A型血友病基因诊断及送检须知Word格式文档下载.doc
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重度血友病患者時常會發生肌肉或關節出血，他們可能每個禮拜自發性出血一至二次。
根據國外文獻統計，在重度的A型血友病患者中，約有45%的患者其致病原因為F8基因之第22插入子反轉突變（Intron22inversion），5%為第一插入子反轉突變（Intron1inversion），輕度者多屬基因單點突變或小片段缺失，目前最常使用的基因診斷方式是以臨床確診的患者搭配雙親及待測者，透過家族連鎖方式追蹤異常之基因半套體，只是此連鎖方式較為間接，且無法明確找出突變的基因點，對於無家族病史的患者或全為同型合子的家族，較難進行相關的遺傳診斷，需進一步直接檢測患者或帶因者是否有常見之Intron22inversion、Intron1inversion、小片段缺失（smalldeletion）、小片段插入（smallinsertion）或單點突變（pointmutation）。
二、A型血友病的遺傳模式：
模式一模式二
母親為帶因者
女性帶因者
男性患者
父親正常
男性正常
女性正常
父親為患者
母親正常
模式三
母親為正常
若父親正常，母親為帶因者，則每一所生的兒子會有1/2機率為患者，1/2機率為正常；
每一所生的女兒會有1/2機率為帶因者，1/2機率為正常（模式一）；
若父親為患者，母親正常，則每一所生的女兒都會是帶因者，所生的兒子都是正常（模式二）；
若雙親無家族病史，父親正常且母親不是帶因者，但因為母親的卵子在分裂時發生新的突變，造成兒子罹病（模式三），此種突變可能只出現於單一卵子，亦有可能出現於一些卵母細胞，所以還是有機會生下罹病或帶因的小孩。
三、檢體：
a.一般成人：
患者、帶因者或待測者
種類
檢體量
容器
注意事項
全血
3-5c.c.
含EDTA抗凝劑之採血管
避免凝固
b.產前診斷：
除胎兒檢體外，需同時有胎兒雙親及家族中的男性患者之檢體，以供家族基因連鎖分析。
臍帶血
2c.c.以上
EDTA管（紫頭）
避免凝固，避免母血污染
絨毛
10mg以上
乾淨之瓶子或管子，浸泡於生理食鹽水或培養液
需確認採樣檢體為胎兒絨毛組織
羊水
10c.c以上
針頭的地方用3M膠布貼緊以防運送過程中脫落
避免母血污染
備註：
1.母血或母體組織污染嚴重之胎兒檢體無法檢驗。
2.所有檢體皆應於24小時內以室溫保存運送。
四、基因診斷方法、收費及報告時程：
A型血友病的基因診斷主要是檢測第八凝血因子基因區域，有否發生常見的突變型，另外可配合家族基因連鎖分析法，追蹤異常半套體之遺傳模式。
目前基因診斷可分為以下三個階段，其內容及收費方式如後：
檢驗階段
檢驗對象
檢驗費（不含掛號及採檢技術費）
報告時程
第一階段：
常見突變型診斷
F8基因intron22inversion檢測、intron1inversion檢測
（1）臨床確定為嚴重型患者。
（2）患者家族其他成員。
4,000元/人
2週
第二階段：
連鎖分析或全基因定序
非第一階段之突變型，進行家族連鎖分析檢測帶因情形或F8基因exon區域（exon1~exon26）直接定序確定基因突變點。
（1）若進行家族連鎖分析，需同時檢測患者、患者雙親及受測者。
（2）直接定序可檢查患者或帶因者。
（3）家族內已有確定突變型之患者或帶因者，其他家族成員。
（1）患者直接定序:
25,000元
（2）基因連鎖分析:
（3）已知突變點，檢驗家族高危險成員帶因情形：
（4）胎兒產前診斷：
4,000元
4週
第三階段：
若胎兒為男性且以上述方式仍無法確診時，需於懷孕20周以後抽取胎兒臍帶血，檢測第八凝血因子活性。
（1）男性胎兒之產前診斷。
依後送醫院之收費標準。
1-2週
※本基因診斷採分階段收費方式,先檢查常見的突變型,若無法獲知明確結果,需進行第二、第三階段之檢查。
※凡符合衛生署補助標準者，每人可減免1,500元，受檢者須填寫「優生健康檢查個案紀錄聯（三聯單）」，胎兒需填寫「產前遺傳診斷個案紀錄表（四聯單）」。
五、基因診斷之侷限性：
1.研究顯示，嚴重型的A型血友病患者約有45%在第八凝血因子基因之Intron22區域產生反轉，可利用三組PCR引子進行檢測，由於LongDistancePCR產物長達11-12Kb，受限於DNA模板長度及PCR酵素反應效率，可能產生偽陰性之結果。
另外5%嚴重型患者，屬於Intron1區域產生反轉，利用兩組PCR酵素反應，也有可能產生偽陰性之結果。
2.根據文獻報告，A型血友病F8基因之三個基因點位（STR-13、STR-22及BclIRFLP），在95%的患者家族會出現至少一個異型合子之標記，可供作連鎖分析區別對偶基因（Alleles），但仍有5%之患者家族，三個F8基因標記皆為同型，無法由連鎖分析法確知帶因與否。
3.基因直接定序雖可偵測F8基因表現子區域有否發生單點突變、小片段缺失或小片段插入，但無法檢出大片段之基因缺失突變。
六、送檢方式：
委託人應簽署基因診斷同意書（附件一），並將檢體包裝妥當，以宅急便或掛號方式寄至：
（100）台北市林森南路10-1號1樓柯滄銘婦產科基因飛躍生命科學實驗室收
聯絡電話：
02-33931030傳真：
02-33931077
附件一
A型血友病基因診斷同意書
本人委請貴院施行血友病之基因診斷，並已充分了解以下事項：
1.嚴重型的A型血友病患者約有45%在第八凝血因子基因之Intron22區域產生反轉，可利用LongDistancePCR技術進行檢測，由於PCR產物長達11-12Kb，受限於DNA模板長度及PCR酵素反應效率，可能產生偽陰性之結果。
2.根據文獻報告，A型血友病F8基因之三個基因點位（STR-13、STR-22及BclIRFLP），在95%的患者家族會出現至少一個異型合子之標記，可供作連鎖分析區別對偶基因（alleles）。
3.有5%之患者家族，三個F8基因標記皆為同型，無法由連鎖分析法確知帶因與否，需進行患者之全基因定序，以直接確認突變位置。
4.基因直接定序雖可偵測F8基因表現子區域有否發生單點突變、小片段缺失或小片段插入，但無法檢出大片段之基因缺失突變。
5.基因檢驗有上述侷限性，報告之準確率為97%，結果僅供醫師臨床參考。
6.受檢者須簽署本同意書，若為產前診斷，至少需經由孕婦本人同意方可進行本項檢驗。
7.本人已經由臨床醫師之遺傳諮詢，充分解基因診斷之過程、必要性及侷限性，並同意進行本項檢查。
此致
柯滄銘婦產科診所基因飛躍生命科學實驗室
立同意書人__________________________（簽章）
出生日期：
民國______年______月______日
身分證字號
中華民國________年________月________日
台北市中正區林森南路10號1樓TEL.02-33933939FAX.02-33931077
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