动物繁殖学实验心得Word文档下载推荐.docx

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　　处于发情期的奶牛一般情况下都有一定的发情表现，常常爬跨其它奶牛，或接受其它奶牛的爬跨，处于发情期的奶牛其臀部常常会有被爬跨过的痕迹;

同时也会伴随着奶牛大声哞叫，敏感燥动，寻找其他发情母牛，采食量减少，产奶量下降，活动量增加，主动嗅闻其他母牛外阴并用嘴与之摩擦，尾根高抬。

处于发情中期的奶牛会从阴部分泌出长条状黏稠而透明的黏液，呈玻璃棒状。

发情期的奶牛的身体变化：

外阴黏膜和阴蒂随发情期的时间推移变得潮湿，渐渐充血肿胀，颜色由浅红变为深红，至发情后期，其肿胀程度又渐渐消退，颜色由深红变为浅红。

发情大约后二天可见阴道出血。

这个征候可帮助确定漏配的发情牛，为跟踪下次发情日期或调整情期提供依据。

　　厂长在做了进一步的各种知识的初步讲解后与老师配合将一根粗大的有机玻璃管插入母牛的阴道内露出其内部环境，并用电筒照明讲解。

众同学围观观察后发现牛阴道到子宫颈口之间的距离比较长，阴道壁光滑，子宫颈口呈辐射状皱褶。

　　接下来便直切主题：

亲身体验牛的直肠检查方法，动手实干。

　　厂长告知直肠检查时为了检查人员的安全，有些注意事项：

　　1、手臂如有伤口，不应操作，有条件时应提供长臂手套后，再进行直肠检查;

　　2、保定架的后两柱之间不可架设横木或拴系绳索，以免牛滑倒卧下时，导致检查人员手臂骨折或关节脱臼;

　　3、检查过程中，时刻提防牛蹴踢;

　　4、每次直肠检查操作完毕后，要用消毒剂洗涤消毒手臂，并涂以皮肤滋润保护剂，以免皮肤糙裂。

　　检查前，还要求将剪短指甲，防止划伤奶牛直肠，将手臂清洗消毒后涂上起润滑作用的液体石蜡。

然后站在牛的正后方，给牛的肛门周围涂上滑润剂并亲亲抚摸牛的肛门，使牛安静。

将拇指放于掌心，四指并拢集，稍旋转前伸从奶牛肛门插入直肠。

进入直肠之后，刚开始没有能第一时间找到子宫颈，并且手臂还有被奶牛放出的气体推出来的感觉，但是在厂长的帮忙下，手臂伸进去则是感受到一种吸力，挤压着我的手臂，在厂长的细心讲解和亲手带领下，手感觉经过一个岔口，并且向下延伸就轻易地感受到了子宫颈，摸起来类似一个很粗的胶皮管道，富有弹性。

在场长手把手地细心引导下，我还顺利的摸到了卵巢等器官。

手臂进入直肠后要更加仔细，严防粗暴。

检查时动作要轻、快、准确，检查顺序是摸到子宫颈，然后沿着子宫颈触摸子宫角、卵巢，然后是子宫中动脉。

厂长说，手臂伸入肛门后，直肠内如有宿粪，可用手指扩张肛门，使空气由手指缝进入直肠内，促使宿粪排出。

不过我不是前几位伸手插入奶牛肛门的同学，这个任务由几个率先伸手插入奶牛肛门进行检查的同学完成，而我的手拖出后只粘上了及其少量的粪便，只是有一种很浓的类似胃酸的难闻且难忘的味道。

可是在实习的最后还是发现有同学在检查时不小心弄破了奶牛的直肠，这对奶牛的伤害是比较大的，希望那头奶牛直肠伤口早些愈合。

一头奶牛的肛门被这么几十号人的手插了又插，辛苦了。

　　在等待完所有同学都将手伸进奶牛的直肠进行体验并且把手臂各种清洗干净之后，大家合影留恋，并且在老师的带领下集合返校，本次实习由此宣告圆满结束。

　　实习总结：

果然只有实践才能检验自己所学的东西能否被活用。

通过实习和自己的切身体验，更进一步的了解并掌握奶牛直肠检查的方法，加深了对奶牛生殖器官的认识，增进了对课本知识在实践中如何运用的理解，并且从一个新的层面了解了畜牧这个行业。

　　动物繁殖学实验心得2

　　一、实习目的

　　掌握种畜精液品质检查方法，熟悉检查程序，学会药品的配制方法，为以后从事畜牧生产打下坚实的基础。

　　二、药品和仪器

　　药品：

氯化钠、苯胺黑、伊红、氯胺T、美蓝（甲基蓝）、乙醚、无水乙醇、95%乙醇、复红、苯酚（石炭酸）、氢氧化钾、苏木精硫酸铝钾、冰醋酸、二水磷酸二氢钠、磷酸氢二钾、40%福尔马林液、十二水磷酸氢二钠、甲醛、碳酸镁、Giemsa原料、甘油、甲醇、香柏油、蒸馏水。

　　仪器：

小试管、50ml容量瓶、100ml容量瓶、500ml容量瓶、1000ml容量瓶、试管架、显微镜、载玻片、盖玻片、水浴恒温箱、温度计、量筒、胶头滴管、大烧杯、小烧杯、染色用玻璃板、医用胶带、镊子、酒精灯、毛细玻璃管、pH试纸、移液枪（1ml、10ul）、电子天平、称量纸、药品勺、滤纸、漏斗、标签纸、玻璃棒、移液管、血细胞计数器、纱布、药棉、研钵。

　　三、试剂配制

　　3%氯化钠溶液：

称取30g氯化钠，在烧杯中溶解并定容于1000ml容量瓶中。

　　1%氯化钠溶液：

称取10g氯化钠，在烧杯中溶解并定容于1000ml容量瓶中。

　　0.9%氯化钠溶液：

称取9g氯化钠，在烧杯中容解并定容于1000ml容量瓶中。

　　5%伊红溶液：

取2.5g的伊红（曙红），用蒸馏水配制成50ml的伊红溶液。

　　1%苯胺黑溶液：

取0.5苯胺黑（阿尼林黑、精元），用蒸馏水配制50ml的苯胺黑溶液。

　　0.1mg/ml美兰溶液：

取美兰100mg，溶解于100ml的1%的NaCl溶液中，置于容量瓶中3d，再用1%氯化钠溶液稀释10倍备用。

　　复红原液：

称取10g复红（品红）溶于100ml95%的酒精中。

　　5%石炭酸溶液：

称取5g苯酚溶于100ml蒸馏水。

　　饱和伊红酒精溶液：

量取60ml95%酒精于烧杯中，加入伊红不断搅拌，直至伊红不再溶解为止。

　　复红染色液：

取复红原液10ml、5%石炭酸溶液100ml相互混合，然后再加入饱和伊红酒精溶液50ml混合，放置两周后即可使用。

　　美蓝溶液：

取1g美蓝溶于100ml95%酒精中。

　　0.01%氢氧化钾溶液：

取0.1g氢氧化钾用蒸馏水定容至1000ml。

　　美蓝染色液：

取美蓝溶液30ml、0.01氢氧化钾溶液100ml混合，然后过滤并加入3倍量的蒸馏水，混合后即可使用。

　　0.5%氯胺T：

取氯胺T0.5g溶于100ml蒸馏水中。

　　苏木精溶液：

苏木精2g、冰醋酸10ml、甘油100ml、95%酒精100ml、蒸馏水100ml、硫酸铝钾5g。

　　1.将苏木精溶于少量酒精中，加冰醋酸后搅拌。

　　2.加入甘油及其余酒精。

　　3.研碎钾矾溶于水并加温。

　　4.将其一滴滴加入染色剂中，并不断搅动。

　　5.瓶口用双层纱布包扎，放于通风处，并经常摇动，颜色变为紫色时方可使用。

如

　　果加入0.2g碘酸钾即刻成熟。

　　使用时，原液：

50%酒精和等量冰醋酸混合液为1:

1混合。

　　伊红染液：

取1g伊红溶于100ml95%酒精中，染色时，取一定量的该液加入等量70%的酒精。

　　福尔马林缓冲液：

将21.82gNa2HP04·

2H20和22.25gKH2P04分别溶于500ml蒸馏水中，然后取200mlNa2HP04加80mlKH2PO4配成缓冲液。

再取该缓冲液100ml加入62.5ml40%（v/v）福尔马林溶液，最后加蒸馏水至500ml。

　　磷酸盐缓冲液：

取Na2HPO4·

12H2O2.2g、NaH2PO4·

2H2O0.55g，先用少量蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至100ml。

配制后用pH试纸测pH值，应为7.0～7.2。

　　福尔马林磷酸盐固定液

　　1.Na2HPO4·

12H2O2.25g、NaH2PO4·

2H2O0.55g置于100ml烧杯中，加入0.89%NaCl溶液约30ml，使之溶解。

　　2.加入甲醛MgCO3饱和液8ml。

　　甲醛MgCO3饱和液配制方法：

在500ml福尔马林（40%甲醛）中加入8gMgCO3。

此饱和液必须在一周前配好。

　　3.用0.89%NaCl溶液少许冲洗装过甲醛的量筒置于容量瓶中，并定容至100ml。

此液配好后，第二天即可用。

一般在室温下保存，其pH为7.0～7.2。

　　Giemsa原液：

按1gGiemsa原料：

66ml甘油：

66ml甲醇的比例配制。

将Giemsa染料置于研钵中，先加入少量温热（60℃）的甘油，充分研磨至无颗粒呈浆糊状。

再将剩余甘油全部倒入，置56℃恒温箱中保温2小时。

分次用甲醇清洗容器于棕色瓶中保存。

保持一个月后才能使用。

此原液放置时间越长越好，但使用前需经过滤。

　　Giemsa染液（必须在染色前配制）：

按Giemsa原液:

磷酸缓冲液:

蒸馏水的比例为2:

3:

5的比例配制。

　　四、实习内容

（一）肉眼观察

　　猪精液稀薄，灰白色，无云雾状现象。

（二）精子密度的检查及活率评分

　　评定精子的活率在25℃下（在37℃保温箱内或加热在舞台最佳），用玻璃棒取一

　　滴原精液或稀释精液滴在载玻片上，盖上盖玻片，其内无气泡、充满精液，在油镜下，暗视野中观察。

　　备注：

稀释时，用等温的0.9%NaCl溶液稀释;

标准是直线运动精子的比例。

　　（三）死活精子百分率的测定

　　1.方法各取5ml的5%伊红和1%苯胺黑按1:

1混匀，分装于1—2ml的容量试管中，约为容量的1/2，在37℃水浴，随后加1—3滴原精，摇匀，水浴3min，取出待用。

用火柴棍沾一滴混合液于载玻片一端，考另一端推进制成抹片，干燥，在500—600倍下观察。

（制抹片，在35℃—40下，快速）

　　2.结果活精子头部不着色，死精子头部呈红色，苯胺黑为背景染色，容易辨别，数200个或500，，分别数出活精子和死精子，并计算。

　　（四）精子呼吸强度的测定

　　1.原理由于精子呼吸消耗精液中的氧，氧耗尽，美蓝退色，美蓝遇氧时又恢复其蓝色，其反应机制是由于精子脱氢酶的作用，脱去糖原上的氢原子，在无氧条件下，氢原子与蓝色的甲烯蓝结合变成甲烯白。

因此，实际上也是测定精子脱氢酶活性的一种方法。

其呼吸强度与美兰退色时间呈负相关。

　　2.方法取一滴美兰与精液于载玻片上，混匀。

吸入两段毛细管2—3cm，两段分别

　　置于37℃、10℃条件下，用计时器记录时间，并比较、观察。

　　（五）精子密度的计数检查

　　1.将计数室推上盖玻片。

推上后立起计数板不掉下来为原则，盖玻片在折光时可见清晰的彩色条纹。

　　2.将盖好盖玻片的计数板置于低倍镜下观察，首先要求找到清晰的计数室。

　　3.用移液枪吸取1ml3%氯化钠溶液于小试管中，再用移液枪吸出10ul氯化钠溶液，同时加入10ul猪精液，即进行一百倍稀释，摇匀。

　　4.用吸管吸取稀释后的精液，并将吸管尖端置于血细胞计数室和盖玻片交界处的边缘上，吸管内的精液自动渗入计数室内，使之自然、均匀地分充满计数室。

不要溢出和有气泡，静放2min。

　　5.移到高倍镜下检查，数出四角和中央方格中的精子数，也就是80个小方格中的精子数，载物台要平置。

　　6.计算精子数1ml=原精液内的精子数=5个中央方格数的精子数×

5×

10×

1000×

稀释倍数。

　　7.吸管用后清洗，步骤：

自来水—蒸馏水—95%酒精—乙醚。

　　8.计数板用后清洗，步骤：

自来水—蒸馏水—白绸布擦干净备用。

　　（六）精子头部形态的观察（威廉氏染色法）

　　染色程序：

　　1.先制作精液抹片，要求薄而均匀。

然后风干或用酒精灯火焰固定。

　　2.浸入无水酒精中固定2~3min，取出风干。

　　3.浸入0.5%氯胺T中l~2min。

　　4.用清水洗1~2min。

　　5.迅速通过96%的酒精，风干。

　　6.放人石碳酸复红染色液中l0~15min，然后清水中蘸2次。

　　7.迅速通过美蓝染色液。

　　8.水洗后风干。

　　经此方法染色后，精子头部呈淡红色，中段及尾部为暗红色，头部轮廓清晰。

可在高倍镜或油镜下观察200个精子计算出各类头部畸形精子的比例。

　　畸形精子百分率=畸形精子数/总精子数×

100%

　　（七）非精子有形成分的观察（采用苏木精—伊红染色法）

　　非精子有形成分多为精子形成过程中的某些退化物、生殖上皮的脱落物和血细胞等。

这些成分在精液中出现的比例和类型在一定程度上能反映睾丸和精液排出管道的生理状态。

在精液中经常出现的非精子有形物有白细胞、红细胞和鳞状上皮细胞等。

　　1.先制备间断式的精液抹片（即当推制抹片时，不要一推到底，而要断续前推，使抹片厚度有一个梯度变化，染色后易于观察不同类型的精子成分），然后风干。

　　2.浸入无水酒精中固定3~5min，风干。

　　3.分别浸入95%的酒精、75%的酒精和蒸馏水中各1min。

　　4.浸入苏木精染色液中5min。

　　5.浸入伊红染色液中lmin。

　　6.冲洗1~3min。

　　7.通过70%酒精和无水酒精，风干。

　　8.风干后用二甲苯加盖玻片封存，如不保存可直接观察。

　　（八）精子尾部形态观察

　　观察程序：

　　1.lml玻璃管中装入一些福尔马林缓冲液，置于37℃恒温箱中备用。

　　2.根据原精液的浓度，向装有福尔马林缓冲液的小玻璃管中滴2~5滴精液并混匀。

　　3.取一滴上述混合液置于载玻片上，加盖玻片静止数分钟后在400倍的相差显微镜下观察精子尾部形态。

随机观察200个精子计算各种尾部畸形精子所占的比例。

　　（九）精子顶体染色观察

　　先准备洁净的载玻片。

用洗涤灵擦洗，清水冲洗，再用蒸馏水漂洗以不挂水珠为净，烘干或晾干备用。

　　1.抹片将需测定的样品摇匀，取1滴中层精液平滴于载玻片的右端，取一块盖玻片，呈35°

角自精液滴的左面向右接触样品，样品精液即呈条状分布在载玻片和盖玻片接触的边缘之间。

将上面的盖玻片贴着平置的载玻片表面，自右向左移动，带着精液均匀地涂抹在载玻片上。

切忌直接将精液滴“推”过去，人为造成精子损伤。

在制作的抹片背面右端用特种记号笔编号。

每份精液样品需同时制作两个抹片。

　　2.风干自然风干5~20min。

　　3.固定将风干的抹片平置于染色架上，用滴管吸取1ml固定液滴于抹片上，并使固定液布满于整个抹片表面，静止固定15min。

　　4.水洗用玻片镊夹住抹片一端，将固定液弃去倒入染色缸或平皿内，在装有蒸馏水的烧杯中，上下左右摇晃涮洗，夹住松开镊子几次，取出抹片于磁盘边待干。

　　5.染色将固定后的抹片平置于染色架上，用滴管吸取新配制Giemsa染液约2ml，置于要染的玻片上方平行。

自左至右挤出染液于抹片上，使染液均匀布满在抹片上，静止染色90min。

　　6.水洗用镊子夹住染片，将染片上的染液弃去倒入平皿内，再换装有自来水的烧杯中冲洗，冲洗方法同上。

经数次涮洗，直至水洗液无色为止。

洗的过程中，若水已变蓝，则可及时换清水。

洗净后可立于磁盘边待干。

　　7.将精液染片置于显微镜下，先用低倍镜找到精子，再换100倍下进行油镜观察。

精子顶体呈紫色，包围精子头前部。

　　根据精子顶体完整和损伤与否，将精子顶体形态分为4种类型：

　　顶体完整型精子头部外形正常，着色均匀，顶体完整，边缘整齐，可见微隆起的顶体嵴，赤道带清晰。

　　顶体膨胀型顶体轻微膨胀，边缘不整齐，顶体嵴肿胀，核前细胞膜不明显或缺损。

　　顶体破损型顶体破损，精子质膜严重膨胀破损，着色浅且不均匀，头前部边缘不整齐。

　　顶体全脱型精子顶体全部脱落，精子核裸露。

　　根据以上4种类型分别统计，观察200个精子，并计算出精子顶体完整率。

　　精子顶体完整率=顶体完整型精子数/精子总数×

　　要求2张抹片精子顶体完整率差异不超过15%，求二者平均值。

　　五、实习总结

　　通过本次实习，对种公猪精液的品质检查内容、程序和方法有一定的了解和掌握，同时对其他家畜的精液品质检查也有一定的认识和了解，这对我们以后从事畜牧生产，尤其在种公畜精液的品质检查有一定的知识积累，为畜牧生产打下了基础。

　　动物繁殖学实验心得3

　　一、目的和要求

　　1.熟悉人工授精所用的采精和输精器械，了解其用途及使用方法。

　　2.练习安装假阴道。

　　二、材料和仪器设备

（一）采精器材牛羊猪马的采精用假阴道，牛羊电刺激采精棒，猪采精用的橡胶手套

（二）输精器材牛羊猪马输精器，阴道开张器，额灯和手电筒

　　（三）辅助器材高压灭菌器，酒精灯，长柄钳，镊子，玻璃棒，温度计

　　（四）药品灭菌凡士林，75%和95%酒精棉球，滑石粉，来苏儿，洗衣粉

　　三、方法和步骤

（一）人工授精器材的清洗与消毒

（二）假阴道的安装调试

　　实验二精子活率评定

　　掌握评定精子活力的方法及评价指标;

验证外界因素对精子运动及生存能力的影响;

。

　　二、材料和仪器

（一）精液牛、羊、猪等任一种动物的精液

（二）器械显微镜，显微镜保温箱（或显微镜恒温台），载玻片，盖玻片，搪瓷盘，温度计，滴管，擦镜纸，纱布，有刻度试管，计数器

　　（三）药品5%伊红

　　三、内容和方法

（一）精液的肉眼检查

（二）评定精子的活率

　　（三）外界因素对精子活率的影响

　　实验三精子密度测定

　　掌握检查精子密度的几种方法。

要求学生熟练掌握血细胞计数方法。

（一）材料牛精液、猪精液

（二）器材显微镜，血吸管，红细胞和白细胞吸管，血细胞计数室，载玻片，盖玻片，200µ

l枪头，细乳胶管，5ml试管，1ml移液枪及枪头

　　（三）药品3%氯化钠，乙醚，95%乙醇，去离子水

　　三、内容和步骤

（一）目测法

（二）计数法

　　实验四精子畸形率的测定

　　掌握精子畸形率的测定方法。

　　二、材料和器械

（一）材料牛、羊、猪或兔等任何一种家畜的新鲜精液或冷冻精液

（二）器械高倍显微镜，计数器，载玻片，盖玻片

　　1、制作精液抹片。

　　2、浸入无水酒精中固定2~3min，取出风干。

　　3、放人石碳酸复红染色液中l0~15min，然后清水中蘸2次。

　　4、迅速通过美蓝染色液。

　　5、水洗后风干

　　6、在高倍镜或油镜下观察200个精子计算出各类头部畸形精子的比例。

　　实验五稀释液配制及精液稀释

　　掌握稀释液配制的基本程序和操作方法及稀释精液的方法。

（一）材料鸡蛋、原精液

（二）器材250ml三角瓶，250ml烧杯，100ml量筒，感量为0.1克的天平，玻璃漏斗，电炉，石棉网，玻璃棒，定性滤纸，消毒纸巾，硫酸纸，灭菌牛皮纸，橡皮筋，10ml一次性注射器，1ml注射器，5ml注射器，75%酒精棉球

　　（三）药品葡萄糖，柠檬酸钠，青霉素，链霉素

（一）玻璃用品的清洗与消毒

（二）天平的标准

　　（三）称量药品

　　（四）溶液配制

　　实验六兔的超数排卵

　　了解主要促性腺激素的作用。

初步掌握冲卵和检卵技术。

（一）动物4只供体母兔，2只公兔

（二）器具玻璃注射器，兔用手术台，实体显微镜、手术刀

　　（三）药品FSH，PMSG，HCG，75%酒精，冲卵液

（一）供体兔超数排卵处理

　　1.FSH处理　2.PMSG处理

　　3.对照组处理

（二）手术冲胚方法

　　（三）早期胚胎观察

　　实习七母畜的发情鉴定

　　1.掌握母畜发情鉴定的各种方法，判断输精或配种时间。

　　2.掌握牛直肠检查的基本操作方法。

（一）材料母畜（牛、羊、猪）、试情公畜

（二）用具六柱栏或保定架，开腔器，手电筒，脸盆，毛巾，肥皂，长臂手套

　　（三）药品凡士林，70%酒精，消毒液

（一）外部观察法

（二）试情法

　　（三）阴道检查法

　　（四）直肠检查法

　　实习八输精

　　了解各种家畜的输精过程，掌握家畜的输精操作方法。

（一）材料发情的母牛、精液

（二）用具保定架，灭菌的输精器（金属或玻璃），卡苏枪，脸盆，肥皂，长臂手套

　　（三）药品75