单核苷酸多态性与肝细胞癌遗传易感性研究进展Word格式.docx

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SNP来源于数千年前发生的突变，随着人类世代繁衍稳固地遗传至今，和微卫星等重复序列多态标记相较，SNP具有更高的遗传稳固性。

（4）易测定性：

通常SNP都是二等位多态性，又称双等位基因标记［2］（biallelicmarker），检测时能通过简单的“+/-”进行基因分型，而无需进行基因片段长度的分析，因此SNP的检测分析能够实现自动化。

具有以上优势，SNP被以为是第3代分子遗传标记。

2SNP用于肿瘤遗传易感性研究的理论基础

SNP研究的理论基础是等位基因关联，它是指疾病性状的标记等位基因发生率的显著性改变（增加或降低），它代表与疾病性状（表现型）相关的等位基因在随机发生中的误差。

当一遗传标记的频率在患者中明显超过非患者时，即说明该标记与疾病相关。

1997年Collins等提出了“常见病，常见变异”（commondisease,commonbariant,CD-CV）的假说，以为常见病的易患性是由于人群中某些位点，专门是在基因编码区或调控区的常见变异引发的。

因此在某一恶性肿瘤人群和正常对照人群中进行SNP对照研究，能够确信SNP位点和（或）其临近变异与肿瘤发病风险的关系，因此可应用于肿瘤遗传易感性的研究。

2001年，SNP协会（TheSNPConsortium）构建了含×

106个SNP、密度达1个SNP/kb的人类遗传因谱［3］，这对开展致病基因定位的研究超级重要。

据估量，大约有105个SNP分子标记将被用于基因功能及与疾病的相关性的关联研究［4］。

3目前SNP与肝细胞癌遗传易感性研究情形

药物代谢酶中的GSTM一、GSTT一、NAT二、CYP2E1等基因多态与肝癌易感性有关。

葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosyltransferase,UGT）是参与外源性化合物体内生物转化Ⅱ相反映最重要的解毒酶。

肝癌的重要环境因素AFB1在体内经度日化后的代谢产物，大部份是以葡萄糖醛酸结合的酚盐形式排出体外。

其编码基因UGT1F已被克隆。

刘茶珍等［5］对84例肝癌患者的癌周肝组织和144例健康对照的外周血进行的UGT1F基因的多态性进行了研究。

结果在第1外显子和第2内含子发觉3个新的单核苷酸多态。

即第232位核苷酸T-G颠换，第528位核苷酸A-G转换和第376位核苷酸A-G转换。

另外，754位点多态在的研究中取得了证明。

分析病例组和对照组4个位点等位基因及基因型频率的散布，病例组UGTIF754位点G/G基因型频率（和G等位基因频率（均显著高于对照组（和。

其他位点，两组不同无显著性。

以为UGTIF基因的第2～5外显子高度保守，而第1外显子那么呈高度多态。

其754位点多态可能与肝癌有关。

对84例肝癌患者和144例健康对照CYP3A4基因的多态性进行了研究。

结果通过对CYP3A4基因10个外显子的检测，发觉2例肝癌患者的第7外显子第15742位核苷酸发生了A-G转换，使得第183位氨基酸残基由天冬酰胺转变成丝氨酸；

发觉第10内含子存在一单核苷酸多态，表现第20338位核苷酸发生了G-A转换。

故以为CYP3A4基因可能高度保守，虽有突变，但属罕有。

孙长江等［6］应用PCR-RFLP方式研究正常人、乙型肝炎、肝硬化和原发性肝癌组患者的胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）启动子区域DNA多态性改变与原发性肝癌的相关性。

利用BstEⅡ酶消化正常成人组、乙型肝炎、肝硬化和原发性肝癌肝组织DNA。

IGF-1IP3启动子的基因突变在正常成人组（%）、乙型肝炎组（%）、肝硬化组（%）组间不同无显著性（P＞。

原发性肝癌组（%）阳性率显著高于正常成人组、乙型肝炎组、肝硬化组，不同有显著性（P＜。

本研究显示IGF-Ⅱ启动子区域BstEⅡ消化位点异样与原发性肝癌有高度的相关性。

N-乙酰基转移酶2（N-acetyltransferase2,NAT2）是代谢内外源性化合物的重要酶系，在肝组织中表达较多，参与香烟中芳香胺类和杂环胺类等致癌物的代谢，其活性的改变可能会造成机体对致癌物解毒能力降低，对环境致癌更灵敏。

高建平等［7］应用自动实时荧光Light-Cycler技术，分析78例肝癌患者和112例健康志愿者NAT2的4个位点的基因多态性，比较肝癌患者与对照组间频率不同。

发觉肝癌抽烟组NAT2慢乙酰化基因型频率（%）与对照抽烟组（%）比较不同有显著性（P＜，并使患肝癌的危险度提高了倍；

肝癌非抽烟组NAT2慢乙酰化基因型频率（%）与对照非抽烟组（%）比较，不同无显著性（P＞。

故以为携带NAT2慢乙酰化基因型的抽烟者可能是肝癌的高危人群。

人类黑色素瘤相关抗原（melanoma-associatedantigen,MAGE）家庭至少包括6组，即MAGE-A～MAGE-F。

MAGE-A、MAGE-B、MAGE-C在许多恶性肿瘤中均有不同程度表达，除睾丸之外的正常组织中均无表达，故被称为癌或睾丸（cancer/testis,CT）抗原，属于共享的肿瘤特异性抗原。

MAGE-A中第一个被分离取得的抗原被命名为MAGE-1。

其普遍表达于不同的肿瘤中，在原发性肝细胞癌中的表达阳性率为30%～78%。

现已发觉MAGE-1编码蛋白中包括多个组织相容性复合物限制性多肽表位。

在国际上，包括MAGE-1在内的多种CT抗原衍生肽已用于一些肿瘤的免疫医治研究。

研究说明，中国HCC患者表达的MAGE-1基因存在基因变异，现进一步分析MAGE-1的基因变异状况并说明基因变异是肝癌细胞特异性的基因突变，仍是MAGE-1基因存在可遗传的单核苷酸多态性。

汪莉萍等［8］提取19例原发性肝癌患者的癌组织、癌旁组织总RNA，用逆转录-多聚合酶链反映（RT-PCR）方式检测组织MAGE-1基因mRNA的表达，并通过PCR产物测序分析编码基因是不是存在变异；

提取肝癌患者癌组织、癌旁组织和外周血细胞基因组DNA，和23例正常献血人员外周血细胞基因组DNA，分析MAGE-1编码基因的变异状况，并利用软件对变异抗原蛋白的生物学意义进行了初步探讨。

发觉癌组织中MAGE-1表达阳性率为%（9/19），癌旁组织无表达。

序列测定显示，MAGE-1CDNA编码基因存在3种类型：

一类是Ⅰ型（GenBankM77481），发生率为%（1/9）；

另一类型（C159T、A272G、G393A）发生率为%（5/9），称之为TGA型，致使编码的2个氨基酸的改变别离是T32A和R72Q；

第3种类型（A272G、C991T、A1125G）发生率为%（3/9），仅A272G引发一个氨基酸的替换（T32A），称之为GTG型。

经对基因组DNA分析，证明以上3种基因类型不是肝癌组织的基因突变，而是SNP，其在肝癌患者和正常献血员中散布的比例别离为：

Ⅰ型占%（5/19）和%（14/23）；

TGA型占%（11/19）和%（11/23）；

GTG型占%（4/19）和%（5/23）。

在男性研究对象中，SNP型别在是不是患有HCC及是不是表达MAGE-1抗原的患者中的散布不同均无显著性。

红细胞作为血液循环中数量最多的血细胞，其表面普遍表达的补体受体Ⅰ型分子（CR1）在调控补体系统和清除抗原物质进程中有重要作用。

对肝癌患者红细胞CR1分子基因多态性、数量表达和免疫黏附活性的研究发觉，肝癌患者红细胞CR1分子数量与黏附活性显著低于正常人组，且在晚期或伴肝功能异样的肝癌患者，其红细胞CR1分子数量及黏附活性显著低于初期或肝功能正常的肝癌患者。

王海边等［9］采纳聚合酶链反映（PCR）和HindⅢ酶切技术测定红细胞CR1分子基因型，采纳酶联法定量测定红细胞CR1分子的数量，以红细胞免疫黏附实验测定红细胞CR1分子黏附活性。

104例肝癌患者红细胞CR1分子密度相关基因多态性散布（HH：

%，HL：

%，LL：

%）与75例正常人（HH：

%）比较不同无显著性；

肝癌患者红细胞CR1分子的数量（±

及黏附活性（±

均显著低于正常人组，不同有超级显著性（±

，±

，P＜；

而且CR1分子基因多态性为：

高表达的肝癌患者其红细胞CR1分子数量表达与黏附活性都明显下降；

伴有肝功能明显异样的肝癌患者其红细胞CR1分子数量及黏附活性显著低于初期或肝功能正常的肝癌患者。

王海边等以为肝癌患者红细胞CR1分子数量及黏附活性的转变主若是后天因素引发，肝癌患者红细胞CR1分子数量及黏附活性的转变与病情进展及严峻程度紧密相关。

国外动物研究证明，酒精的中间代谢产物乙醛是一种确信的致癌剂。

谷胱甘肽-S-转移酶（GST）是多功能酶，能催化谷胱甘肽与多种亲电子化合物（包括致癌物）反映，在多数情形下是一种解毒进程。

因此，由于基因多态使GST缺乏或活性低下，可能会致使宿主对包括乙醛在内的一些毒物和致癌物作用的灵敏性增高。

李苏平等［10］在肝癌多发区江苏省泰兴市进行了以人群为基础的病例对照研究，并应用多重PCR法检测了207例原发性肝癌及其1∶1配对的正常对照的GSTM1和GSTT1基因型。

结果GSTM1空白基因型的频率，病例组为%，对照组为%；

GSTT1空白基因型的频率，病例组和对照组别离为%和%，两组间不同无显著性。

但GSTT1的空白基因型与非空白基因型相较，当其长期饮用高度白酒达23年以上或月饮酒量大于3kg时，患肝癌的危险性显著增高（OR=，95%CI为～或OR=，95%CI为～；

另外分析饮酒总量（kg&

#12539;

年）也取得一样的结果（OR=，95%为～。

因此以为携带GSTT1空白基因型且有长期大量饮酒适应者，其患肝癌的危险性显著增高。

饮酒是肝癌、胃癌和食管癌多发的重要危险因素之一。

现已得知，酒精在体内的代谢进程要紧为乙醇转化为乙醛，乙醛转化为乙酸，乙醛已被证明有明显的致癌作用，而存在于肝细胞中的乙醛脱氢酶2（ALDH2）是乙醛脱氢酶（ALDH）的一种，它的功能是将乙醛氧化为无致癌作用的乙酸。

丁建华等［11］将88例肝癌以性别、年龄和居住地与对照按1∶1配对；

104例胃癌和98例食管癌选择同一组（235例）非肿瘤居民为对照，用PCR-RFLP方式检测研究对象的ALDH2基因型。

发觉肝癌、胃癌、食管癌病例与对照组中ALDH2变异基因型携带者别离占%和%、%和%、%和%，不同无显著性。

在携带ALDH2变异基因型的饮酒人中，每一个月饮酒总量＞3kg者发生肝癌的危险性是≤3kg者的倍，并存在显著的剂量效应关系。

在携带ALDH2谷氨酸纯合型的男性中，饮酒者发生癌的危险性是不饮酒者的倍。

因此以为携带ALDH2变异基因型者大量饮酒将显著增加患肝癌的危险性。

HCC的发生是一个多基因、多步骤，由遗传和环境因素等综合阻碍的进程。

乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染和黄曲霉毒素暴露是HCC发生的两大要紧的危险因素。

DNA修复系统是机体内要紧的防御屏障，是参与机体遗传易感性的重要组成部份。

许丽等［12］应用病例-对照研究方式，选择了江苏启东地域72例HCC患者和137例正常对照，以年龄（±

3岁）和性别为配对因素进行了配对，对XPD-751位点基因多态性做PCR-RFLP分析。

结果XPD-751位点的Gln/Lys或Gin/Gin基因型的发生频率在病例组中明显高于对照组，不同有显著性（OR=，95%CI=～，在调整了HBV感染因素后，不同的显著性尽管消失，但可信限下限位于临界处（OR=，95%CI=～。

对HBV感染患者并同时伴有XPD-751位点为Gln/Lys或Gin/Gin基因型的个体，其HCC发生的危险性是HBV阴性及XPD-751位点为Lys/Lys野生型基因型个体的倍，不同有显著性（OR=，95%CI=～。

因此以为XPD-751位点基因多态性可能阻碍HCC的发生，同时指出XPD-751位点基因多态性和HBV感染之间可能存在基因-环境交互作用。

提示XPD基因多态性是组成个体发生肿瘤遗传易感性的重要因素，这对了解HCC的发病机制及高危人群的筛检等方面都有必然踊跃的意义。

除HBV感染之外，黄曲霉毒素暴露也是启东地域肝癌多发的危险因素之一，黄曲霉毒素暴露珠平与XPD基因是不是一样存在基因一环境交互作用，还有待进一步的深切研究。

邵华等［13］选择80例肝硬化、肝癌标本，别离以PCR-SSGP法、双链DNA序列测定法研究其P53基因外显子的突变情形及突位点。

发觉62例肝癌标本P53总突变率为%，其中，早、中、晚期突变率别离为%、%、%；

18例肝硬化标本P53总突变率为56%；

第7外显子的突变发生在249位密码子第3号碱基上，为G：

C-T：

A的颠换突变；

第8外显子的突变发生在273位密码子第1号碱基上，为C：

G-T：

A的转换病变。

以为P53基因病变发生在肝细胞发生形态学改变之初，随着肝癌的进展慢慢积存，突变率呈上升趋势，故P53基因突变极可能是启动癌变进程的重要因素之一。

细胞色素P4502E1（CYP2E1）是一种Ⅰ相代谢酶，它是代谢某些外源性和内源性化合物的重要酶系，而细胞色素P4502E1（CYP2E1）是CYP450代谢酶家族中的重要一员，它是参与亚硝胺和低相对分子质量卤代烃类化合物在体内代谢的要紧酶类。

研究说明，CYP2E1基因具有多态性。

目前研究发觉此基因具有3种多态性位点，即RsaⅠ、PstⅠ和DraⅠ。

其中RsaⅠ限制性内切酶识别的多态位点被证明能够显著阻碍CYP2E1转录水平。

姜爱仁等［14］在肝癌多发区泰兴市进行病例对照研究，调查研究对象的饮酒适应，以PCR-RFLP方式分析CYP2E1基因型。

发觉肝癌病例组与对照组中CYP2E1变异基因型（C1/C2+C2/C2）的散布频率别离为和，二者不同无显著性；

从饮酒适应等方面分析，携带CYP2E1变异基因型的饮酒者与携带野生基因型的不饮酒者患肝癌危险性不同无显著性。

因此以为E1基因多态性与泰兴市肝癌的发生无关。

张秀峰等［15］应用PCR-RFLP技术检测96侧肝癌患者和173例对照的NAT1基因型，并分析NAT1与环境危险因素的交互作用。

发觉病例组与对照组相较不同无显著性：

病例组NATI快型和慢性的频率别离为%和%，与对照组相较不同无显著性。

以为NAT1基因多态性与肝癌不存在关联。

4目前SNP与肝细胞癌遗传易感性研究中存在的问题

综合有关SNP与肝细胞癌遗传易感性的文章发觉，研究结果一致性差。

假阳性结果较多，其缘故可能是论文发表成见，希望阳性结果，再确实是统计学分析混乱，也可能是基因型检测错误。

在SNP与肿瘤风险研究中未充分重视基因与环境彼此作用的重要性。

SNP位点选择单一。

而且由于技术限制，目前尚不能进行基因组水平上的SNP与肿瘤风险关系的综合分析。

5小结与展望

目前普遍熟悉到遗传多态性研究最有可能揭露肿瘤易感性的本质。

随着SNP打算的成功实施，高通量检测SNP的新技术正在不断进展，《HumanMutation》、《GenomeResearch》和《NucleicAcidsResearch》等高水平国际杂志有很多关于SNP高通量技术的报导。

高通量的肿瘤遗传易感性研究将取得重大进展，但是关于逐个基因逐个SNP的功能性研究一样十分重要，如此才能与高通量取得的群体研究结果相结合，找出任何肿瘤的遗传易感SNP谱系。

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