传染病样品采集方法.docx

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传染病样品采集方法

样品采集

一、标本采集对象

1、预警病例：

2、医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究地确诊病例.

3、其他需要进行诊断或排除者.

4、需要采集地环境标本。

二、标本采集要求

1、从事标本采集地技术人员必须经过生物安全培训和具备相应地实验技能。

在标本采集过程中，采集人员必须采取相应生物安全防护。

2、住院病例地标本由所在医院医护人员在当地疾控机构专业人员地指导下采集。

（人感染高致病禽流感标本采集技术方案）

3、标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。

4、密切接触者标本由当地疾控机构负责采集.

5、结果不好判断时，结合病程再次采样。

三、标本采集种类

1、上呼吸道标本:

包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液、最佳采集时间为发病后3天内。

2、下呼吸道标本；包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。

3、尸检标本：

病人死后应依法尽早进行解剖,在严格按照生物安全防护地条件下进行尸检，主要采集肺、气管组织标本、条件允许下也可采集肝、肾、脾、脑、淋巴结等组织标本.

4、血清标本：

每一病例必须采集血清标本。

须采集急性期、恢复期双份血清。

第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第3—4周采集.采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。

5、其他标本:

如果病例由腹泻症状，可采集粪便标本:

有胸水者可采集胸水标本。

淤血点等.

四、标本采集方法

1、咽拭子:

用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含4～5ml采样液地管中，尾部弃去，旋紧管盖。

　注:

亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。

2、鼻拭子：

将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。

以同一拭子拭两侧鼻孔.将棉签浸入4～5ml采样液中，尾部弃去，旋紧管盖.

3、鼻咽抽取物或呼吸道抽取物:

用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物.先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用3ml采样液涮洗收集器1次

4、咽漱液：

用10ml不含抗菌素的采样液漱口，漱口时让患者头部微后仰,发“噢声”，让洗液在咽部转动。

然后，将咽漱液收集于50ml无菌的螺口塑料管中.无条件可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中。

　注：

取鼻洗液和漱口液时,需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史,如有洗液和含漱液中不应含有抗菌素。

5、深咳痰液：

要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液的螺口塑料管中.

6、呼吸道灌洗液:

将收集器头部从鼻口处插入气管（约30cm）深处，注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。

收集抽取的粘液，并用采集液涮洗收集器1次。

7、胸水：

在B超定位下进行胸腔穿刺,抽取胸水5ml，置于无菌的塑料口管中。

8、肺组织活检标本：

在超声或X线定位下，经皮穿刺取肺组织活检标本，置于含3ml采样液的塑料螺口管中。

9、尸检标本:

每一采部位分别使用不同消毒器械，以防交叉污染；每种组织应多部位取材,各部位应取20-50g，淋巴结取2个。

10、粪便标本：

采取5—10g粪便置于含5—10ml采样液无菌螺口管中，严格密封。

11、血清标本：

用真空负压血管采集血液标本5ml，室温静止30分钟,1500-2000rpm离心10分钟,收集血清于无菌螺口塑料管中.

12、淤血点：

选病人皮肤上的新鲜淤斑或淤血点，消毒后用针头挑破，挤出组织液，用无菌棉签蘸取先接种含双抗的葡萄糖增菌肉汤管中增菌8~12小时后分离培养或直接接种EPV平板，再涂片染色直接镜检。

涂片也可做免疫荧光检查。

13、尿液标本:

取病人急性期尿液5ml加20ml无水乙醇，置4℃2小时，离心（3000转/分钟，15分钟），弃上清，收集沉淀部分加0.25ml磷酸盐缓冲液将其溶解，同前离心，吸取上清液检测脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群特异抗原

麻疹、风疹:

取病人急性期尿液5—-10ml于无菌螺口塑料管中。

14、脑脊液（CSF）：

如果怀疑为脑膜炎,CSF是用于分离和鉴定病原体最好的标本.取患者CSF2-3ml，注入无菌的试管内。

3000转/分，离心20分钟，用无菌吸管取沉淀物直接接种到10％羊血巧克力色琼脂平皿上做细菌培养。

CSF沉渣还可涂片，作革兰氏染色镜检。

CSF离心后的上清液可置—20℃，供做血清学检查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群特异性抗原.

五、采样液

1、普通肉汤

2、ph7.4～7。

6的Hank’s

3、5％水解乳蛋白液。

为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入抗菌素，以往抗菌素多用青、链霉素（每毫升含青

霉素1000单位.链霉素100微克），近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性,故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入0。

1m1的l0mg／ml）

水解乳蛋白5。

0gNaCI0.85g加去离子水100ml高压灭菌后4度保存

4、0。

85%生理盐水

六、标本运送

1、实验室间传递的样品应为血清或血浆,除特殊情况外一般不运送全血。

和其他标本.

2、应采用WHO提出的三级包装系统

2。

1第一层容器:

装样品，要求防渗漏。

样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。

在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。

随样品应附有送检单,送检单应与样品分开放置。

2.2第二层容器：

要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。

将试管装入专用带盖的容器内,容器的材料要易于消毒处理.

2。

3第三层容器:

放在一个运输用外层包装内,应易于消毒。

在第三层容器外面要贴标签（数量，收、发件人）.

3、血清和血浆样品应在2~8℃条件下由专人运送。

用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品应在室温下18~23℃运送。

每一包装的体积以不超过50ml为宜。

4、运送感染性材料必须有记录.

七、样品接收

1含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开,用后的包裹应进行消毒。

2核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。

如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出,对样品管和盛器消毒,同时报告有关领导和专家.

3检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况.如果污染过重或者认为样品不能被接受,则应将样品安全废弃.并要将样品情况立即通知送样人。

4打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅.

样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行.同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。

5、接收样品时应填写样品接收单.

八、拒收样品

1、严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况

2、样品破碎、样品溢出的情况

3、没按要求进行样品包装三层保护的情况

4、样品姓名、编号脱落，模糊的情况

5、无送检单，有送检单没领导签字和公章的情况

九、样品保存

l、标本应在低温下，24小时内运送至实验室。

标本至实验室后，病毒分离标本应尽快进行接种分离，48h内能进行接种的可置于4℃保存，如未能接种应置－70℃或以下保存.

2、血清标本可在4℃存放一周，长期保存置－20'C或以下.

3、试验前血清标本以56℃30分钟处理,去除非特异性物质及补体

4、用于抗原和核酸检测的血浆和血细胞样品应冻存于—20℃以下，进行病毒RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。

5、用于CD4+/CD8+T淋巴细胞测定的样品不能长期保存，样品采集时间超过48h则不可检测.在室温下（18~23℃）保存和运输样品，避免极端温度（冷冻或过热）。

超过37℃的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。

天气热时，需要用一个隔热的容器装样品,并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。

这种方法有助样品的保存.

CD4+和CD8+T淋巴细胞样品采集、运输和接收

1样品的采集

1。

1选择合适的抗凝剂，分别用于血液学检测和流式细胞仪的免疫表型检测.

1。

1。

1用于血液学检测的抗凝剂

（1）EDTA（1.5±0.15mg/ml血液）。

（2）在血球分析仪生产商允许的时间范围内检测，不超过30h，不检测超出抗凝时间范围的样品.

1。

1.2用于流式细胞仪免疫表型检测的抗凝剂

（1）用K3EDTA抗凝，收集样品应在30h以内,尽早（8h以内）处理。

（2）用ACD或肝素抗凝，收集样品在48h以内,尽早（8h以内）处理。

1.2静脉采血收集血样，将血液注入一个事先加入适当抗凝剂的试管（有条件者最好用真空试管）。

1。

2。

1当收集儿童样品时，采用儿童用注射器、小试管.

1。

2。

2采血后立即握住试管两端，颠倒混匀数次,将血液与抗凝剂混匀，以防止凝固。

1。

3准备适当数量的样品管

1.3.1当同一样品的血球检测和流式细胞仪免疫表型检测在同一个实验室内进行时,用1个装有K3EDTA的试管即可。

1。

3.2在所有其它条件下用2个试管（用K3EDTA作血球检测，用K3EDTA、ACD或肝素作流式细胞仪免疫表型检测）。

1.4对所有样品编号，并写明日期和收集时间。

2样品运输

2。

1在室温下（18~23℃）保存和运输样品,避免极端温度（冷冻或过热）。

超过37℃的温度会破坏细胞，对血液学和流式细胞仪的检测有影响。

天气热时,需要用一个隔热的容器装样品，并且把这个容器放于另一个有冰袋和吸热物质的容器中。

这种方法有助样品的保存。

2。

2尽可能快地将样品送至免疫表型检测实验室。

2.3如需运送样品到其它地点时，应将装样品的试管放于一个防漏的容器中，并将此容器放于一个装有充足的吸水性物质的纸罐中，以防止震动并可吸收所有因试管破裂漏出的血液.盖紧纸罐,用橡皮带系紧。

2.4应选择特定的方案，并且安排合适的时间收集和运输样品。

3样品接收

3。

1样品到达以后立即检查试管及其所装的血样。

3。

2如有以下现象发生，采取正确的方法处理：

3.2.1如果样品较热或较冷，但没有明显的溶血或结冰,可以处理样品，但要在工作表的报告上注明温度条件.不要马上加热和冷冻样品以使其达到室温，因为这样会对免疫表型检测的结果产生不利的影响，散射光模式的不正常会显示出所受到的影响。

3.2.2不可检测溶血或结冰的样品。

3。

2.3不可检测凝血的样品。

3。

2.4如果样品的采集时间已超出48h，不可检测。

流脑

标本采集

1、

1、脑脊液（CSF）：

如果怀疑为脑膜炎，CSF是用于分离和鉴定病原体最好的标本。

取患者CSF2-3ml,注入无菌的试管内。

3000转/分，离心20分钟，用无菌吸管取沉淀物直接接种到10％羊血巧克力色琼脂平皿上做细菌培养。

CSF沉渣还可涂片，作革兰氏染色镜检。

CSF离心后的上清液可置—20℃，供做血清学检查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群特异性抗原.

2、血液：

疾病早期，病人高热时采取静脉血5～7ml，往盛有50ml葡萄糖肉汤的三角瓶内注入3～5ml血做增菌培养。

留2ml血注入无菌试管内分离血清,做血清学检查脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群特异抗原和急性期抗体。

在病人病后1-3周采取第二次血液2ml,注入无菌试管内分离血清,检查病人恢复期抗体。

若恢复期抗体的滴度比急性期升高4倍或4倍以上，具有追溯诊断的意义.

3、淤血点：

选病人皮肤上的新鲜淤斑或淤血点，消毒后用针头挑破，挤出组织液，用无菌棉签蘸取先接种含双抗的葡萄糖增菌肉汤管中增菌8～12小时后分离培养或直接接种EPV平板,再涂片染色直接镜检.涂片也可做免疫荧光检查.

4、鼻咽拭子：

对健康人群或病人密切接触者进行带菌检验时一般采咽拭子。

咽拭子直接接种到10%巧克力色双抗血琼脂平皿或卵黄双抗琼脂平皿上分离Nm。

咽拭子也可以插入卵黄双抗液体培养基或双抗兔血清肉汤中37℃,5%CO2增菌后再分离。

5、尿液标本:

取病人急性期尿液5ml加20ml无水乙醇,置4℃2小时，离心（3000转/分钟，15分钟）,弃上清,收集沉淀部分加0。

25ml磷酸盐缓冲液将其溶解，同前离心，吸取上清液检测脑膜炎奈瑟氏菌（Nm）群特异抗原。

菌种保存

a）保温运送：

脑膜炎双球菌对温度较为敏感,温度过低或过高均可导致菌株死亡。

在运送样品及培养物（葡萄糖肉汤或平板培养基）时，应保持样品处于20－36℃之间，切记不能低温运送（检测抗体的血清标本除外）

2）分离出脑膜炎双球菌的保存与运送:

将鲜牛奶煮沸三次,每次煮沸后冷却，去除奶液上层的油脂（奶液上层的奶皮）,8磅15分钟高压后分装成小管.将脑膜炎双球菌挑入含1ml脱脂牛奶中,将菌苔在管壁研磨振荡，使细菌分散在培养基中。

－20℃冷冻保存（半年到一年）并冷冻运送至省疾控中心.