Realtime PCR primers designWord文件下载.docx
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2,Cel>
600bp
3,Rashidulpaper16S484bp
So,redesignprimersforRealtimepcr.
RealtimePCRprimersdesign(forSYBRgreen,noprobe)
Iused"
primerpremier"
softwareandfollowedsomerolestoselectsomeprimerpairs(productssize100~470bp,Tm>
60C,noharpin,nodimer,3'
-no"
T"
3'
-noconsecutivemorethan2~3"
G"
or"
C"
.)
Doyouthinkwhichrolesshouldbeobeyedandwhichnotsostrictly?
AndwhenBLASTtheprimer,therearealwayspartlymatchexists,(pleaseseenextpictures),thisno?
WecantalkatLab,Thankyou!
1,Xoo_0175Amy
(1)FctcaacgaagcaacgacgaccRgccaacccattccaacaagc
F
R
(2)FctcaacgaagcaacgacgaccRgctccaccactccaccaacg
(3)FgagtggttgattgccgatgtgRcgccaggtgaagtaggtgtagg
2,Xoo_0254Cel
FgagcctcacgacatagaaccgRaccgctggaatcggcatc
3,Xoo_r0116S
(1)FtggtagtccacgccctaaacgRaacccaacatctcacgacacga
(2)FtcttatgggtggcgagtgRcggtgcttattctttgggta
(3)FaagcgtgcgtaggtggtgRgtgcctcagtgtcagtgttggt
实验步骤:
1.设计引物,溶解成为10mM的浓度。
2.提取RNA,反转录成CNDA。
3.常规PCR以实验所得模板扩增看家基因40个循环,电泳看产物多少。
如果少,则不能进行REALTIMEPCR操作。
4.编写好程序,加样,上机。