布鲁克核磁培训电子版文档文档格式.docx

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空扫：

真正开始采样前先采集的次数，做一维谱时可设为0，二维谱空扫的次数设置非常重要。

⑥TD0，真正采样次数，NS*TD0，如TD0设为10，NS为1024，则总采样次数为1024*10

⑦SW谱宽，用默认的谱宽即可，其中SW与AQ成反比

⑧O1P，O1，中心频率，其中前者是以ppm为单位，后者是以HZ为单位。

最右边：

谱宽/2+O1P

（2）和脉冲系列有关的参数

①DE值，采样结束后等待衰减的时间。

做杂核时需要更改。

②D1：

弛豫延迟，做定量H谱时需要更改

③P1激发脉宽；

PL1（dB）：

激发功率；

9、谱图处理

（1）Procpars：

窗口函数

①efp：

指数函数，em、ft、pk三个命令的组合

②gfp：

高窗函数：

gm、ft、pk三个命令的组合

③apk：

根据当前的样品来调PHC,PHC1，当谱峰有很多鼓包时使用效果不好。

LB值越大信噪比越好，分辨率越差，LB值越小，分辨率越好。

LB0是相对于efp函数而言的，当调节LB值为负，信噪比仍然不好时，可用gfp函数，先更改GB值，再输入GFP命令冲零也可以提高分辨率。

（2）定标

（3）直接输入plot命令，进入打印界面。

（4）如何创建模板

C:

\Bruker\Topspin\Plot\Layouts,先另取名字创建模板，再将模板文件夹下的默认模板删除，如H谱的默认模板是：

1D-Hxwp，先删除该模板，再将自己创建的模板改为默认模板的名字。

二、如何做H谱的定量

与标准一维氢谱相比，需要做一下变换

1、将脉冲系列zg30改为zg，

2、找内标，两个峰挨的很近且基线分离，一般很难找到合适的内标物。

3、调整O1P,使得O1P在两个峰之间

4、NS要足够大，为了保证较好的信噪比，定量最起码要做半个小时以上。

5、D1>

5T1,D1要大于5倍的T1，首先要找最大的T1，D1的时间要足够长。

三、碳谱：

碳谱的标准实验为C13CPD

1、getprosol

2、atma

3、采样参数的设置：

谱宽sw一般设置为250,O1P，NS，TD0,

4、rga

5、zg

6、tr命令：

保存数据，继续采样；

如tr4，保存最近4次的2倍。

7、efp：

apk

8、ppf：

对碳谱的全谱进行标峰。

9、Mi+数字+PPF：

表示强度低于该数值的不标峰。

10、go命令，样品浓度太低的情况下，过夜采集仍然不能得到理想的谱图，第二天白天需做其他谱图，可在第二天晚上将前一天晚上采集的谱图拖动到当前窗口，重新放入样品锁场调节后可以输入GO命令进行累加采集。

11、和脉冲相关的参数

CPDPRG2，通常情况下用Waltz16，做氢谱、碳谱的90度脉冲没有问题，做杂核时需要更改。

看到碳谱有裂分，首先要考虑是否有同分异构体，再考虑更改CPDPRG2，选择带bi的参数。

四、碳谱定量实验（实验时间相对很长，需要加弛豫试剂以减短实验时间。

）

1、标准实验选择CBIG，new→ok

2、将zgig30改为zgig

3、DS:

0加弛豫试剂后会影响锁场和匀场。

五、DEPT实验（45°

、90°

、135°

1、New→C13DEPT90→OK

2、getprosol

3、修改参数：

（1）改动参数NS，采样次数是普通碳谱采样次数的1/4.

（2）Pulseprog查看与脉冲相关的参数，其中NS是4的倍数。

（3）DS=8，NS=4，SW:

谱宽，O1P.

4、rga：

zg

（1）DEPT45，只出现季碳；

DEPT135：

只出现CH

（2）HALT空格数字

（3）SR值，从校正后的普通碳谱的处理参数中copySR值，复制到DEPT谱图中，可将DEPT谱图中的化学位移与普通C谱的化学位移对齐。

六、如何将多种谱图打印在同一张图上

方法一：

1、先将全谱图调出并标好化学位移。

2、选择1D+1D+1Dxwp打印模板

3、在data中，点击ADD，选择实验数据现在的位置，将需要的数据拖入，点击Apply，确定。

此方法的优点是可以对每一张谱图进行修改。

、

方法二：

1、随意拖入一张谱图，输入plot

2、全选中，并删除原有谱图

3、在DATA里面选谱图，APPLY→OK;

4、在右侧选择多个谱图叠加的图标，三条重叠的折线；

5、在空白处拖动鼠标，出现第一张谱图

6、右击选择Edit，选择steaked，输入谱图张数。

Spectra：

0*5,0表示左右偏移量，5表示上下偏移量。

此方法的缺点是不能单独修改每一张谱图。

七、一些补充注意事项

1、BBf，探头。

2、新安装仪器可以做的核有H、C、P、F、N,可以直接选择标准实验，直接调用标准模板。

P31CPD,全去偶，zgpg30；

P31：

zg。

LOCK之后可以直接输入一系列命令，点击ENTER直接完成。

3、做杂核前要先确认两件事情：

（1）有无脉宽和功率

（2）有无标准实验；

4、P的化学位移的标定：

外标法。

把标准品（查找网上文献）放到P样品中测定核磁，将标准品的化学位移定位为0后看SR值，再将SR值复制粘贴到后续做的P谱图上，再标定化学位移。

标准品：

85%磷酸溶液。

不锁场、不匀场，直接调谐、prosol。

不锁场实验：

（1）打开BSMS键盘，将lock变成灰色。

（2）sweep要变成灰色（即将

（1）

（2）的ON-OFF都OFF掉）（3）atma；

rga；

zg；

八、对于没有标准实验、没有脉宽和功率的杂核如何入手做以B11为例。

1、首先查询该杂核的旋磁比、天然丰度，对于天然丰度太低的要求浓度高些，或者很难做出来。

Help→NMRGuid→eNMREncyclopedia→NMRApplication→NMRpenddicTable→点击要做的元素查看旋磁比和天然丰度。

2、先借用C谱的标准实验，新建一个实验，当旋磁比为正时标准实验选择C13CPD，当旋磁比为负时标准实验选择C13IG。

点ok。

3、更改参数

查看Acqpar参数（都是C13的参数）→getprosol（读取C的脉宽和功率）→输入edsp命令→把F1维中的C13改为B11,F2维不变→Default→Save→再次回到Acqupars参数中→NS（扫描次数）、SW（谱宽，尽量设宽些400），O1P（先赋予0）+-200位置找峰，D1（经验值）2S，对0也适合，（事先查D1值，太大可加弛豫试剂）→lock，topshim→输入atmm（不能用atma，手动调谐，第一次做核时必须用手动调谐。

）→出现Tuning对话框，若点》《找不到会动的倒峰，则点击▽图标，放大范围，都调好后点①File②Saveposition③Exit→输入atma；

zg，弹出rga对话框，点OK，输入密码Bruker，接着弹出zg警告→halt8，efp；

apk→输入sref弹出警告，close（将O1P放在最佳位置）→edmac（宏命令）+空格+名称（随意命名）。

校准背景信号，第一段（第一行，absf1+空格+最大值；

第二行，absf2+空格+次大值；

第三行，absf）；

第二段（第一行，absf1+空格+最大值；

下一段的开始是上一段的结束，进入鼓包区域后区间要变小，节点值不能正好落在峰的最高点，从最左端分多段编辑到最右端。

编辑好后保存。

→输入BL命令

4、如何创建标准实验模板

输入wpar→在user下，不能存在par上面→点击writenew→输入实验名称，OK→OK→close→new→不能getprosol（90%重水10%水叠代钠标样，可以用来建立O的标准实验，也可以用来建立Na的标准实验，需要做Pt的标准实验室，可打电话让工程师过来设置，另外做其他杂核的定量需用到C13IG脉冲系列，需要请工程师调90度脉冲的脉宽和功率，请工程师来做核。

九、部分二维实验

温馨提示：

二维谱实验最重要的就是控温。

（一）、实验一

1、New建立一个新实验，标准实验选择COSYGPMFSW：

用梯度场进行相关路径的选择。

其中GP表示梯度；

MF表示多量子粒波，SW表示方波，标准波形。

多量子粒波的好处：

可以从对角峰上看到单峰的性质，简化对角峰，易于解析。

2、lock

3、atma；

topshim；

getprosol，调谐的目的是为了接收线圈的频率与中心频率保持一致，提高灵敏度。

DS空扫16次。

Pulseprog：

查看脉冲系列。

TD,F2维2000左右；

F1维，大于256（设高一点可以提高分辨率）。

采采样模式：

QF；

与采样相关的参数：

TD、NS、DS、SW、O1P。

其中NS、DS的设置可以参考限定值。

输入命令ased，可以查看与脉冲系列相关的参数，基本不需要自行修改。

4、rga；

5、谱图处理

（1）输入命令xfb进行变换，其中xf表示加窗函数，b表示两个维度。

（2）调进一维谱

①选中一维谱，右击，选择displayAs2Dprojection。

②选F1+F2

（3）点等高线调整图标（一个没有底边的三角弧形，中间几条平行线穿过）进行等高线调整。

Levelincrement：

即可；

Numberoflevels（等高线数）：

32；

Fill→Apply→OK。

或者可以输入命令clev+32可得到等高线数目。

（4）校准（即定标）放大谱图进行定标。

（5）去除噪音，选中噪音，输入命令proj，选择UPdatarows/colsfromdisplay→ok→再选择最上面的calculatepositiveprojection→输入sub2（对正峰和负峰都去除噪音）

（二）、实验二

1、New，标准实验选择：

MLEVPHSW,PH表示相位；

MLEV表示自旋锁定或自旋传递；

SW表示方波，形状脉冲SP；

①查看与脉冲系列相关的参数，其中NS=8*n，DS=16*n；

②TD（F2=2048，F1≥256）③SW,O1P;

④D9：

自旋锁定时间，默认值为，即混合时间（设短的话可能会无法调整相位）

getprosol；

4、谱图处理

（1）输入命令xfb变换谱图

（2）调等高线

（3）调相位，先调0级相位，再调1级相位。

（4）校准

（三）实验三

1、New→NOESYPHSW→适用于大分子

2、①NS：

8*N；

DS:

16*N;

②D8混合时间，空间＜5à

，峰的强度与距离的六次方成正比。

对于大分子，D8=～；

对于小分子：

D8=～。

分子量越大，弛豫时间越短，分子量越小，弛豫时间越长，温度越高弛豫时间越短。

3、lock

4、getprosol

5、atma；

（四）实验四

1、new，标准实验选择ROESYPHSW,PH：

通过相位循环可以减掉一些峰。

2、具体实验步骤与前面的实验步骤大致相同，通过查看与脉冲系列相关的参数对参数进行设置。

接着LOCK,getprosol；

atma；

3、Notice：

输入Set命令，选中Enableautomaticcommandspooling方框内□打钩。

可以针对一个样品的自动排列做多个实验。

（五）实验五：

J-Resolved同核实验。

1、new→cosy45sw（先借用）

2、Pulprog：

jresqf（消除化学位移，保留耦合常数）

3、NS:

4*N；

DS：

16；

4、F2维（化学位移）；

F1维（耦合常数）

SW=20，SWH=50HZ，O1P只针对F2设定值，F1不用设。

5、getprosol

6、lock

7、atma；

（六）实验六H-C相关的二维谱

1、New，选择标准实验：

HSQCETGPSISP,ET表示采样模式为回波反回波采样；

GP梯度；

SI灵敏度增强；

SP形状脉冲，让激发更均匀。

2、输入命令eda，进行采样参数设置：

NS=1*N,DS≥16,TD,SW谱宽（F2为H谱谱宽，F1为C谱谱宽）；

输入命令ased可进行与脉冲系列有关的参数设置，①CNST2：

单位为HZ,C和H直接耦合常数的平均值。

②GPZ2，C:

%，N15，%，若有些杂核没有显示，则改核后可以输入命令gradratio查看

4、getprosol；

5、rga；

（七）实验七

1、New→HMBCGPND，ND表示在采样时间内不进行去耦。

2、

（1）采样参数设置NS=2，DS=16,O1P=,SW=

（2）与脉冲系列相关的参数设置，CNST13，远程耦合常数，系统默认一般为8HZ,可以适当地减小，当看不到交叉峰时，可能该值设大了，也可能是因为二面角的原因。

，通过耦合常数可以计算二面角的大小。

4、atma；

HMBC谱图中可能存在HSQC的残余峰。

（八）实验八，在HMBC二维谱中去除HSQC的残余峰。

1、new→HMBCGPND,Ttitle：

J-FilterHMBC

2、更改脉冲系列及参数

将Pulprog→HMBCGPL2ndqf

（1）输入命令eda，更改采样参数，NS=2*N,DS=16，QF，TD（分F1，F2），O1P

（2）输入命令ased，更改与脉冲系列相关的参数，CNST6:

120HZ;

CNST7180HZ,在该区间内HSQC残余峰去除。

CNST13，百分比根据右侧提示填写。

3、getprosol

4、lock

十、完整的二维谱图处理过程

1、输入xfb，谱图变换；

2、调入一维谱，选择F1+F2，→ok

3、clev32，修改等高线。

4、校正相位（NOESY、ROESY、TOCSY、HSQC需要校正相位，其他的不需要）点相位校正图标，选几个点，ADD，先校正红线所在的位置。

5、定标：

先定好一维谱，读出化学位移，再点击定标图标，找出中心位置进行定标。

6、去除噪音，（T1噪音的去处），左边没有信号的投影。

Proj→edit→update→ok→第一个正峰第二个负峰，输入sub2。

7、可以通过选择性预测提高F1的分辨率，edp→procpars→founer→ME_mod→选择LPfr（LP表示线性预测，fr表示向前的）→NCOEF（HH相关选100，HC相关选32）。

此处理的缺点是可能产生鬼峰。

十一、核磁的维护

（一）硬件维护

1、机柜里面的滤网一般一年清洗一次

2、建议每周重启电脑一次

3、打开机柜需要带放静电手环

4、每次严格开关机，关机开机后要做一次CF。

5、90度脉冲校准正常情况下半年做一次，对新仪器可能需要三个月做一次。

6、field的校准，正常情况下半年一次，对于新仪器三个月做一次。

（二）磁体及软件维护

1、1H90度脉冲的校准,标样：

%EBinCDCL3

（1）new，建立实验，选择PROTON标准实验，title：

1H90cal

（2）lock

（3）getprosol；

（4）更改参数

①输入命令eda更改采样参数，将zg30→zg；

NS=1，DS=0;

O1P=（即设定在乙基的四重峰中央）。

②输入命令ased更改与脉冲系列相关的参数，D1=20S,RG=16;

P1=记录下来（脉冲作用时间）改为2；

PLW1机PL1保持不变。

先把原来的P1值，再将P1赋予一个比较小的时间，eg，1us先试做一个谱看看。

（5）rga；

（6）efp；

apk，处理谱图，并找到四重峰，使当前窗口只出现四重峰。

（7）输入命令dpl，定义打印区间。

（8）回到处理参数procpars，将PH_mod中的模式改为PK

（9）输入命令POPT，脉冲的功率为脉宽的优化模式。

勾选第三个选项即performautomaticbaseline（PARAMETER写上P1，OPTMUM中选zero，STARTVAL开始值：

比原有值的三倍大一些即大于3*；

ENDVAL结束值：

比原来的四倍大一些，即大于4*+4；

INC步长一般定为2，36、38等等），填好以上各参数后，点击Staroptimlze→Save→ok→开始做实验→若出现负值的峰，说明已经越过180度得电，点击skipcurrentoptim…停止实验。

结果存在TITLE里面，不用记录。

在Acquars中的P1（us）得到值/4,得到的值其实是零点的值，即360度得值，除4即可得到90度的值。

（10）更改prosol表，输入命令edprosol，将左右通道的pulse值改过来→Save→selectallrelevant→ok→输入密码→ok→yes→ok→yes→ok，关闭窗口。

2、C13的90度脉冲，标样：

ASTM。

（参考讲义P48）

（1）new→PROCNO（处理号一定为1）→C13CPD（标准实验名称）

（2）getprosol→lock溶剂名称→atma；

（3）修改参数，①输入命令eda修改采样参数：

将zgpg30改为zgpg；

NS=1;

DS=0，O1P=67，O2P=②输入命令ased修改与脉冲系列相关的参数：

RG=32或64；

D1（S）=20；

P1先记录下原始数值如，先赋予小点的值如2us

（4）输入zg命令直接采样

（5）efp；

apk让窗口只出C的信号，输入dpl，以下步骤与H的90度脉冲一致，可参考H的90度脉冲。

测完后要到prosol表中进行更新。

3、如何计算当前样品的90度脉冲值

（1）new→设定好参数之后做pulsecal

（2）输入命令pulsecal，enter后可以计算当前样品的90度脉宽，测完后点击close。

第一次做pulsecal命令时会弹出对话框“该命令正在编译”直接close掉就可以了。

4、3D匀场，标样：

90%水+10%重水。

（1）new，建立一个一维H谱实验

（2）lockH20+D2O

（3）atma；

topshimgui（可以去除Y方向的匀场梯度）

（4）选3D→After：

ZX-Y-XZ-YZ-Z（不做Before）→Star→结束后点close。

（5）选一个常做的样品，做一个一维H谱，lock→getprosol；

（6）输入wsh→在filename中输入文件夹名称→write→close

怎样判断匀场好不好①看DMSO、甲醇、丙酮的多重峰②看TMS的卫星峰③看溶剂本身的峰信号，越窄越好。

5、lockfield的校准

锁场锁氘信号，标样用10%的EBinCDCl3

（1）进样

（2）lockCDCl3

（3）进入BSMS键盘→lock\level→field→读取field值并记录下来（）→点ON-OFF脱锁→输入命令lopo，enter进行锁场参数的优化→选溶剂，点ok→输入（锁场后的值）。

红线和绿线的交叉点在锁场的最中间，蝴蝶线完全对称，通过更改phase值可以使其变得对称，从交叉点出来的第一个峰都是向上的。

（4）点击stanby，命令行中输入edlock，点折线图标进行保存。

什么溶剂都锁不上的情况下使用该方法

（1）放H20+D2O的标样进去

（2）将sweep的ON-OFF关掉

（3）修改采样参数，建立一个H谱zg30，NS=1，DS=0，O1P=，SW=30～40ppm

（4）atma；

（6）找到水峰，看水峰与偏离了多少HZ，在procpars中将PH_mod改为pk；

（7）输入命令gs，点实时变化谱图，打开BSMS键盘，进入lock\level里面，调节filed值，使水峰到达的位置，到达后点Standby，输入命令edlock，点折线图标，保存。

（8）将GS界面stop掉

（9）用CDCl3样品做校准。

十二、一维选择性激发实验

1、实验一：

针对分的比较开的峰

（1）新建一个实验，做一个一维谱。

（2）点击积分符号，在自己想要的信号上，对其进行积分。

（3）“Saveasveg”右击保存图标，保存。

（4）输入buttonnmr，选择select…

（5）点击setGrROESY→OK→输入实验名称后点OK→①OK：

不能再更改参数，直接采样；

②cancel只是建立实验，还可以修改参数。

本例中选cancel。

（6）修改NS=8%N，DS=4*N

（7）rga；

（8）ef→相位校正，一般会出现三种信号：

相关信号、吸收型信号、色散信号。

2、实验二：

针对重叠比较严重的多重峰。

CSSF:

chemicalshift化学位移，selectivefilter。

（1）进样，采集一个一维谱

（2）找到重叠峰，拷贝其中的一个化学位移：

所关心的峰的中间位置。

（3）新建一个实验，修改O1P为前一步骤的化学位移值。

（4）更改脉冲系列（pulprog），选择sel→ok

（5）查看参数，修改NS=2*N,DS=16，TD0=8~16，部分参数根据右侧提示修改。

CNST2=4（此值取决于峰的重叠程度）

（6）rga；

3、实验三

（1）在实验二的基础上，输入命令i，I命令表示做同样的实验。

（2）更改脉冲系列，将→（2表示第二个版本，为了选择峰；

带zs表示能量子激发；

di自旋锁定，cosy峰为了找相关谱）

（3）更改参数D9（混合时间）、NS、DS、TD0等参数。

（4）rga；

cosy、tocsy、noesy、roesy对角峰、交叉峰都有；

hsqc、hmbc没有对角峰，只有交叉峰。

十三、溶剂峰的压制

1、只压制一个峰

（1）做一个一维谱，找到要压制的峰，复制化学位移。

（2）new→标准实验名称为：

WATERSUP,对应的脉冲系列为NOESYGPPR1d→ok

（3）设置实验参数，D1：

低功率、长时间的功率，关键设置参数D1和PL9。

对于NS、D