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9.Rotation

10.肢体对称试验评分法

11.rotarodtest

12.adhesive-removalsomatosensorytest

13.SpontaneousActivity

14.SymmetryintheMovementofFourLimbs

15.ForepawOutstretching

16.Climbing

17.BodyProprioception

18.ResponsetoVibrissaeTouch

改善记忆作用

1.跳台试验

2.避暗试验

3.穿梭箱试验

4.水迷宫试验

Motorbehavior

(1)observationofspontaneousipsilateralcircling,

(2)contralateralhindlimbretraction,

(3)beamwalkingability,平衡木测验(balancebeamtest)

(4)bilateralforepawgrasp,

Skilledforelimbfunction

(1)staircasefeedingapparatus

nociception

(1)plantartest

1.神经行为学检查:

Longa评分法

神经学检查分5个等级:

0分:

正常,无神经功能缺损;

1分:

左侧前爪不能完全伸展,轻度神经功能缺损;

2分:

行走时,大鼠向左侧(瘫痪侧)转圈,中度神经功能缺损;

3分:

行走时,大鼠身体向左侧(瘫痪侧)倾倒。

重度神经功能缺损;

4分:

不能自发行走,有意识丧失。

2.Berderson评分法姿势反射测验(posturalreflextest)提尾悬空试验

大鼠提尾悬空一米,观察前肢屈曲情况。

正常大鼠向地面伸展双上肢。

可伸展双上肢向地面并无其它神经缺陷大鼠得0分。

梗死后大鼠持续屈曲损伤半球对测患肢;

各种不同姿势,从轻度腕屈曲、肩内收、肘伸展到严重姿势,完全腕、肘屈曲,肩内旋转并内收。

有任何持续前肢屈曲和其它不正常得1分。

大鼠被放于大的软垫子上,表面有大鼠可用爪子牢牢抓住的塑料压膜纸。

用手抓其尾巴,缓慢在鼠肩后给予侧压直至前肢滑动几英寸。

此手法在每个方向重复几次。

正常或轻度功能损伤大鼠两侧抵抗滑动力相同。

严重功能损伤大鼠瘫痪侧始终抵抗力下降,得2分。

然后让大鼠自由活动,观察转圈行为。

大鼠持续向瘫痪侧转圈得3分。

前肢屈曲带有侧推抵抗力下降经常见到;

双上肢屈曲并侧推抵抗力下降大鼠经常有转圈行为。

神经检查在3-5分钟内完成。

正常 

0分 

未见行为缺陷

中度 

1分 

前肢屈曲(即提尾悬空实验阳性)

重度 

2分 

侧推抵抗力下降(即侧向推力实验阳性).伴前肢屈曲.无转圈行为

3分 

同2级行为.伴自发性旋转。

提起鼠尾.使其离地0.33m高.观察前肢情况。

正常大鼠两前肢对称向前伸开;

如果有肩部内旋、前肢内收现象发生者.根据其严重程度.最高评分为4分.正常评分为0分。

将动物置于平滑地板上.分别推其左、右肩向对侧移动,此时检查动物抵抗推动时的阻力,正常大鼠两侧推动的阻力明显对称。

如一侧阻力下降者.可根据下降程度评1-3分.正常评分为0分。

观察两前肢肌力。

将动物两前肢置于一金属网上.然后轻提起大鼠.检查两前肢肌力。

正常左右对称.如有一侧前肢肌力下降者.根据下降程度评为1-3分.正常评分为0分。

根据上述行为检查的情况.积分值为0一10分。

积分越高说明动物行为障碍越严重。

此测验对皮层和纹状体的损伤较敏感。

3攀绳实验:

本实验主要检查大鼠双前肢和双后肢的协调配合能力。

取直径1.5cm的麻绳从高1m、长和宽分别为15、50cm的平台上垂下,手术前1d训练每只大鼠.使之能够爬到绳子的上1/3。

每个测试日测试3次。

评分的标准如下:

0分.不需任何刺激在10s内爬上平台;

1分.不需任何刺激在15s内爬上平台;

2分.刺激次数小于5次.在30s内爬上平台;

3分.刺激次数小于5次.在60s内爬上平台;

4分.刺激次数大于5次.在60s内爬上平台或是刺激小于5次.但爬上平台时间超过60s;

5分.大鼠不能爬上平台。

网屏训练:

网屏为50cmX40cm网带.网眼为lcmXlcm.网板的左右和上方都用25cm高的木板框边.网屏距地面高度为80cm.下方铺以12cm厚的海绵。

先将网屏水平放置.将老鼠放在其上.然后缓缓地将其一端抬高.在2s内将此屏风变成垂直位.保持5s.观察大鼠是否会从网屏上下来或用前爪抓握住网屏,从而评价前爪抓握能力及肌力情况。

网屏实验:

评分标准分为4个等级。

0分:

前爪握住网屏达5s之久,不会掉下来;

1分:

暂时握住网屏,滑落一段距离,但没有掉下来;

2分:

在5s内掉下来;

3分:

网屏转动时,鼠即刻掉下来。

肢体放置于三种独立刺激(视觉、触觉、本体感觉)以评测运动感觉完整性。

参照Kawamata等[2]采用的动物行为测试评分方法。

具体实验有:

前肢放置实验,包括

(1)视觉亚实验,即前方刺激———实验者将动物握于手中,使其前爪悬空,自桌面上方10cm处向桌面缓慢斜线靠近(此时桌子位于大鼠前方),大鼠正常反应为前肢即刻抓向桌面,损伤大鼠则表现为肢体反应延迟。

0分———动物肢体放置反应正常;

1分———反应延迟但不超过2s;

2分———反应延迟且超过2s。

侧方刺激,此时桌子位于动物侧方,其余实验方法及评分标准同前方刺激。

(2)触觉亚实验,将动物置于桶状凹陷实验器内,使其前爪悬空,此时大鼠应该既看不见,也不能用胡须触及桌面,用其前爪背侧轻触桌面,刺激深度仅达皮肤和毛发,动物反应及评分同视觉亚实验,触觉刺激同样分前方及侧方刺激。

(3)本体觉亚实验,操作及评分同触觉亚实验,仅刺激深度不同,本体觉亚实验给予前爪较大压力,刺激深达肌肉及关节。

该亚实验只有前方刺激。

动物前肢放置实验总分范围为0~10分,功能损伤越重,得分越高。

方法:

本实验所用敞箱为正方形,长、宽各80cm,高40cm,底面由面积相等边长16cm的正方形25块组成,以动物穿越底面的块数为水平活动(crossing)得分,以直立次数为垂直活动(rearing)得分,每只动物共进行7次测定,每次3min

Open2Field法是测定抑郁症大鼠行为学的经典方法,分水平运动和垂直运动2个观察面,以观察得分为评分计算单位,记各组大鼠的水平运动评分及垂直运动评分。

Elevatedopenfieldactivityischaracteristicofhippocampallydamagedanimals19202122andhasbeenobservedinanimalswithstriatal/corticaldamageaswell.23Ratsareplacedinanovelenvironment(3x3ft)with3-inch-squaregridmarkingsonthebase.Thenumberoftimesaratcrossesagridlineisrecordedfora5-minuteperiod.

7.肢体对称试验评分法

将大鼠置于网中,网眼大小为2.3x2.3cm,当大鼠在网络中行走时,计数在2分钟内其前爪漏到网眼中的次数。

计算公式为:

(脑病变对侧前爪的错步数-病变同侧前爪的错步数)/总步数。

其分值如为正数表明脑病变对侧功能缺损;

如为负数表明脑病变同侧功能缺损。

8.mNSS

mNSS体系的设计原理,评分越低表示功能越健全,0分表示功能完全健全的大鼠。

modifiedNeurologicalSeverityScores

见附件1

9.转动杆测验(rotatingpoletest)

转棒上行走测评:

转动过程中.鼠可在棒上行走;

转动过程中.60s以上时间.鼠不会掉下来;

转动开始后.鼠从棒上掉下来;

转动开始前.鼠从棒上掉下来。

10.Thedetectionwasoperatedat1weekaftersurgerybyinjecting0.5mg/kgofapomorphineintoabdominalcavityforobservationofthechangesinThebehavioursforonceaweekandcontinuousdetectedfor6weeks.Ifconstantright-siderotationoccurredandThenumbersofThecirclesrotatedweremorethan210rper30minutes,thoseratswereconsideredassuccessfulmodels:

ifnorotationoccurredorThedirectionofrotationwasnotconstantorconstantright-sideorlell-siderotationbutThespeedwasslowerthan210rper30minutes,thoseanimalswereconsideredasunsuccessfulmodels.Inadditionaltorotation,othercompanionedabnormalbehavioursalsoshouldbeobserved,suchas,tremor,sluggish,grab,andsmellexploring,etc.

ratswereplacedonanacceleratingrotarodcylinder,andthetimetheanimalsremainedontherotarodwasmeasured.Thespeedwasslowlyincreasedfrom4to40rpmwithin5minutes.Atrialendediftheanimalfellofftherungsorgrippedthedeviceandspunaroundfor2consecutiverevolutionswithoutattemptingtowalkontherungs.Theanimalsweretrained3daysbeforeMCAO.Themeanduration(inseconds)onthedevicewasrecordedwith3rotarodmeasurements1daybeforesurgery.Motortestdataarepresentedaspercentageofmeanduration(3trials)ontherotarodcomparedwiththeinternalbaselinecontrol(beforesurgery).

somatosensorydeficitwasmeasuredbothbeforeandaftersurgery.Allratswerefamiliarizedwiththetestingenvironment.Intheinitialtest,2smallpiecesofadhesive-backedpaperdots(ofequalsize,113.1mm2)wereusedasbilateraltactilestimulioccupyingthedistal-radialregiononthewristofeachforelimb.Theratwasthenreturnedtoitscage.Thetimetoremoveeachstimulusfromforelimbswasrecordedon5trialsperday.Individualtrialswereseparatedbyatleast5minutes.Beforesurgery,theanimalsweretrainedfor3days.Oncetheratswereabletoremovethedotswithin10seconds,theyweresubjectedtoMCAO.

Theanimalwasobservedfor5minutesinitsnormalenvironment(cage).Therat'

sactivitywasassessedbyitsabilitytoapproachallfourwallsofthecage.Scoresindicatethefollowing:

3,ratmovedaround,exploredtheenvironment,andapproachedatleastthreewallsofthecage;

2,slightlyaffectedratmovedaboutinthecagebutdidnotapproachallsidesandhesitatedtomove,althoughiteventuallyreachedatleastoneupperrimofthecage;

1,severelyaffectedratdidnotriseupatallandbarelymovedinthecage;

and0,ratdidnotmoveatall.

Theratwasheldintheairbythetailtoobservesymmetryinthemovementofthefourlimbs.Scoresindicatethefollowing:

3,allfourlimbsextendedsymmetrically;

2,limbsonleftsideextendedlessormoreslowlythanthoseontheright;

1,limbsonleftsideshowedminimalmovement;

and0,forelimbonleftsidedidnotmoveatall.

JulioH.Garcia,MD;

SimoneWagner,MD;

Kai-FengLiu,MD;

Xiao-jiangHu,MD,PhD。

NeurologicalDeficitandExtentofNeuronalNecrosisAttributabletoMiddleCerebralArteryOcclusioninRats。

Stroke.1995;

26:

627-635。

Theratwasbroughtuptotheedgeofthetableandmadetowalkonforelimbswhilebeingheldbythetail.Symmetryintheoutstretchingofbothforelimbswasobservedwhiletheratreachedthetableandthehindlimbswerekeptintheair.Scoresindicatethefollowing:

3,bothforelimbswereoutstretched,andtheratwalkedsymmetricallyonforepaws;

2,leftsideoutstretchedlessthantheright,andforepawwalkingwasimpaired;

1,leftforelimbmovedminimally;

and0,leftforelimbdidnotmove.

Theratwasplacedonthewallofawirecage.Normallytheratusesallfourlimbstoclimbupthewall.Whentheratwasremovedfromthewirecagebypullingitoffbythetail,thestrengthofattachmentwasnoted.Scoresindicatethefollowing:

3,ratclimbedeasilyandgrippedtightlytothewire;

2,leftsidewasimpairedwhileclimbingordidnotgripashardastherightside;

and1,ratfailedtoclimbortendedtocircleinsteadofclimbing

17.BodyProprioception

Theratwastouchedwithabluntstickoneachsideofthebody,andthereactiontothestimuluswasobserved.Scoresindicatethefollowing:

3,ratreactedbyturningheadandwasequallystartledbythestimulusonbothsides;

2,ratreactedslowlytostimulusonleftside;

and1,ratdidnotrespondtothestimulusplacedontheleftside.

Abluntstickwasbrushedagainstthevibrissaeoneachside;

thestickwasmovedtowardthewhiskersfromtherearoftheanimaltoavoidenteringthevisualfields.Scoresindicatethefollowing:

3,ratreactedbyturningheadorwasequallystartledbythestimulusonbothsides;

and1,ratdidnotrespondtostimulusontheleftside.

1.跳台试验

跳台装置为lOcmX15cmX60cm的被动条件反射箱,四周用黑色塑料板、底面铺可通电的铜栅,每间内放置一高4.5cm,直径4.5cm的橡皮垫作为动物回避电击的安全区,先将动物放在反应箱内的橡皮台上适应3min,然后立即通以40V交流电,动物受到电击后逃避反应为跳上橡皮台。

记录5min内大鼠受到电击次数,称为错误次数。

24h后在底部铜栅通电情况下,直接将动物置于平台上,记录第1次跳下的潜伏期和5min内的错误次数。

2.避暗实验Avoidanceresponse

根据大鼠有嗜暗习性分设明暗两室。

明室上方20cm处悬一个60W日光灯,在暗室的中后部分底部铜栅加40V电压,两室之间设有一直径为3cm大小的圆洞。

实验时将大鼠背对洞口放入明室,同时启动计时表,动物自放入明室至进入暗室遭电击所需时间为潜伏期,鼠受电击后可自行逃出暗室。

记录潜伏期及5min内动物受电击次数,24h后复测。

4.水迷宫试验(Morris)

4.1Morris水迷宫为圆形水池.直径100cm.深50cm.水深30cm.水温(24士2)℃.水而覆一层塑料泡沫屑.池壁上4个等距离点分水池为4个象限.在第三象限中央放置平台.平台无色透明.直径6cm.高28cm.平台没于水而下2cm.水池周围参照物保持不变。

试验包括:

①定位航行试验(placenavigationtest):

实验历时7d。

将大鼠从入水面向池壁置入水槽中.记录大鼠从入水到爬上平台所需的时间.即逃避潜伏期。

每只大鼠每人从4个不同象限入水点入水

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