生物技术制药考试重点洛理Word文档格式.docx

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1.基因工程制药2.细胞工程制药3.酶工程制药4.发酵工程制药

2、动物细胞的生理特点。

1.细胞的分裂周期长；

2.细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象；

3.正常二倍体细胞的生长寿命是有限的；

4.动物细胞对周围环境十分敏感；

5.动物细胞对培养基的要求高；

6,动物细胞对蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同

3、基因工程药物制造的主要程序有哪些？

1.目的基因的克隆；

2.构建DNA重组体；

3.构建工程菌；

4.目的基因的表达；

5.外源基因表达产物的分离纯化；

6.产品的检验等

4、什么是单克隆抗体？

单克隆抗体有哪些不足？

单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。

由于这种抗体是针对一个抗原决定簇的抗体,又是单一的B淋巴细胞克隆产生的.不足：

单克隆抗体均是鼠疫性抗体,应用于人体会产生人抗鼠抗体；

完整的抗体分子,分子量很大。

5、植物细胞的生理活性物质和后含物？

植物细胞的生理活性物质对细胞内生化反应和生理活动起调节作用的物质的总称1.酶类；

2.维生素；

3.植物激素；

4.抗生素和植物杀菌素；

后含物是储藏物质或废弃物质1.生物碱2.糖苷类3.挥发油4.有机酸5.盐类等

6、生物技术制药的特征

1.高技术；

2.高投入；

3.长周期；

4.高风险；

5.高收益

7、生产用动物细胞有哪5种？

1.原代细胞2.二倍体细胞系3.转化细胞系4.融合细胞系5.重组工程细胞系

8、抗体诊断试剂有哪些类型？

1.血清学鉴定用的抗体制剂2.免疫标记技术用的抗体制剂3.体内导向诊断药物4.CD单克隆抗体系列

9、抗体治疗药物有哪些？

1.放射性同位素标记治疗药物2.抗癌药物偶联的抗体药物3.毒素偶联的抗体药物

10、大肠杆菌作为表达载体必须具备的条件？

1.载体能够独立的复制2.应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记,以利于外源基因的克隆、鉴定和筛选3.应具有很强的启动子,能为大肠杆菌的RNA聚合酶所识别4.应具有阻遏子,使启动子受到控制,只有当诱导时才能进行转录5.应具有很强的终止子,以便使RNA聚合酶集中力量转录克隆的外源基因,而不转录其他无关的基因,同时很强的终止子所产生的mRNA较为稳定6.所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号,即起始密码AUG和SD序列,以便转录后能顺利翻译。

11、什么是离子交换剂的预处理,再生,转型?

新启用的离子交换剂要先进行预处理。

干粉状的离子交换剂要先进行膨化,在水中充分溶胀,使其内部的空隙增大,将活性基团充分暴露出来,再用水浮选去除杂质和细小颗粒,然后用酸（盐酸）、碱（氢氧化钠）分别浸泡处理,每种试剂处理后都要用水洗至中性,再用另一种试剂处理,最后用水洗至中性,进一步去除杂质并使离子交换剂带上需要的活性离子。

离子交换剂的再生是指对使用过的离子交换剂进行处理,使其恢复原有形状的过程.再生时,一般是先用大量的水冲洗,去除离子交换剂表面和空隙内部物理吸附的杂质,再用上述的酸、碱交替浸泡法处理,除去与活性基因结合的杂质,使之恢复原有的交换能力。

所谓转型使指离子交换剂由一种活性离子转为另一种活性离子的过程。

12、离体培养的动物细胞分为哪些类型？

1.贴壁细胞；

2.悬浮细胞；

3.兼性贴壁细胞

问答题

1、动物细胞培养基的种类和组成。

（1）天然培养基：

血浆凝块，血清，淋巴液，胚胎浸液，羊水，腹水

（2）合成培养基：

组成稳定，可大量生产供应。

成分为氨基酸，维生素，糖类，无机盐，其他除此之外，还需添加5%-10%的小牛血清才能使细胞很好的繁殖

（3）无血清培养基：

在天然或合成培养基的基础上添加激素，生长因子，结合蛋白，贴附和伸展因子及其他原素。

2、基因工程制药中影响高密度发酵的因素有哪些？

可采用哪些方法实现高密度发酵？

影响因素：

培养基，溶氧浓度，PH值，温度，代谢副产物；

实现方法：

发酵条件的改进a培养基的选择b建立流加式培养方式c提高供氧能力构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌a阻断乙酸产生的主要途径b对碳代谢流进行分流c限制进入糖酵解途径的碳代谢流d引入血红蛋白基因构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌。

3、植物细胞培养的培养基由哪些主要成分组成？

植物细胞培养的培养基常含无机盐，碳源，有机氮源，植物生长激素，维生素等成分。

无机盐;

有大量元素和微量元素30毫克每升为界限，大量元素有氮，硫，磷，钾，镁，钙氯，钠；

微量元素有铁，锰，碘，钼，铜，锌，碳源常见的为碳水化合物，肌醇，甘油，乳糖和半乳糖，天然提取物如椰子乳对愈伤组织的诱导和培养也有重要意义植物生长调节剂，植物激素是植物代谢过程中形成的生长调节物质，在极低浓度时即能调节植物的生育过程，并能从合成部位转运到作用部位而发挥作用。

常见的有生长素，分裂素，赤霉素，脱落酸，乙烯。

有机氮源，常见蛋白质水解物或各种氨基酸，有机氮源对细胞的早期生长有利，氨基酸的加入是为了代替或增加氮源的供应维生素，通常是维生素自养型，但大多数不能满足需要。

4、分离纯化常用的色谱分离方法有哪些？

它们的原理是什么？

离子交换层析：

原理是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。

疏水色谱：

原理与反相色谱的原理相似，主要是利用蛋白质分子表面上的疏水区域和介质中的疏水基因之间的相互作用，无机盐的存在能使相互作用增强。

亲和层析：

是通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。

凝胶过滤层析：

原理是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。

5、动物细胞大规模培养的方法有哪些？

概括各自的特点是什么？

悬浮培养：

悬浮培养即让细胞自由地悬浮于培养基内生长繁殖。

它适用于一切种类的非贴壁依赖性细胞,也适用于兼性贴壁细胞。

该方法有点是操作简便,培养条件比较均一,传质和传氧较好,容易扩大培养规模,在培养设备的设计和实际操作中科借鉴许多有关细菌发酵的经验。

不足之处是由于细胞体积较小,较难采用灌流培养,因此细胞密度一般较低。

贴壁培养:

贴壁培养是必须让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。

它适用于一切贴附依赖性细胞，也适用于兼性贴壁细胞。

该方法的优缺点与悬浮培养正好相反，优点是适用的细胞种类广，较容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度；

不足之处是操作比较麻烦，需要合适的贴附材料和足够的面积，培养条件不易均一，传质和传氧较差。

贴壁-悬浮培养：

微载体培养既可创造相当大的贴附面积供细胞贴附生长增殖，满足了绝大数细胞的基本要求，又由于载体的体积很小，比重较轻，在轻度搅拌下即可携带细胞自由地悬浮在培养基内，充分发挥了悬浮培养的一切优点。

6、阐述基因工程药物研制有那些主要过程。

基因工程药物的生产必须首先获得目的基因，然后用限制性内切酶和连接酶将所需目的基因插入适当的载体质粒或噬菌体中并转入大肠杆菌或其他宿主菌，以便大量复制目的基因。

对目的基因要进行限制性内切酶和核苷酸序列分析。

目的基因获得后，最重要的就是使目的基因表达。

基因的表达系统有原核生物系统和真核生物化的难易。

对目的基因与表达载体重组，转入合适表达系统，获得稳定高效表达的基因工程菌建立适于目的基因高效表达的发酵工艺，以便获得较高产量的目的基因表达产物建立起一系列相应的分离纯化、质量控制、产品保存等技术。

7、阐述鼠源性单克隆抗体改造后的小分子抗体类型。

人鼠嵌合抗体：

将鼠MAb的可变区和ƛ抗体的恒定区组成嵌合抗体由于这两部分在空间结构上相对独立，其独特的抗体亲和力保持的很好，但因鼠单抗可变区的存在，应用时仍有较强的排斥反应。

改性抗体：

在嵌合抗体的基础上进一步将鼠MAb可变区中相对保守的FR替换成人的FR，保留与抗原结合的CDR部位Fab抗体：

Fab段由重链V区及CHI功能区与整个轻链以二硫键形式连接而成，主要发挥抗体的抗原结合功能，Fab抗体只有完整IgG的1/3单链抗体：

单链抗体是由一段弹性链接肽把抗体可变区重链与轻链相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位单域抗体：

只含V区基因片段的小分子抗体，即只有VH或VL一个功能结构域，也能保持原克隆抗体的特异性。

这种小分子的抗体片段就称为单域或单区抗体，其分子量仅为整个Ig分子的1/12.分子式别单位：

只含有一个CDR多肽的抗体。

8、植物细胞的主要生理活性物质及后含物。

细胞中除含有生命物质原生质体外，还有许多非生命物质，细胞的代谢产物，一类是生理活性物质，对细胞内生化代谢和生理活动起着调节作用，另一类是后含物，储藏物质或废弃物质，分布于液泡内，如糖类。

盐类，生物碱，苷，有机酸，挥发油等。

1）生理活性物质对细胞内生化反应和生理活动其调节作用。

酶类，生物催化剂维生素，参与酶的形成，对生长，呼吸，物质代谢有调节作用植物激素，调节代谢抗生素和植物杀菌素，杀死和抑制某些微生物生长的物质。

2）细胞后含物生物碱，含氮有机化合物，中药含有多种生物碱，麻黄碱，咖啡，阿托品，奎宁，黄连素糖苷类，某些化合物和糖苷键结合而成，对疾病有很好的治疗作用挥发油，具有芳香气味，在常温下易于挥发的油类。

薄荷油，丁香油和桉油有机酸，糖类代谢的中间产物，苹果酸，柠檬酸，水杨酸，酒石酸。

9、蛋白质分离纯化常用的色谱分离方法有哪些？

离子交换剂的预处理,再生和保存。

主要有离子交换层析，疏水色谱，亲和层析，凝胶层析。

对离子交换剂的预处理，再生和转型的目的是一致的，都是为了使离子交换剂带上所需的活性离子。

市售的离子交换剂中，阳离子交换剂常为Na型，阴离子交换剂为Cl型，阳离子交换剂最后用碱处理，阴离子交换剂最后用酸处理。

常用的酸是HCl,碱是NaOH。

保存时，应首先处理洗去蛋白质等杂质，并加入适当的防腐剂，一般加入0.02%的叠氮钠，4摄氏度下保存。

10、品临床试验的安全性和有效性评价,请回答如何完成一到四期临床

一期临床试验：

一期临床是新药在人体试验的起始期，通过一期临床的研究要了解人体对新药的耐受程度及药代动力学，观察有无不良反应，并提出该药安全有效的结合方案。

二期临床试验：

是在对照组的条件下，详细观察新药的疗效，适应症和不良反应。

一般要求有100对病例的数据。

三期临床试验：

是二期临床试验的延续，进一步扩大病例（一般要求400例）和增加临床试验单位（不少于3个），对新药的疗效，适应症和不良反应进一步做出评价。

通过上述一系列试验，若经新药审批中心审评合格，即可获得新药证书。

此时若已有工厂和符合GMP的车间，并生产出三批合格产品，即可获得试生产文号，并进一步进行四期临床试验。

四期临床试验：

目的是对该药进行社会性考察与评价，重点要了解长期使用后出现的不良反应以及继续考察新药的疗效。

通过四期临床试验，以及进一步完善生产操作规程后，即可申报正是生产文号，至此一个新药的整个研究才算完成，才真正转化为生产力推入市场。

三、单项选择题

1为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：

（）

A．将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。

B．在宿主细胞快速生长的同时诱导基因表达。

C．同时加快宿主细胞生长和重组质粒的复制。

D．当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制

1-2为了减轻工程菌的代谢负荷，提高外源基因的表达水平，可以采取的措施有：

A．当宿主细胞快速生长时诱导重组质粒的复制

D．将宿主细胞生长和外源基因的表达分成两个阶段。

2基因工程的单元操作顺序是：

A．酶切，连接，转化，筛选，验证B．酶切，转化，连接，筛选，验证

C．连接，转化，筛选，验证，酶切D．验证，酶切，连接，筛选，转化

2-2基因工程的单元操作顺序是：

A．验证，酶切，连接，筛选，转化B．酶切，转化，连接，筛选，验证

C．连接，转化，筛选，验证，酶切D．酶切，连接，转化，筛选，验证

3美国食品药物管理局是指（）

A．GMPB．FDA

C．GCPD．GLP

4GCP是指：

A．药品非临床研究质量管理规范B．药品经营质量管理规范

C．药品临床研究质量管理规范D．药品生产质量管理规范

5.药品生产质量管理规范是指：

A．GLPB．GCP

C．GSPD．GMP

6美国FDA是指（）

A．食品药物管理局B．国际理论与应用化学联合会

C．药品经营质量管理规范D．药品非临床研究质量管理规范

7药品生产质量管理规范是指：

8GSP是指：

A．药品非临床研究质量管理规范B．药品临床研究质量管理规范

C．药品经营质量管理规范D．药品生产质量管理规范

9聚丙烯酰胺凝胶商品名为：

A．Bio-GelAB．Ultragel

C．Bio-GelPD．Sephadex

10．CM-Sephadex和SP-Sephadex分别是：

A．都是阴离子交换剂B．都是阳离子交换剂

C．阴离子交换剂、阳离子交换剂D．阳离子交换剂、阴离子交换剂

11琼脂糖凝胶商品名为：

12DEAE-Sephadex和QAE-Sephadex分别是：

13．促红细胞生长素（EPO）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的

基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（）

A．人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用

B．人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定

C．大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化

D．人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感

14．cDNA第一链合成所需的引物是（）

A．PolyAB．PolyC

C．PolyGD．PolyT

15cDNA法获得目的基因的优点是（）

A．成功率高B．不含内含子

C．操作简便D．表达产物可以分泌

16．下列不属于提高质粒稳定性的方法是（）

A．选择合适的宿主菌B．选择合适的载体

C．选择压力D．分阶段控制培养

E.悬浮培养

17.质粒的不稳定性分为（）。

A．分裂不稳定B.分裂不稳定和结构不稳定

C.结构不稳定D.分裂不稳定和重组不稳定

18SephadexG-600，该型号表示该胶的得水率是：

A．600ml/gB．60ml/g

C．6000ml/gD．0.6ml/g

19SephadexG-50，该型号表示该胶的得水率是：

A．500ml/gB．5ml/g

C．5000ml/gD．0.5ml/g

19-2SephadexG-80，该型号表示该胶的得水率是：

A．800ml/gB．0.8ml/g

C．8000ml/gD．8ml/g

20．下列方法中不能实现基因工程菌的高密度发酵的是：

A．提高供氧能力B．阻断乙酸产生的主要途径

C．引入血红蛋白基因D．构建蛋白水解酶活力高的工程化宿主菌

20-2下列方法中不能实现基因工程菌的高密度发酵的是：

C．去除血红蛋白基因D．构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌

21、19世纪上半叶，施来登和施旺（）

A．开发培养基和培养方法B．提出了细胞学说

C．研究植物细胞器官与营养需求之间的关系D．胚胎培养方面取得成果

21-219世纪上半叶，施来登和施旺（）

A．开发培养基和培养方法B．研究植物细胞器官与营养需求之间的关系

C．提出了细胞学说D．胚胎培养方面取得成果

22我国药典正确的名称写法是:

（）

A.中华人民共和国药典（1995年版）B.药典

C.中华人民共和国药典D.中国药典

23我国药典的英文名称是:

A.PharmcopoeiaB.pharmaceutical

C.ChinesePharmacopoeiaD.chinaPharmacopoeia

24我国最新版的药典是:

A.2001年版B.2010年版

C.98年版D.2005年版

25至今我国出版药典共:

A.9版B.5版

C.7版D.8版

26植物细胞与动物细胞和微生物细胞相比有三个特点：

A．细胞壁、液泡和质体B．细胞壁、后含物、细胞质

C．细胞壁、核仁、液泡D．细胞壁、生理活性物质、制体

27生物碱是一类含（）的有机化合物，广泛存在于自然界

A．磷B．碳C．氮D．无机盐

28动物细胞代谢的三个主要中间产物是：

A．乙酰辅酶A、α－酮戊二酸和草酰乙酸B．葡萄糖、谷氨酰胺和丙酮酸

C．乙酰辅酶A、谷氨酰胺和丙酮酸D．葡萄糖、α－酮戊二酸和草酰乙酸

29属于真核宿主菌的是：

A.大肠杆菌B.枯草芽孢杆菌

C.链霉菌D.酵母

30属于原核宿主菌是（）

A．酵母B．丝状真菌

C．病毒D．大肠杆菌

31下面哪个菌是应用最广泛、最成功的的表达体系，并常常做为高效表达研究的首选体系？

32若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（）

A．半乳糖B．葡萄糖和异丙基巯基-β-半乳糖苷（IPTG）C．蔗糖

D．5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷（X-gal）和异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）

33某一重组质粒（7.5kb）的载体部分有2个SmaI酶切位点。

用SmaI酶切后凝胶电泳上出现4条长度不同的条带，其长度总和与已知数据吻合，该重组质粒中插入的外源DNA片段上的SmaI酶切位点共有（）

Ａ．5个Ｂ．4个

Ｃ．3个Ｄ．2个

33-2某一重组质粒（7.5kb）的载体部分有1个SmaI酶切位点。

用SmaI酶切后凝胶电泳上出现5条长度不同的条带，其长度总和与已知数据吻合，该重组质粒中插入的外源DNA片段上的SmaI酶切位点共有（）

34．动物细胞冻存时采用的保护剂是（）

A．甘油和二甲基亚砜B.聚乙二醇和甘油

C.聚乙二醇和二甲基亚砜D.液氮和二甲基亚砜

35．抗生素、酶液、二甲基亚砜常采用哪种方法除菌（）

A.都采用蒸汽灭菌B.都采用过滤除菌

C.前两者过滤除菌，后一个用蒸汽灭菌D.前两者蒸汽灭菌，后一个用过滤除菌

35-2EDTA溶液、二甲基亚砜、抗生素常采用哪种方法除菌（）

C.前一个用蒸汽灭菌，后两者过滤除菌D.前两者蒸汽灭菌，后一个用过滤除菌

36.下面属于物理消毒的是（）

A．紫外线、干热、湿热、抗生素B.消毒剂和抗生素

C.消毒剂、干热、湿热、抗生素D.过滤、紫外线、干热、湿热

36-2下面属于化学消毒的是（）

A．紫外线、干热、湿热、抗生素B.过滤、紫外线、干热、湿热

C.消毒剂、干热、湿热、抗生素D.消毒剂和抗生素

37下列常用的生产用细胞中属人源细胞系的有：

A．COS细胞B．WI-38细胞

C．Sf-9细胞D．BHK-21细胞

37-2下列常用的生产用细胞中属人源细胞系的有：

A．C127细胞B．Sf-9细胞

C．MRC-5细胞D．BHK-21细胞

38.（）细胞最早被批准用于大规模生产a-干扰素

A．MDCK细胞B.COS细胞

C.WI-38细胞D.Namalwa细胞

39.1986年从淋巴瘤患者分离的一株传代细胞Namalwa细胞生产的（）被批准用于临床，从此，禁止使用传代细胞的限制实际上被取消了。

A．EPOB.白细胞介素

C.干扰素D.疫苗

40.单克隆抗体制备中，最常用的免疫动物品系是（）

A．BALB/c小白兔B.BALB/c小鼠

C.BALB/c猴子D.Lou大鼠

41.在单克隆抗体制备中，为了提高融合率，可以在PEG溶液中加入（），以提高细胞接触的紧密性，增加融合率。

A．甘油B.聚乙二醇

C.二甲基亚砜D.干冰

42.在Ig分子结构当中，氨基酸残基变异性较大，决定抗原、抗体发生特异性结合的关键部位，将其称为（）。

A．CDR区B.V区

C.C区D.VH区

42.2在Ig分子结构当中，（）决定了Ig的异种抗原性

43下列哪一个是人类第一个基因重组产品（）

A.人胰岛素B.红细胞生成素

C.组织纤溶酶原激活剂D.干扰素

44我国科学家经过8年刻苦攻关，成功研制出世界上第一个中国健康人白细胞中克隆的（）基因，组建杂交质粒，转染大肠杆菌使之高效表达。

A.α1b干扰素B.组织纤溶酶原激活剂

C.人胰岛素D.生长激素

45下列属于基因工程制药中细胞物理破碎法的是（）

A.渗透冲击B.增溶法

C.脂溶法D.超声破碎法

46.下列属于基因工程制药中细胞化学破碎的是（）

A.高压匀浆法B.超声破碎法

C.高速珠磨法D.渗透冲击

47.下面不属于离体培养的动物细胞的分类的是（）

A.贴壁细胞B.兼性悬浮细胞

C.悬浮细胞D.兼性贴壁细胞

48.下列关于动物细胞培养的说法错误的是（）

A.细胞计数可以用血球计数板计数B.贴壁细胞的传代需经消化液消化后再分种

C.细胞的冻存速度不能太快也不能太慢D.细胞复苏总的要求是快溶

E.细胞的分离只有消化分离法

49.下列关于动物细胞产品纯化方法不正确的有（）

A.盐析的优点是蛋白质不易变性B.