小分子蛋白电泳技术分享Word格式文档下载.doc

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Acrylamide46.5g

Bis3.0g

Watermakeupto100ml

3.GelBuffer（3MTris/cl,PH8.45,0.3%SDS）

SDS0.3g

Tris36.4g

PHto8.45withHCL

注:

3MTris配制时不容易溶解,因此配制时我配制了2MTris,配方如下:

Watermakeupto150ml

4.Anode（Lower）buffer阳极缓冲液（0.2MTris/cl,PH8.9）

Tris12.11g

Watermakeupto500ml

PHto8.9withHCL

5.Cathode（Upper）buffer阴极缓冲液（0.1MTris/cl,0.1MTricine,0.1%SDS,PH8.25）

Tris6.06g

Tricine8.96g

SDS0.5g

不用调PH值

6.4×

TricineSDSSamplebuffer4×

上样缓冲液

（Finalconcentration:

0.05MTris/cl,4%SDS,12%glycerol,200mMDTT,0.01%CommasieG250）

8×

Tris.cl/SDSPH6.82ml

Glycerol4.8ml

SDS1.6g

CommasieBlueG2504mg

Watermakeupto10ml

Tris.cl/SDSPH6.8配方

Tris6.05g

SDS0.4g

PHto6.8withHCL

二、胶的配制

1.16.5%T6%Cseparatinggel30ml

49.5%T6%C10ml

Gelbuffer15ml

Glycerol3.2ml

Water1.8ml

2.10%T3%Cspacergel30ml

49.5%T3%C6.1ml

Water8.9ml

3.4%T3%Cstackinggel12.5ml

49.5%T3%C1ml

Gelbuffer4.65ml

Water6.85ml

用Bio-Rad系统,0.75mm的胶,separatinggel配3ml,加2.5ml;

Spacergel配1ml,加0.7ml;

Stackinggel配1.25ml.灌胶前临时加10%AP（过硫酸铵）和TEMED.

胶配制的通用配方:

三、电泳参数及染色脱色

1.用Bio-Radmini电泳装置进行电泳.30V电泳1hr,100V至电泳结束

2.固定,染色及脱色:

小分子量肽类在SDS-PAGE胶中容易扩散,因此电泳结束后,有时需要固定20min（固定液:

0.5%戊二醛,30%乙醇）,再进行染色20-30min（染色液:

50%甲醇,10%乙醇,0.2%G-250）,在脱色液（45%甲醇,10%冰醋酸）脱色20-30min;

脱色完毕,把胶放在水中或10%甘油中.

四、电泳示例照片

小分子该选择用tricine-SDS-PAGE.

protocol上写着

thecommonroleofglycerolinSDSgelsistoincreasethedensityofsolutionsandto

facilitategelcasting;

ithasnoobiouseffectonproteinseparation

Itried25%Tricinegelfor3KDpeptide,looksgood.GoodLuck!

哦，我自己经常做2x多的分子，用的是15%的gel，效果很好的。

1xKD的用16%的PAGE就应该可以了。

你可以试一试Tricine-SDS-PAGE，16%的分离胶，6%的浓缩胶。

分离胶单体母液：

46.5g丙烯酰胺+3g双叉丙烯酰胺，双蒸水溶解定容到100ml

凝胶浓度49.5%，交联度6%

浓缩胶单体母液：

48g丙烯酰胺+1.5g双叉丙烯酰胺，双蒸水溶解定容到100ml

凝胶浓度49.5%，交联度3%

配方：

分离胶母液3.3ml+凝胶缓冲液3.3ml+30%甘油2.4ml+双蒸水1.0ml+10%AP45μl+TEMED4.5μl

浓缩胶母液0.3ml+凝胶缓冲液0.93ml+双蒸水1.27ml+10%AP25μl+TEMED2.5μl

分离范围1～100KD，最佳分离范围2～70KD

初始电压30，等样品进入分离胶电压升至80，最终电压可升至120

其实12kD的蛋白，15％的也就可以了，20％的也没问题

如果你的表达量不高，跑胶的时候由于电泳路径较长，容易造成弥散和分解，可以把胶跑得短一点，条带挤一点，跑一半分离胶的高度就足够了。