微生物检查中无菌操作注意事项.doc
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微生物检查中无菌操作注意事项
一、关于采用酒精棉球消毒的注意事项
1.用酒精棉球擦拭双手，包括手掌、手背，尤其是手指，更换一个酒精棉球擦拭酒精灯附近（约10cm）桌面。
2.点燃酒精灯，在酒精灯附近拆器皿包装，并对器皿做相应标记。
3.用酒精棉球再次擦拭双手，开始实验操作。
4.消毒用酒精棉球湿度以不挤压出酒精为宜。
二、关于酒精灯正确使用的注意事项
1.酒精量以大于1/3，小于2/3为正确量。
2.防风罩应小口朝上放置于酒精灯上，反过来放置会导致氧气没有充分燃烧。
3.使用酒精灯前要检查灯芯帽是否盖得太紧，以防酒精不能上升，影响酒精灯燃烧。
点燃酒精灯时严禁两个酒精灯对点。
4.熄灭酒精灯方法：
先用灯芯帽扣压并熄灭火焰，再揭帽重新扣压一次。
这样可防止蒸汽倒吸灯帽，再次使用酒精灯时难以揭开灯帽。
5.做样品稀释及从试管取样实验时，酒精灯应放在操作人员和试管架之间，便于无菌操作。
三、关于吸量管使用的注意事项
1.左手拿洗耳球，右手持吸量管，用右手食指平按住吸量管的顶部。
2.吸取样品后进行定量时，吸量管吸液口应贴附于试管内壁；放样时，吸量管吸液口也应贴附于试管约1/2内壁，不应贴附在管口处放液。
吸量管应尽可能垂直放液。
3.用吸量管往空平皿加入1ml溶液时，吸量管应贴附于平皿底部中央位置放液；用吸量管在平板上加入0.1ml溶液做涂布接种时，吸量管应垂直、悬空放液于平板中央。
4.因吸量管拆封包装后应马上使用，故无须对吸量管吸液口过火焰消毒。
5.整个取样放样的过程应尽可能保证试管口或锥瓶口靠近酒精灯火焰附近。
四、关于样品梯度稀释的注意事项
1.从试管架上取出所需试管于酒精灯火焰附近拔出试管塞，并在火焰外焰处对试管口过火焰进行消毒。
2.将试管放回试管架后用吸量管进行取样，然后取出该试管于火焰附近调节吸量管内溶液体积。
3.取样完成后对试管口再次消毒并塞上试管塞，将试管放回试管架原处。
4.从试管架上取出所需加样的试管于火焰附近进行加样放液操作。
五、关于培养皿记号的注意事项
1.标记统一写在平皿底部边缘，以“字数少、字体小、清晰、明确”为原则。
2.标记内容包括：
班级、学号、日期、培养基名称、稀释级。
六、关于平板制备的注意事项
1.打开培养皿的方法：
左手小指、无名指、中指及一部分掌腹托住平皿底部，食指和拇指张开轻握皿盖侧部，以食指为支点，摆动拇指打开皿盖。
打开的皿口应向着酒精灯的外焰。
切勿把开口朝向操作人员。
2.手持锥形瓶中下部将瓶中培养基倾倒入平皿中央位置，锥瓶口不应接触平皿。
培养基应一次注入够量，不应分次加入（除实验特殊规定）。
3.混匀培养基时应将装有混合培养基的平皿于手中顺时针轻微摇匀2-3次，平放于桌面上后再次顺时针摇匀2-3次，整个过程应在培养基尚未开始凝固时完成。
学生只要有其中一个摇匀动作也算完成混匀培养基。
4.手中装有培养基的平皿应水平放置于台面上，不应从台面边缘往里推。
在位置允许的情况下，应分开平摊放置待凝。
七、关于涂布方式的注意事项
1.L型涂布棒应放平涂布。
2.涂布时应从中间按同一个方向打圈方式往周边涂布，可以重复涂布。
3.从高稀释级往低稀释级涂布时，可以不用更换涂布棒，也不用灼烧涂布棒。
涂布同一个稀释级的不同平板时也不用灼烧涂布棒。
但是从低稀释级往高稀释级涂布时，如不更换涂布棒，一定要灼烧涂布棒（原则上不采用这个涂布顺序）。
八、关于培养基接种的注意事项
1.液体培养基接种时不强调接种环是否应接触到液体培养基。
2.单手持两支大试管切忌手部覆盖培养基面，空白管在里面（近操作人员），菌种在外面。
九、关于接种环灭菌的注意事项
取完固体菌时，应先垂直灼烧环部再往上灼烧其余接种丝；取完液体菌时，应先灼烧非环处的其它接种丝，再灼烧环部，这样可避免环上液体突然遇热而爆破溅出，造成污染。
以下是做参考用的，类似考评项目和分值：
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分值
考核项目
考核内容
配分
评分标准
得分
7
准备
物品摆放
2
物品摆放有序合理，便于操作
试管编号
1
试管编号位置、数据正确
培养皿编号
2
培养皿打开方法正确，标注位置、数据正确
培养基
2
加热熔化、温度控制合理
12
检样
酒精灯
1
酒精灯正确使用
消毒
2
手、样品取样前消毒操作正确
取样
3
取样前混匀样品，移液管使用正确，取样量正确（准确制得10-1稀释液）
无菌操作
4
在酒精灯无菌区操作，取样、放液各环节无菌操作正确
混合均匀
2
振荡正确
稀释操作开始时间记录
18
10倍稀释
稀释度精确
3
稀释前混匀样品，取样量正确（精确制得10-4、10-5、10-6稀释液）
移液管使用
5
移液管取液、放液、读数等操作规范，高浓度移液管管口不得伸入低浓度稀释液液面下
无菌操作
5
在酒精灯无菌区操作，取样、放液各环节无菌操作正确
混合均匀
2
更换移液管后混匀各试管，混匀方法正确
整体印象
3
本环节操作规范、熟练
15
接种
接种与稀释的顺序
4
正确做稀释，移液管不得混乱使用
加入样品
2
准确加入0.1ml稀释待检液，检液浓度与培养皿标记一致
无菌操作
3
在酒精灯无菌区操作，取样、放液各环节无菌操作正确
平行
2
每个稀释度接种2个平皿
空白对照
2
有做空白稀释液
整体印象
2
本环节操作规范、熟练
15
培养基
加入培养基
4
准确、快速倒入15~20ml熔化培养基，不得污染皿壁
无菌操作
3
在酒精灯无菌区域操作，培养皿持法正确
培养基温度
2
培养基温度不得过高，不得出现结块现象
混匀
4
混匀操作正确，不得污染皿壁、皿盖
整体印象
2
本环节操作规范、熟练
15
涂布
结束时间记录
8
综合评价
实验熟练程度
3
理解实验原理，各环节安排合理，操作熟练
时间
5
从稀释到完成涂布时间不能超过20min，每超1分钟扣1分
5
清场
卫生
3
清扫实验环境及收拾垃圾，归位有序
实验习惯
2
文明操作，实验习惯良好
5
其他
5
100
总分
分值
考核项目
考核内容
配分
评分标准
得分
3
准备
实验着装
3
着工作服顺序正确，仪容整洁
整理实验平台
各种实验器材、试剂摆放有序合理
平板标注
平板标注清晰合理
3
灭菌
以酒精棉球擦拭手
3
操作动作到位
擦拭实验台面
操作动作到位、擦拭范围合理
擦拭菌种试管管口
操作动作到位
15
培养基
加入培养基
4
准确、快速倒入15~20ml熔化培养基，不得污染皿壁
无菌操作
3
在酒精灯无菌区域操作，培养皿持法正确
培养基温度
2
培养基温度不得过高，不得出现结块现象
混匀
4
混匀操作正确，不得污染皿壁、皿盖
整体印象
2
本环节操作规范、熟练
14
划线
点燃酒精灯
1
操作动作到位，火焰适宜
灼烧接种环
1
靠近火焰，接种环灼烧红，注意接头部位的灼烧灭菌
取菌
3
试管握持姿势合理，拔棉塞、接种环冷却、试温、取菌、塞试管塞动作到位
划线操作
3
平板拿取、打开操作动作到位，划线方法、手法合理
固体培养基表面有无破损
1
无破损
划线完毕后平板倒置
1
操作动作到位
灼烧多余菌
1
接种环灼烧红
操作熟练既整理印象
3
14
接种
点燃酒精灯
1
操作动作到位，火焰适宜
灼烧接种环
1
靠近火焰，接种环灼烧红，注意接头部位的灼烧灭菌
取菌
3
试管握持姿势合理，拔棉塞、接种环冷却、试温、取菌、塞试管塞动作到位
划线操作
3
平板拿取、打开操作动作到位，划线方法、手法合理
固体培养基表面有无破损
1
无破损
灼烧多余菌
1
接种环灼烧红
操作熟练既整理印象
4
6
文明操作
有无器皿破损
2
无损坏
操作结束后整理现场
4
清理操作台面
5
综合评价
实验熟练程度
3
理解实验原理，各环节安排合理，操作熟练
时间
2
10分钟内完成，每超1分钟扣1分。
60
总分
4
升级会员 