生物选修一知识点.docx
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生物选修一知识点
生物选修一[生物技术实践]知识点
△传统发酵技术的应用
○果酒和果醋的制作
1．发酵：
指利用微生物在有氧或无氧条件下的生命活动来制备微生物菌体及各种不同代谢产物的过程。
根据产物分为氨基酸发酵、酒精发酵和醋酸发酵。
根据条件分为需氧发酵和厌氧发酵。
历史悠久、遍布民间的利用不同微生物的发酵作用制作食品的方法、工艺，一般称作传统发酵技术。
2．有氧发酵：
醋酸发酵、谷氨酸发酵无氧发酵：
酒精发酵、乳酸发酵
3．酵母菌是兼性厌氧菌型微生物真菌，酵母菌的生殖方式：
出芽生殖
4．在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。
5．在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。
6．20℃左右最适宜酵母菌繁殖，酒精发酵时一般将温度控制在18℃～25℃。
7．在葡萄酒自然发酵的过程中，起主要作用的是附着在葡萄皮表面的野生型酵母菌。
在发酵过程中，随着酒精浓度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。
在缺氧呈酸性的发酵液中，酵母菌可以生长繁殖，而绝大多数其他微生物都因无法适应这一环境而受到制约。
8．果醋制作过程中，起作用的菌种是醋酸菌，该菌种是单细胞一种好氧细菌（原核生物），代谢类型是异养需氧型，生殖方式为二分裂。
只有当氧气充足时，才能时进行旺盛的生理活动。
当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。
9．醋酸菌对氧气的含量相当特别敏感，在进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
变酸的酒的表面观察到的菌膜就是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的。
10．控制发酵条件的作用：
◆醋酸菌对氧气的含量特别敏感，当进行深层发酵时，即使只是短时间中断通入氧气，也会引起醋酸菌死亡。
◆醋酸菌最适生长温度为30～35℃，控制好发酵温度，使发酵时间缩短，又减少杂菌污染的机会。
◆有两条途径生成醋酸：
直接氧化和以酒精为底物的氧化。
11．实验流程：
挑选葡萄→冲洗→榨汁→酒精发酵→果酒（→醋酸发酵→果醋）
12．酒精检验：
果汁发酵后是否有酒精产生，可以用重铬酸钾来检验。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
先在试管中加入发酵液2ml，再滴入摩尔浓度为3mol/L的H2SO43滴，振荡混匀，最后滴加常温下饱和的重铬酸
钾溶液3滴，振荡试管，观察颜色。
13．如右图充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用的；排气口是在酒精发酵时用来排出二氧化碳的；出料口是用来取样的。
排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身相连接，其目的是防止空气中微生物的污染。
开口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。
使用该装置制酒时应该关闭充气口；制醋时，应该充气口连接气泵，输入氧气。
14．利用右图制作果酒、果醋时，在发酵过程中，每隔12h将瓶盖拧松一次（注意，不能打开
瓶盖）目的是放出二氧化碳。
当发酵产生酒精后，对装置的处理是打开瓶盖，盖上一层纱布，进行制葡萄醋的发酵。
◆果酒和果醋的发酵装置中的充气口是在葡萄汁装入发酵瓶初期，连接充气泵进行充气，用于酵母菌大量繁殖的；
◆排气口是在酒精发酵时用来排出CO2，平衡容器内外压力的；出料口是用来取样检测菌体数量或酒精浓度或排放废料的。
◆将葡萄汁装入发酵瓶时，要留有大约1/3的空间。
目的是先让酵母菌进行有氧呼吸快速繁殖，消耗尽氧气后再进行酒精发酵；其次，防止发酵过程中产生的CO2造成发酵液的溢出。
酵母菌的繁殖需大量能量，而发酵过程进行无氧呼吸，故果酒制作的前期应通入氧气，而后期应保证严格的厌氧环境。
◆排气口要通过一个长而弯曲的胶管（曲颈管）与瓶身连接，其目的是防止空气中微生物的污染。
使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，要适时充入无菌空气（氧气）。
果醋制作过程中要求始终通氧，缺氧时醋酸菌的生长、增殖都会受到影响，另外，醋酸的生成也会受到影响。
15．防止发酵液被污染：
◆榨汁机要清洗干净，并晾干；
◆发酵装置要清洗干净，并用体积分数70%的酒精消毒，或用洗洁精洗涤；
◆装入榨好的葡萄汁后，封闭充气口。
16．控制好发酵条件：
◆将葡萄汁装入发酵瓶，留大约1/3的空间；
◆制葡萄酒的过程中，将温度严格控制在18～25℃，时间控制在10～20d，可通过出料的情况进行及时的监测；
◆在制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30～35℃，时间控制在7～8d，并注意适时通过充气口充气。
17．◆发酵过程中，随着酒精度的提高，红葡萄皮的色素也进入发酵液，使葡萄酒呈现深红色。
葡萄果皮中含有单宁和花青素，对酿造红葡萄酒很重要，大多数葡萄色素只存在于果皮中，色素在酒精中的溶解度大于水中，发酵时酒精增加的同时，使溶解于其中的色素也增加。
◆选择新鲜的葡萄，榨汁前应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，被杂菌污染的机会。
◆防止发酵液被污染，需要从发酵制作的过程进行全面的考虑。
例如：
榨汁机、发酵装置要清洗干净、晾干，并用体积分数为70%的酒精消毒，或用洗洁精洗涤；每次排气时只需拧松瓶盖、不要完全揭开瓶盖等。
18．发酵产物的鉴定：
◆可用重铬酸钾检验是否有酒精生成。
在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈现灰绿色。
◆果醋制作过程中，首先通过观察菌膜的形成、嗅味和品尝进行初步鉴定，再通过检测和比较醋酸发酵前后的pH
做进一步的鉴定。
19．果酒和果醋制作的比较
20．酵母菌和醋酸菌的比较
○制作泡菜并检验亚硝酸盐含量
1．泡菜的制作离不开乳酸菌。
乳酸菌在自然界中分布广泛，空气、土壤、植物体表、人或动物的肠道内都有；种类也很多，常见的有乳酸链球菌和乳酸杆菌；代谢类型为异养厌氧型，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。
2．亚硝酸盐为白色粉末，外观与食盐相似，有咸味，易溶于水，可作食品添加剂。
膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，但是，当人体摄入的亚硝酸盐总量达到0.3～0.5g时，会引起中毒；当摄入总量达到3g时，会引起死亡。
膳食中的绝大部分亚硝酸盐随尿排出，只有在特定的条件下（pH=3，温度适宜和一定微生物的作用）才会转变成致癌物——亚硝胺，对动物还具有致畸和致突变作用。
我国卫生标准规定：
亚硝酸盐的残留量在肉制品中不得超过
30mg/kg，酱腌菜中不超过20mg/kg，婴儿奶粉中不得超过2mg/kg。
3．泡菜坛本身质地好坏对泡菜质量有直接影响，应选用火候好、无裂纹、无砂眼、坛沿深、盖子吻合号的泡菜坛（不合格容易引起蔬菜腐烂）。
检查时，可将坛口向上压入水中，选择坛体无渗水现象的为佳。
也可使用玻璃制作的泡菜坛。
◆泡菜腌制过程中，要注意控制腌制时间、温度和食盐用量。
温度过高、食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。
一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。
（在腌制后的第五天，
泡菜坛中亚硝酸盐的含量达到最高峰；第9天后泡菜中的亚硝酸盐含量开始有明显下降。
）
◆由于泡菜在开始腌制时，坛内环境有利于某些细菌的繁殖（包括一些硝酸盐还原菌），这些细菌可以促进硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐的含量会上升。
但随着腌制时间的延长，乳酸菌也大量繁殖，对硝酸盐还原菌产生一定的抑制作用，使其生长繁殖受到影响，造成泡菜中亚硝酸盐的含量又有所下降。
4．在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合生成玫瑰红色溶液。
将经过显色反应后的泡菜待测样品与已知浓度的标准显色液目测比较（称作比色法），即可估算出泡菜样品中的亚硝酸盐含量。
随亚硝酸钠量的增加，显色反应越充分，颜色越深。
◆测定亚硝酸盐含量的操作步骤为：
配制溶液→制备标准显色液→制备泡菜样品处理液→比色
5．◆泡菜制作时，要按清水与盐的质量比为4：
1的比例配制盐水，将盐水煮沸冷却。
◆在坛盖边沿的水槽中注满水，用水封闭坛口，起着使坛内与坛外空气隔绝的作用，保证坛内乳酸菌所需的无氧环境。
空气中21%是氧气，这是最简易的造成无氧环境的方法。
这样，坛内可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌进行乳酸发酵。
如不封闭，则会有许多需氧菌生长，蔬菜会腐烂。
在发酵过程中，要注意经常补充水槽中的水。
◆每次取样要用洗净的筷子、小匙，专人专用，专人清洗取样后迅速封坛，防止泡菜被污染。
泡菜坛内有时会长一层白膜，是由于产膜酵母的繁殖。
酵母菌是兼性厌氧微生物，泡菜发酵液营养丰富，其表面氧气含量也很丰富，适合酵母菌的繁殖。
6．◆含有抗生素的牛奶不能发酵为酸奶。
这是因为牛奶发酵为酸奶，主要依靠乳酸杆菌的发酵作用，而抗生素能够杀死或抑制乳酸杆菌的生长。
◆有些蔬菜，如小白菜和萝卜等含有丰富的硝酸盐。
当这些蔬菜放置过久时发生变质（发黄、腐烂）或者在腌制过程中，蔬菜中的硝酸盐会被微生物还原成亚硝酸盐，危害人体健康。
因此，日常生活中要多吃新鲜蔬菜，不吃存放时间过长、变质的蔬菜；对于腌制的蔬菜，也不宜多吃。
7．果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精发酵，果醋的制作利用的是醋酸菌将酒精转变为醋酸的代谢，腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶类，泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸发酵。
◆传统发酵技术都巧妙地利用了天然菌种，都为特定的菌种提供了良好的生存条件，最终的发酵产物不是单一的组分，而是成分复杂的混合物。
△微生物的培养与应用
○微生物的实验室培养
1．培养基：
人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，培养基是进行微生物培养的物质基础。
◆微生物和动植物营养要素的比较
2．培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
◆选择培养基与鉴别培养基的比较
3．培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源，此外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质、氧气的要求。
4．培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如：
培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则
需要提供无氧的条件。
5．无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：
◆对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
◆将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。
◆为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。
◆实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。
◆无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还能有效避免操作者自身被微生物感染。
7．消毒与灭菌的区别
◆消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。
消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（对于一些不耐高温的液体）还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。
◆灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
◆灭菌方法：
○接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；
○玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；
○培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；
○表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
◆消毒和灭菌比较
8．制作牛肉膏蛋白胨固体培养基
◆方法步骤：
计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。
○称量：
牛肉膏比较黏稠，可以用玻棒挑取，放在称量纸上称量。
牛肉膏和蛋白胨都容易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖。
○倒平板时要待培养基冷却至50℃左右时，在酒精灯火焰附近进行，等平板冷凝将平板倒置。
9．倒平板操作的讨论
◆培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？
提示：
可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
◆为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？
答：
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
◆平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
答：
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面
的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
◆在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？
为什么？
答：
空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。
10．纯化大肠杆菌
◆微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
◆平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。
将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。
在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。
◆稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。
◆用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：
使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。
◆平板划线法操作步骤：
○将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；
○在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞；
○将试管口通过火焰；
○将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液；
○将试管通过火焰，并塞上棉塞；
○左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。
注意不要划破培养皿；
○灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。
重复以上操作，在三、四、五区域内划线。
注意不要将最后一区的划线与第一区相连；
○将平板倒置放入培养箱中培养。
◆稀释涂布平板操作的步骤：
○将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；
○取少量菌液，滴加到培养基表面；
○将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s；
○用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
◆两种纯化细菌的方法的比较
11．平板划线操作的讨论
◆为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？
在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？
答：
操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了
杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。
划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
◆在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：
以免接种环温度太高，杀死菌种。
◆在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：
划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线
次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
12．稀释涂布平板操作的讨论
◆涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。
结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
提示：
应从操作的各个细节保证“无菌”。
例如：
酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、
吸管要在酒精灯火焰周围；等等。
13．微生物的培养
将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37℃恒温箱中倒置培养，培养12h和24h，分别观察并记录结果。
（将培养皿倒置的原因：
如果正放培养皿，则皿盖上形成的水滴会落入培养基表面并且扩散开。
如果培养皿中已形成菌落，则菌落中的细菌会随水扩散，菌落间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的）。
14．接种成功的标准如果培养基上生长的菌落的颜色、性状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明在接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，重新实验。
15．纯化大肠杆菌实验的结果分析与评价
◆未接种的培养基表面若有菌落生长，说明培养基被污染；若无，则说明未被污染。
◆在接种大肠杆菌的培养基上可观察到独立的菌落。
这些菌落在颜色、性状和大小上相似。
◆培养12h和24h后，菌落大小不同。
如培养24h，菌落大，灰色加深，光泽度强。
由于培养时间不同、生长时间不同，因此菌落大小不同。
◆若在培养基中观察到不同形态的菌落，原因可能是菌液不纯，混入其他杂菌，或在实验操作过程中被杂菌污染。
16．菌种的保存
◆对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。
○临时保藏方法
将菌种接种到试管的固体斜面培养基上，在合适的温度下培养。
当菌落长成后，将试管放入4℃的冰箱中保藏。
以后每3～6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。
○缺点：
这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。
◆对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。
在3ml的甘油瓶中，装入1ml甘油后灭菌。
将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20℃的冷冻箱中保存。
○土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
1．尿素是一种重要的农业氮肥，尿素并不能直接被农作物吸收。
只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。
土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为他们能合成脲酶，尿素最初是从人的尿液中发现的。
2．筛选菌株
◆实验室中微生物的筛选应用的原理
人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。
◆选择性培养基在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。
◆配制选择培养基的依据根据选择培养的菌种的生理代谢特点加入某种物质以达到选择的目的。
例如：
培养基中不加入有机物可以选择培养自养微生物；培养基中不加入氮元素，可以选择培养能固氮的微生物；
加入高浓度的食盐可选择培养金黄色葡萄球菌等。
3．统计菌落数目
◆测定微生物数量的常用方法有稀释涂布平板法（活菌计数法）和显微镜直接计数。
◆稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。
通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。
为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值。
统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。
因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。
◆采用此方法的注意事项：
○选择菌落数在30～300的平板上计数。
○需培养计算出三个或三个以上的平板菌落求平均数。
○统计的菌落往往比活菌的实际数目低。
◆每克样品中的菌落数＝CM其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释
V
液的体积（ml），M代表稀释倍数。
◆设置对照设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
◆实验设计实验设计包括实验方案，所需仪器、材料、用具和药品，具体的实施步骤以及时间安排等的综合考虑和安排。
○土壤取样：
同其他生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。
在富含有机质的土壤表层，有更多的微生物生长。
从富含有机物、潮湿、pH≈7的土壤中取样。
铲去表层土，在距地表约3～8cm的土壤层取样。
○样品的稀释：
样品的稀释程度将直接影响平板上生长的菌落数目。
在实际操作中，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养，以保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板。
○微生物的培养与观察不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间：
细菌——30～37℃，1～2d
放线菌——25～28℃，5～7d
霉菌——25～28℃，3～4d
◆每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足而导致一楼菌落的数目。
一般来说，在一定的培养条件下（相同的培养基、唯独及培养时间），同种微生物表现出稳定的菌落特征。
形状、大小、隆起程度、颜色。
4．在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，通过检测培养基pH的变化来鉴定分离的细菌，如果PH升高，指示剂将变红，可以初步鉴定该种细菌能够分解尿素。
测定饮水中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红-美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现典型特征：
深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽，圆形。
5．实验操作过程中还要注意无菌操作：
◆取土样用的小铁铲、盛土样的信封在使用前都需要灭菌；
◆应在火焰旁称取土壤。
在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞；
◆在稀释土壤溶液的过程中，每步都要在火焰旁操作。
△植物的组织培养技术
○菊花的组织培养
1．菊花组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
2．常用的培养基是MS培养基：
主要成分包括：
大量元素：
N、P、K、Ca、Mg、S；微量元素：
B、Mn、Cu、Zn、Fe、
Mo、I、Co；有机物：
如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素以及蔗糖等，常常还要添加植物激素。
3．生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键激素。
◆按照不同的顺序使用，会得到不同的实验结果
○先使用生长素，后使用细胞分裂素：
有利于细胞分裂，但细胞不分化；
○先使用细胞分裂素，后使用生长素：
细胞既分裂也分化。
○同时使用：
分化频率提高。
◆两者用量的比例影响细胞的发育方向
4．影响花药培养的因素：
材料的选择和培养基的组成，此外，亲本植株的生长条件、材料的低温预处理以及接种密度等都有影响。
5．植物组织培养的基本过程
◆细胞分化：
在生物个体发育过程中，细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。
◆离体的植物组织或细胞，在培养了一段时间以后，会通过细胞分裂，形成愈伤组织，愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化的呈无定形状态的薄壁细胞。
由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。
脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。
再分化形成的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。
6．植物细胞工程
◆具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。
但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。
◆植物组织培养技术的应用有：
实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。
7．细胞分化是一种持久性的变化，它能使
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