖类
溴甲酚绿羧酸
二甲氨基苯甲醛氨基酸，多肽
磷钼酸苯酚类
若丹明类酯类
薄层层析常用显色剂配制及显色方法
附录
附录1薄层层析及纸层析常用显色剂配制及显色方法
通用试剂
（1） 重络酸钾-硫酸:
检查一般有机物.
喷洒剂:
5克重络酸钾溶于100毫升40%硫酸中.
薄层检查:
喷洒后加热到150℃至班点出现
（2） 荧光素-溴:
检查不饱和化合物
喷洒剂:
0.1克荧光素溶于100毫升乙醇中
溴试剂:
5%的溴的四氯化碳溶液
喷洒后处理:
喷洒荧光素溶液后,放置存有溴溶液的缸内,可于紫外线分析灯下检查荧光,荧光素与溴化和成曙红（Eosin）（无萤光）,而不饱和化合物则成溴加成物,保留了原有荧光;若点样较多,则呈黄色斑点,底板呈红色.
（3） 碘:
检查一般有机物.
方法:
a层析谱放密闭缸内或瓷盘内，缸内预先放有碘结晶少许，大部分有机化合物呈棕色斑点。
B层析谱放碘蒸气中5分钟（或喷5％碘的氯仿溶液）取出置空气中待过量的碘蒸气全部挥发后，喷1％淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。
（4）硫酸：
通用
喷洒剂：
5％的浓硫酸乙醇溶液，或15％浓硫酸正丁醇溶液，或浓硫酸－醋酸（1：
1）
喷洒后处理：
空气中干燥15分钟，再热至110℃直至出现颜色或荧光。
（5）硝酸银－氢氧化铵（Tollen-Zaffaroni）试剂：
检查还原性物质。
溶液I:
0.1%N硝酸银;溶液II:
5N氢氧化铵
喷洒剂:
I和II以1:
5混合（临用前混合）
喷洒后处理:
105℃加热5~10分钟,至深黑色斑点出现.
（6）磷钼酸或磷钨酸,硅钨酸:
检查还原性物质,类脂体,生物碱,甾体
喷洒剂:
5~10%磷钼酸或磷钨酸或硅钨酸乙醇溶液
喷洒后处理:
120℃加热至斑点出现.
沉淀试剂:
1克硅钨酸溶于20毫升水中,加10%盐酸至强碱性.
生物碱
（7）硫酸?
?
=硫酸:
检查生物碱及含碘化合物
喷洒剂:
0.1克硫酸?
混悬于4毫升水中,加入1克三氯醋酸,加热至沸,逐滴加入浓硫酸至澄清.
喷洒后处理:
110℃加热数分钟至斑点出现.
（8）碘化铋钾（Dragendorff）试剂:
检查生物碱及其他含氟化合物.
溶液I:
0.85克次硝酸铋溶于10毫升冰醋酸40毫升水中
溶剂II:
8克碘化钾溶于20毫升水中.
制备液I+II,等体积混合.可用于棕色瓶中保存较长时间,一般制备液可作沉淀试剂用.
喷洒液:
制备液1毫升与2毫升醋酸,10毫升水混合即得
（9）.碘化汞钾（Mayer）试剂:
检查生物碱.
制备液:
13.55克氯化汞和49.8克碘化钾各溶于20毫升水中,等体积混合并用水稀释至1000毫升.
喷洒液:
制备液加1/10体积的17%盐酸.
喷洒后处理:
观察斑点,并于紫外线荧光分析灯下检出.
（10）?
酸纳-浓硫酸（Mandelin）试剂:
检查生物碱.
1%>酸纳的浓硫酸溶液.与多种生物碱呈不同颜色.
（11）碘－碘化钾（Wagner）试剂:
检查生物碱.
1克碘及10克碘化钾,溶于50毫升水中,加热,加2毫升醋酸,再用水稀释至100毫升.
可作纸层板显色剂,液可作沉淀试剂.
酚类,鞣质
（12）三氯化铁:
检查酚类及?
?
酸.
喷洒剂:
1~5%三氯化铁的水溶液或乙醇溶液.并加盐酸少许.?
?
酸呈红色斑点,酚类称蓝色或绿色斑点.
（13）铁氰化钾-三氯化钾:
检查酚类,芳香胺类及还原性物质.
喷洒剂:
1%铁氰化钾水溶液,2%三氯化铁水溶液.临用前等体积混合.
喷洒后处理:
喷洒后酚性物质呈蓝色斑点.再喷2N盐酸,能使颜色加深,纸谱可用烯盐酸洗去喷洒液.
（14）4-胺基安替比林-铁氰化钾（Emerson反应）:
检查酚类.
喷洒剂:
I.2%4-氨基安替比林乙醇溶液;
II.8%铁氰化钾水溶液.
或用0.9%4-氨基安替比林和5.4%铁氰化钾水溶液
方法:
先喷洒I,再喷洒II,即显色,或再放入密闭缸中,缸内放25%氢氧化铵,即产生橙色至深红色.
（15）对氨基苯磺酸,重氮盐（Pauly试剂）:
检查酚类,芳香胺类及能偶合的杂环化合物.
喷洒剂:
4.5克对氨基苯磺酸,加热溶于45毫升12N盐酸中,用水稀释至500毫升,取10毫升稀释液用冰冷却,加10毫升冷4.5%亚硝酸钠水溶液,0℃放15分钟（此试剂于0℃可保存3天）,用前加等体积1%碳酸钠水溶液.
一般重氮化试剂,也可用联苯胺,对硝基苯胺等.
（16）对甲苯磺酸:
检查甾体,黄酮,鞣质.
喷洒剂:
20%对甲苯磺酸氯仿溶液.
喷洒后处理:
100℃加热数分钟,紫外线分析灯下检查荧光斑点.
含氧杂环及蒽醌类*
（17）三氯化铝:
检查黄酮体.
喷洒1%三氯化铝乙醇液于紫外线荧光分析灯下检示,呈黄色荧光
（18）碱式醋酸铅:
检查黄酮体.
喷洒剂:
饱和碱式醋酸铅（或饱和醋酸铅）水溶液.
于紫外线荧光分析灯下检查荧光斑点.
（19）醋酸镁:
检查蒽醌甙,甙元及黄酮体
喷洒剂:
0.5%醋酸镁甲醇溶液
方法:
90℃加热5分钟,呈红色至紫色斑点.
（20）氢氧化钾:
检查香豆素,蒽醌甙及甙元
喷洒剂:
5~10%氢氧化钾的甲醇溶液.
于日光及紫外线荧光分析灯下检示斑点.
萜类,甾体
（21）三氯化锑（Carr-Price试剂）:
检查甾体,萜类,皂类.
喷洒剂:
25克三氯化锑溶于75克氯仿中（亦可以用氯仿或四氯化碳的饱和溶液）.
喷洒后处理:
100℃加热5分钟,于紫外线荧光分析灯下检示荧光.
（22）五氯化锑:
检查甾体,萜类,皂甙.
喷洒剂:
五氯化锑-氯仿或四氯化碳（1:
4）,用前新鲜配制.
喷洒后处理:
120℃加热至斑点出现,并于紫外线荧光分析灯下检示.
（23）香兰醛-硫酸:
检查高级醇类,酚类,甾体,萜类,芳香油.
喷洒剂:
1克香兰素溶于100毫升浓硫酸,或0.5克香兰醛溶于100毫升硫酸-乙醇（4:
1）中.
喷洒后处理:
室温或120℃加热观察显色斑点.
（24）4-二甲氨基苯甲醛,醋酸,磷酸（E.P.试剂）:
检查?
Azulene及?
前体Proazulene.
喷洒剂:
0.25克4-二甲氨基苯甲醛,溶于50毫升醋酸5克85％磷酸和20毫升水的混合液中（棕色瓶中保存数月）
?
:
烃室温即成蓝紫色斑点,>前体于80℃加热10分钟出现蓝紫色斑点.
（25）氯胺T－三氯醋酸:
检查强心甙.
喷洒剂:
I.3%氯仿T水溶液新鲜制备.
II.25%三氯醋酸乙醇溶液（能保存数天）.
10毫升I加40毫升II,用前混合.
喷洒后处理:
110℃加热7分钟,紫外线荧光分析灯下检示呈蓝色或黄色荧光.
（26）亚硝酸基铁氰化钠-氢氧化钠（Legal试剂）:
检查不饱和内酯;甲基酮或活性次甲基,常用于强心甙
喷洒剂:
1克亚硝基铁氰化钠溶于100毫升2N氢氧化钠-乙醇（1:
1）的水溶液.
显红色或紫色斑点.
（27）3,5-二硝基苯甲酸（Legal试剂）:
检查强心甙,α,β-不饱和内酯.
喷洒剂:
1克3,5-二硝基苯甲酸溶于50毫升甲醇,加入1N氢氧化钾50毫升.
强心甙呈紫红色斑点.
糖类
（28）邻苯二甲基苯胺:
检查还原糖.
喷洒剂:
0.93克苯氨,1.66克邻苯二甲酸溶于100毫升水饱和的正丁醇中.
喷洒后处理:
105℃加热10分钟.
（29）2,3,5-Triphenyl-tetrazoliumchloride（T.T.C.）：
检查还原糖及其他还原物质。
溶液I：
4％（T.T.C.）甲醇溶液； 溶液II：
1N氢氧化钠。
喷洒液：
I，II，临用前等体积混合。
喷洒后处理：
100℃加热5～10分钟，得红色斑点。
（30）Keller-Kiliani试剂：
检查α－去氧糖，常用于强心甙。
试液：
100毫升冰醋酸加三氯化铁试液0.5毫升混合均匀.
试样1毫克加试液2毫克溶解后,沿试官管壁滴入浓硫酸2毫升,接触面即显棕色,渐变浅绿,蓝色.最后冰醋酸层全部燃呈蓝色.
（31）1,3-二羟基萘-磷酸:
检查糖类.
喷洒液:
0.2%1,3-二羟基萘（Naphthoresorcinol）乙醇溶液100毫升,与10毫升85%磷酸混合.
（32）费林溶液（Fehling）:
检查还原糖.
溶液I:
69.3克结晶硫酸铜溶于1000毫升水中.
上述二溶液如不清可滤过.临用前等体积混合.
氨基酸
（33）茚三酮:
检查氨基酸及氨基糖.
喷洒剂:
0.3克茚三酮溶于100毫升正丁醇,加入3毫升醋酸;或0.2克茚三酮溶于100毫升乙醇（或丙酮中）.
喷洒后处理:
110℃加热至斑点出现.
（34）吲哚醌:
检查氨基酸和一些肽.
喷洒剂:
0.2%吲哚醌（Isatin）丙酮溶液,含4%醋酸;或用100毫升1%吲哚醌丙酮溶液加10毫升醋酸.
喷洒后处理:
100~110℃加热10分钟.
（35）1,2-萘醌-4-硫磺酸（Folin试剂）:
检查氨基酸.
喷洒剂:
新鲜制备0.02克1,2-萘醌-4-磺酸钠,溶于100毫升5%碳酸钠中.
喷洒后处理:
室温放于,不同氨基酸出现不同颜色.
有机酸
（36）酸碱指示剂:
检查有机酸.
喷洒剂:
0.05%溴酚蓝（或溴甲酚绿,或溴麝香草酚蓝）的乙醇溶液.
（37）氧化还原显色剂:
检查有机酸.
喷洒剂:
I.0.075%溴甲酚绿及0.025%溴酚蓝的无水乙醇液.
II.0.5%高锰酸钾及1%碳酸钠.10H2O的蒸馏水液.临用前,取I和II按1:
1混合后喷酒.
喷酒后处理:
稳定时间为5~10分钟.对不同的有机酸在纸谱上呈现不同颜色.
（38）?
?
?
（Acridine）:
检查酸.
喷洒剂:
0.005%的?
?
乙醇溶剂.
紫外线分析灯下呈黄色荧光.
（39）芳香胺-还原糖:
检查酸.
喷洒剂:
芳香胺（如苯氨5克）和还原糖（如木质糖5克）溶于50%含水乙醇中.
喷洒后处理:
125~130℃加热出现棕色斑点.
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