心衰与免疫因子Word文件下载.docx

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0.01）.3.ThelevelsofGM-CSF，IgGandC3hadnorelationwiththecauseofdisease.Conclusions1.TheresultsofthisstudydemonstrateelevatedGM-CSF,IgGandC3levelsinCHFareassociatedwiththedegreeofleftventriculardysfunction.ThisobservationsuggeststhattheimmunoregultoryfunctionisdisturbedinpatientswithCHFandthisabnormalitymaybedeeplyinvolvedinthepathogenesisandprogressionofthedisease.2.ACAisakindofautoantibodies,anditcanbedetectedintheserumofmanyautoimmunediseasesandcardiovasculardiseases.ThefindingsindicatethatACA-IgGcanbedetectedintheserumofCHFpatients.ItisthereforededucedthatthepositiveratioofACA-IgGmayberelatedtothepathogenesisofCHF.

Keywords：

CongestiveHeartFailure;

Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor;

AnticardiolipinAntibodies;

ImmunoglobulinandComplementC3;

PeripheralBloodLymphocyte

前言

充血性心力衰竭（CHF）是多种心血管疾病发展的严重阶段,也是最主要的死亡原因。

近年来的临床观察及实验研究结果显示，充血性心力衰竭也具有慢性炎症的某些特征。

CHF时除神经内分泌激活外，还存在广泛的免疫活动异常，其异常程度与CHF程度、不良预后及心原性恶液质等有密切关系[1-4]。

有的学者提出了心力衰竭发病的“细胞因子假说”，认为细胞因子之间的网络调控对于CHF的发生发展具有重要的作用[5，6]。

目前的研究较多的主要有肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-2（IL-2）、干扰素γ（IFN-γ）等。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）是造血细胞因子家族中的成员，是一种能在造血干细胞、祖细胞和成熟细胞不同水平上促其生成和功能的多相性造血因子和内源性调节因子。

GM-CSF不仅是一种活跃的非特异性免疫效应因子，而且它还能增强抗体依赖性细胞介导细胞毒作用和特异性免疫应答。

目前，GM-CSF在感染、免疫和病理损伤作用的研究刚刚开始，最近的研究发现GM-CSF与充血性心力衰竭的发生发展有一定关系，但尚存在分歧。

胡大一[7，8]等研究发现不同心脏病心衰患者血清中心脏β1与M2受体的自身抗体阳性率明显升高，推测自身抗体可能参与心肌重构和（或）心衰的病理变化。

抗心磷脂抗体（anticardiolipinantibodies，ACA）是一种自身抗体，可出现在多种自身免疫性疾病中。

最近许多研究发现ACA在多种心血管疾病中也出现有意义的阳性反应。

本研究通过检测正常人和多种不同基础心血管疾病的心衰患者血清GM-CSF、ACA、免疫球蛋白、补体C3及淋巴细胞计数等免疫学指标，分析各指标与慢性充血性心力衰竭心功能及不同病因等之间的关系，进一步探讨免疫调节异常在慢性充血性心力衰竭发生发展中的临床意义。

材料与方法

1研究对象

1.1心力衰竭组

83例（女46例，男37例）符合的心衰病人均系2002年5月至2003年1月的住院患者,年龄59±

14.19岁,心功能（NYHA诊断标准）Ⅱ-Ⅲ级56例，Ⅳ级27例，其中缺血性心脏病（ICD）18例，高血压性心脏病（HHD）21例，风湿性心脏病（RHD）22例，扩张型心肌病（DCM））22例。

以上入选病例均符合NYHA关于CHF的诊断和分级标准，均无严重的肝、肾功能损害，恶性肿瘤和3个月内有风湿活动的患者排除在外。

1.2正常对照组

随机选择20例健康正常人（男9例，女11例,性别比例两组间比较无显著性差异,P>

0.05）为对照组，均系2002年5月至2003年1月我院的健康体检者，年龄49±

8.97岁（与病例组比较无显著性差异,P>

0.05），对照组胸片、肝功能、尿常规未见异常。

以上2组均排除内分泌及自身免疫性疾病，采集血样前1月内未服用过免疫抑制剂。

2主要实验仪器

●彩色多普勒超声诊断系统：

ATL-超9DP型（U.S.A）

●DL6大容量冷冻离心机（湖南仪器仪表总厂）

●GC-1200γ放射免疫计数器（中国科技大学）

●SANYO超低温冰箱（JAPAN）

●S648电热恒温水浴箱

●AnthosHTⅡ全自动酶标仪（AUSTRIA）

●洗板机（北京普利生公司）

●BNProspec特定蛋白分析仪（GERMANY）

●CELL-DYN3700血球计数仪（U.S.A）

3主要实验试剂

●抗心磷脂IgG抗体测定试剂盒（ELISA）：

郑州博赛生物工程有限公司

●人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）放免药盒：

北京市福瑞生物工程有限公司

●免疫球蛋白及补体测定试剂盒（散色免疫比浊法）：

上海德灵公司

4实验方法

4.1血标本采集和处理

所有受试者均于禁食12小时后抽空腹静脉血3ml置入不含抗凝剂的试管中，在4oC下放置1小时，待红细胞沉降和纤维蛋白析出，然后在4oC以3000rpm/min的速度离心20分钟，离心后取上清夜（血清）-20oC保存备测。

4.2免疫指标检测

4.2.1GM-CSF检测

1实验方法：

试管编号，按下列程序操作：

操作表：

单位：

μl

标准品

标本

125I-GM-CSF

抗血清

分离剂

NSBP管

200（So）

——

100

1000

S0-S6管

标本管

混匀，4oC放置15分钟，离心（3500转/分）15分钟，吸去上清夜，测各管沉淀的放射性计数。

②结果计算

计算各管的百分结合率：

以So（cpm数）为Bo，各标准管或标本管（cpm数）为Bi求各管的百分结合率。

以Bi/Bo为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，在半对数坐标纸上画抑制曲线，未知样品浓度可根据其Bi/Bo的百分结合率从标准曲线上查出。

Bi（cpm）—NBS（cpm）

Bi/Bo%=×

100

Bo（cpm）—NBS（cpm）

③技术特性

灵敏度：

<

0.05ng/ml

测定范围：

0.25-10ng/ml

精密度：

批内CVw<

5%；

批间CVb<

10%

4.2.2ACA测定

4.2.2.1操作步骤：

1试剂重建。

②加样：

每批设空白对照、阴性对照、阳性对照各1孔，除阴性对照、阳性对照孔外，每孔各加样品稀释液100μl和待检血清20μl（空白对照孔不加），阴、阳性对照孔分别加阴、阳性对照液2滴（或100μl），混匀，用封膜覆盖反应板，置37oC温育30分钟。

③洗涤：

甩去孔内液体；

每孔充满洗液后再甩去，反复洗涤6次；

最后在吸水纸上拍干。

④加酶结合物：

每孔加酶结合物1滴，充分混匀后，用封膜覆盖反应板，置37oC温育30分钟。

⑤洗涤：

甩净孔内液体，每孔加洗液，洗涤方法同③。

⑥显色：

每孔加底物1滴，立即加显色剂1滴，轻轻混匀，置37oC显色10分钟。

⑦终止：

每孔加终止液1滴，终止反应。

⑧比色：

用空白对照孔调零，用酶标仪在450nm波长测定每孔OD值。

4.2.2.2结果判断：

临界值=阴性对照×

2.5（阴性对照OD值<

0.05，以0.05计）

被检样品OD值>

临界值为阳性，否则为阴性。

4.2.3免疫球蛋白和补体C3测定

应用散色比浊法，由德国BNProspec特定蛋白分析仪测定得出。

4.3心功能检测

患者休息10分钟后，取仰卧位或左侧卧位30-45°

，必要时可达90°

。

有心功能不全者，可将头胸抬高，以减轻气急、心慌等。

在患者被测胸壁透声窗处涂抹藕合剂，用二维胸骨旁左室长轴切面、心尖四腔心切面、心尖五腔心切面、大动脉短轴切面、二尖瓣短轴切面、乳头肌短轴切面等引导，常规观察心脏结构。

在最佳清晰度的胸骨旁左室长轴切面，将取样线置于2a区，与左室长轴尽量垂直，然后启动心功能测量程序，在M型上，电子游标在收缩期依次定点于室间隔（IVS）右室面、IVS左室面、左室后壁（LVPW）左室缘、LVPW后缘。

IVS右室面与IVS左室面间距离测得收缩期IVS厚度，IVS左室面与LVPW左室缘间距离测得收缩期LV内径，LVPW左室缘与LVPW后缘间距离测得收缩期LVPW厚度。

以上述方法再在舒张期定点于上述位置，得出舒张期室壁厚度及腔室内径，最后结束功能测定，根据机内自带软件系统得出EF、CI等心功能指标。

4.4数据处理和统计方法

计量资料的数据以均值加减标准差（

±

S）表示；

多组间均值比较采用单因素方差分析；

均值间两两比较用SNK法；

两组间配对数据比较采用t检验；

计量指标间相关关系进行直线相关分析；

所有实验数据均采用SPSS10.0软件包进行统计。

以双侧α=0.05为显著性检验水准，P<

0.05为有统计学意义。

结果

1心功能参数比较

不同病因相同心功能级别之间，心功能参数无显著差异（P>

相同病因不同心功能分级（NYHA）之间心功能参数LVDd、LVDs随心功能级别增加显著升高（P<

由表1可见心衰组与正常对照组相比较，心功能各参数均有显著差异（P<

0.01）

表1心衰组与对照组心功能参数比较（

S）

LVDd（mm）

LVDs（mm）

CI（L/min.m2）

EF（%）

CHF（n=83）

Control（n=20）

56.51±

9.09*

36.83±

3.26

43.58±

9.78*

20.67±

3.42

2.13±

0.54*

3.56±

0.41

41.88±

13.33*

66.28±

5.11

注：

LVDd:

左室舒张末期内径LVDs:

左室收缩末期内径CI:

心脏指数EF:

射血分数

*P<

0.01vs.control

2免疫学指标变化

2.1心衰组与对照组免疫学指标比较

如表2所示,心衰组淋巴细胞计数明显低于对照组（P<

0.01），免疫球蛋白IgG、IgA、补体C3及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子均明显高于对照组（P<

0.01），心衰组IgM有增高趋势，但无统计学意义（P>

表2心衰组与对照组免疫学指标的比较（

LC（g/L）

IgG（g/L）

IgM（g/L）

IgA（g/L）

C3（g/L）

GM-CSF（ng/ml）

1.33±

0.37*

12.2±

2.19*

1.21±

0.13

1.74±

0.21*

1.03±

0.15*

1.34±

0.42*

2.34±

0.55

8.44±

0.94

1.11±

0.19

1.41±

0.25

0.80±

0.06

0.52±

LC：

淋巴细胞Ig：

免疫球蛋白C3：

补体3GM-CSF：

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子*P<

2.2不同病因CHF患者免疫学指标的比较

将CHF患者按不同病因分为各亚组对观察指标进行分析。

结果发现，在相同心功能级别不同病因之间，除风湿性心脏病免疫球蛋白IgG明显高于其他各组外，其余免疫学指标差别均无统计学意义（P>

0.05）（见表3）。

2.3不同心功能级别CHF患者免疫学指标的变化

将CHF患者在相同病因组内按不同心功能分级分为各亚组进行比较，结果显示各病因组不同心功能分级之间,淋巴细胞计数、免疫球蛋白IgM、IgA比较无显著性差异（P>

0.05），随心功能级别升高，免疫球蛋白IgG及补体C3和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子水平明显增加，其中缺血性心脏病组IgG水平，III和IV级心功能患者明显高于II级心功能患者（P<

0.01）；

四组心衰补体C3水平IV级心功能患者均明显高于II和III级心功能患者（P<

0.01），高血压性心脏病和风湿性心脏病组III级心功能患者补体C3水平明显高于II级心功能患者（P<

高血压性心脏病、扩张型心肌病、风湿性心脏病三组血清IgG水平及四组心衰患者血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子水平均随心功能分级升高而显著增高（P<

0.01）（见表3）。

表3相同病因不同心功能之间免疫学指标的比较（

NYHAFC

ICD

II

1.55±

0.20

9.02±

0.61**ΔΔ☆☆

1.14±

0.10

1.69±

0.18

0.85±

0.03ΔΔ

0.70±

0.11**ΔΔ

n=18

III

12.09±

0.81Δ☆☆

0.16

0.26

1.01±

0.09ΔΔ

1.49±

IV

1.25±

0.38

13.49±

0.95☆☆

1.75±

0.22

1.20±

0.07

1.78±

0.09

HHD

0.03**ΔΔ

n=21

0.81ΔΔ☆☆

0.16

DCM

1.43±

9.21±

0.90**ΔΔ☆☆

0.05

0.15

.93±

0.05ΔΔ

0.76±

0.12**ΔΔ

n=22

1.30±

0.23

12.27±

0.90ΔΔ☆☆

0.12

1.71±

0.97±

0.07ΔΔ

1.13±

0.44

14.321±

0.13☆

1.29±

1.77±

0.29

0.11

RHD

1.58±

0.53

10.84±

0.41**ΔΔ

1.19±

0.24

0.05**ΔΔ

0.82±

0.06**ΔΔ

14.03±

1.10ΔΔ

1.80±

0.99±

0.06ΔΔ

1.44±

15.52±

0.72

1.82±

1.24±

ICD：

缺血性心脏病HHD：

高血压性心脏病DCM：

扩张型心肌病RHD：

风湿性心脏病NYHAFC：

纽约心脏病学会心功能分级

0.05，**P<

0.01vs.III;

ΔP<

0.05,ΔΔP<

0.01vs.IVinthegroupofthesamecauseofdisease

☆P<

0.05，☆☆P<

0.01vs.RHDinthegroupofthesameNYHAFC

3免疫指标与心功能的关系

将各组CHF患者血清粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、免疫球蛋白IgG、IgM、IgA及补体C3、淋巴细胞计数等免疫学指标水平与反映心功能的指标左室射血分数（EF）进行直线相关分析，结果发现GM-CSF、IgG、补体C3