改良抗酸染色sopWord文件下载.doc

改良抗酸染色sopWord文件下载.doc

《改良抗酸染色sopWord文件下载.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《改良抗酸染色sopWord文件下载.doc（2页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

尤其是细胞内抗酸杆菌的检出，有助于临床判定现症或潜伏感染。

3仪器

3.1器材

3.1.1FMU-6型细胞涂片离心仪

3.1.2FMU-6型细胞涂片沉淀器

3.1.3显微镜。

3.1.4载玻片

3.2试剂

3.2.10.3%TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液

碱性复红乙醇饱和溶液10ml

5%石碳酸溶液90ml

TritonX-1000.3ml

3.2.2脱色剂

浓盐酸20ml

95%乙醇80ml

3.2.3复染液（吕弗勒美篮液）

美篮乙醇饱和溶液30ml

10%氢氧化钾0.1ml

蒸馏水100ml

3.2.40.3%TritonX-100（曲拉通）溶液

TtritonX-1003ml

蒸馏水1000ml

3.2.5APES（3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷）工作溶液

现用现配，用丙酮1:

50稀释。

3.2.6固定液（pH6.6）

丙酮45ml

甲醛25ml

磷酸氢二钠20mg

磷酸二氢钾100mg

蒸馏水30ml

3.2.70.1M磷酸盐缓冲液（PH7.4）

Na2HPO4·

12H2O26.46g

NaH2PO4·

2H2O2.664g

NaCl40g

KCl1.8g

蒸馏水900ml

4操作步骤

4.1载玻片处理

将酸碱处理后的载玻片浸泡于APES工作溶液30秒，取出冲洗，晾干，备用。

4.2标本收集

4.2.1将载玻片和滤纸插入FMU-6型细胞涂片沉淀器中，滤纸上的孔必须与FMU-6型细胞涂片沉淀器上

的孔对准，并旋紧FMU-6型细胞涂片沉淀器。

4.2.2在FMU-6型细胞涂片沉淀器的沉淀管中加入0.5ml脑脊液（若脑脊液呈浑浊或血性，应先根据情况稀释后再加入）。

4.2.3将FMU-6细胞涂片沉淀器放入FMU-6细胞涂片离心仪的挂钩上，盖上离心仪的盖子，离心3~5分钟。

待脑脊液中的有形成分完全沉淀到玻片上后，取下涂片固定。

4.3固定

将涂片浸泡于固定液中30秒，水洗，晾干。

4.4染色步骤

4.2.1固定后的涂片浸泡于0.3%TritonX-100溶液30分钟，0.1M磷酸盐缓冲液洗3次，晾干。

4.2.2初染涂片加0.3%TritonX-100萋纳石碳酸复红溶液，染5分钟，水洗。

4.2.3脱色脱色剂脱色约1分钟，轻轻摇动玻片，无红色脱落为止，水洗，晾干。

4.2.4复染复染液复染0.5~1分钟,水洗。

自然干燥后镜检。

5结果判断

抗酸杆菌呈红色，非抗酸杆菌呈蓝色。

6质控

6.1质控菌株及质控频率利用铜绿假单胞菌ATCC27853、结核杆菌ATCCH37RV做阴阳性质控对照，每日及更换染液批号时质控。

6.2质控方法参照麦氏比浊仪或麦氏比浊管，将标准菌株配制菌液3MCF浓度单位，高压灭菌后储存

冰箱备用。

或将高压后的菌液制成均匀的图片，放置室温备用。

7注意事项

7.1凡需进行抗酸染色的标本，每份标本只允许单独涂在一张载玻片上，不得将两份或两份以上的标本涂在同一张载玻片上，以免染色过程中因冲洗菌体脱落，致阴阳性结果混淆。

7.2抗酸染色切勿使用染色缸，以免着色的抗酸菌可能自涂膜上脱落而浮游于染色液或脱液缸中，连续使用造成假阳性的出现。

染色后印干用的滤纸，不得重复使用。

7.3脱色时间需根据涂片薄厚而定，厚涂片可适当延长，以几乎无红色为度。

8临床意义

针对结核病、麻风病的细菌检查，初步诊断。

奴卡菌可呈弱抗酸性，有利于鉴定细菌。

9安全防护措施

9.1为了防止交叉感染，标本应先高压灭菌后再涂片染色，气管刷片标本，应在紫外线灯下照射30分钟进行染色镜检。

9.2镜检后的玻片均浸泡在含有有效氯1000mg/L的消毒液。

10参考文献

10.1周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海.上海科学技术出版社，2007

10.2叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第三版.南京.东南大学出版社，2006

10.3张秀珍，朱德妹主编.临床微生物检验问与答.北京.人民卫生出版社，2008年7月.

11支持文件

微生物室室内质量控制管理程序

12记录表格

抗酸染液质控记录表

2011年3月1日发布2011年4月1日实施