检验医学SOP文件5--生化室作业指导书.doc
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ABCD人民医院检验科程序文件
文件编号：
版本/修订号：
A/0
主题内容
关于发布《程序文件》的声明
生效日期：
20060808
第4页共144页
生化室作业指导书
文件编号：
ABCD-3-SF-01~61
第A版
编制：
审核：
批准：
生效日期：
2015年4月8日
ABCD人民医院检验科
ABCD人民医院检验科生化室作业指导书
文件编号：
版本/修订号：
A/0
主题内容
目录
生效日期：
20150408
第4页共223页
目录
序号
主题内容
代号
页号
1
血清总胆红素测定
ABCD-3-SF-01
6
2
血清直接胆红素测定
ABCD-3-SF-02
10
3
血清总蛋白液体双缩脲法测定
ABCD-3-SF-03
13
4
血清白蛋白溴甲酚绿法测定
ABCD-3-SF-04
16
5
血清丙氨酸氨基测定
ABCD-3-SF-05
19
6
血清天门冬氨酸氨基测定
ABCD-3-SF-06
23
7
血清碱性磷酸酶测定
ABCD-3-SF-07
27
8
血清α-淀粉酶测定
ABCD-3-SF-08
31
9
血清葡萄糖己糖激酶法测定
ABCD-3-SF-09
35
10
血清尿素氮谷氨酸测定
ABCD-3-SF-10
39
11
血清肌酐苦味酸法测定
ABCD-3-SF-11
43
12
血清尿酸TBHBA法测定
ABCD-3-SF-12
46
13
血清总胆固醇酶试剂法测定
ABCD-3-SF-13
50
14
血清甘油三酯酶试剂法测定
ABCD-3-SF-14
54
15
血清镁二甲苯胺蓝法测定
ABCD-3-SF-15
58
16
血清无机磷磷钼酸法测定
ABCD-3-SF-16
61
17
血清钙偶氮胂Ⅲ法测定
ABCD-3-SF-17
65
18
血清载脂蛋白A1测定
ABCD-3-SF-18
68
19
血清载脂蛋白B测定
ABCD-3-SF-19
72
20
血清高密度脂蛋白胆固醇测定
ABCD-3-SF-20
76
21
血清低密度脂蛋白胆固醇测定
ABCD-3-SF-21
80
22
血清肌酸激酶（CK）法测定
ABCD-3-SF-22
84
23
血清肌酸激酶MB同工酶测定
ABCD-3-SF-23
88
24
血清乳酸脱氢酶DGKC法测定
ABCD-3-SF-24
92
25
血清乳酸脱氢酶测定
ABCD-3-SF-25
96
26
血清a-羟丁酸脱氢酶测定
ABCD-3-SF-26
99
27
血清总胆汁酸循环酶法测定
ABCD-3-SF-27
103
28
OLYMPUS钠、钾、氯离子测定
ABCD-3-SF-28
106
29
血清二氧化碳酶试剂法测定
ABCD-3-SF-29
112
30
血清糖化蛋白四氮唑蓝法测定
ABCD-3-SF-30
115
31
尿液或脑脊液总蛋白测定
ABCD-3-SF-31
118
32
血清g-谷氨酰转移酶测定
ABCD-3-SF-32
121
33
钾的电极电位法测定
ABCD-3-SF-33
124
34
钠离子电极电位法测定
ABCD-3-SF-34
127
35
氯的电极电位法测定
ABCD-3-SF-35
132
36
钙的比色法测定
ABCD-3-SF-36
137
37
血、尿、脑脊液葡萄糖测定
ABCD-3-SF-37
142
38
血、尿液尿素氮（BUN）测定
ABCD-3-SF-38
147
39
血、尿液肌酐（Cr）测定
ABCD-3-SF-39
152
40
血清天门冬氨酸测定
ABCD-3-SF-40
157
41
动脉血气电极法测定
ABCD-3-SF-41
163
42
血清乳酸脱氢酶速率法测定
ABCD-3-SF-42
168
43
血、尿液淀粉酶两点法测定
ABCD-3-SF-43
173
44
血清蛋白电泳法检查
ABCD-3-SF-44
178
45
高铁血红蛋白还原试验比色法
ABCD-3-SF-45
181
46
血清二氧化碳酶反应终点法测定
ABCD-3-SF-46
183
47
正常值、病理值复合控制品
ABCD-3-SF-47
188
48
载脂蛋白A1、B复合控制品
ABCD-3-SF-48
190
49
复合校准品
ABCD-3-SF-49
192
50
载脂蛋白A1、载脂蛋白B校准品
ABCD-3-SF-50
194
51
高、低密度脂蛋白胆固醇校准品
ABCD-3-SF-51
196
52
722分光光度计维护规程
ABCD-3-SF-52
198
53
血气分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-53
201
54
Medical低温冰箱操作维护规程
ABCD-3-SF-54
203
55
MEDICA90纯水机操作维护规程
ABCD-3-SF-55
205
56
AU1000ISE分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-56
207
57
AU1000生化分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-57
209
58
电泳仪操作维护规程
ABCD-3-SF-58
214
59
干化学分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-59
217
60
离心机操作维护规程
ABCD-3-SF-60
222
ABCD人民医院检验科生化室作业指导书
文件编号：
版本/修订号：
A/0
主题内容
修订页
生效日期：
20060808
第5页共223页
修订页
序号
文件编号
页码
需更改的内容
更改内容
批准人
批准日期
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
ABCD人民医院检验科生化室作业指导书
文件编号：
ABCD-3-SF-01
版本/修订号：
A/0
主题内容
血清总胆红素（T-BIL）测定
生效日期：
20060808
第9页共223页
血清总胆红素（T-BIL）测定
1.实验原理
血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。
大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。
这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。
使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。
在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。
胆红素+DCA红色偶氮化合物
表面活性剂
2.标本：
2.1病人准备：
无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型：
血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3.标本存放：
15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！
。
4.标本运输：
常温条件下避光保存运输。
5.标本拒收标准：
标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6.实验材料
6.1试剂：
申能总胆红素试剂盒（14108171701试剂1＋试剂2）
6.1.1试剂组成
试剂1：
6×64ml
磷酸缓冲液40mmol/L
氯化钠9g/L
表面活性剂,稳定剂适量
试剂2：
6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L
盐酸30mmol/L
表面活性剂适量
6.1.2试剂准备：
试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存
试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示：
当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5注意事项：
此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；警告！
腐蚀剂！
不要入口；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
6.2校准品：
使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器：
奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数：
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
8.2仪器操作步骤：
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件。
9.检验结果的判断与分析
10.质量控制：
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法：
以TruCalU复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：
△Au
总胆红素（μmol/L）=×校准液浓度
△As
12.参考值范围：
婴儿：
出生24小时内＜150μmol/L
出生第2天22-193μmol/L
出生第3天12-217μmol/L
出生第4～6天1.7-216μmol/L
儿童：
＞一个月3.4-17μmol/L
成年人：
1.7-21μmol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义：
胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14.操作性能
14.1线性范围：
1.2～513μmol/L
14.2精密度：
精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于3%或SD≤0.07，总精密度小于5%或SD≤0.10。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20
（μmol/L）
s
（μmol/L）
CV
（%）
批间精密度
n=20
（μmol/L）
s
（μmol/L）
CV
（%）
样品1
15.22
0.464
3.05
样品1
14.88
0.408
2.74
样品2
17.44
0.405
2.32
样品2
19.66
0.686
3.49
样品3
82.60
0.785
0.95
样品3
79.52
2.274
2.86
14.3方法学比较：
本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x），同时对247个样品进行T-BIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：
y=1.00x-0.00mol/L；r=1.000。
14.4灵敏度：
本试剂的检测限为1.2μmol/L。
14.5病人结果可报告范围：
1.2～513μmol/L
15.超出范围结果处理：
本法线性上限为513μmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:
1稀释，重新测定，结果乘以2。
16.病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为513μmol/L。
如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:
1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：
当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18.补救措施：
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献
1. ThomasLed.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:
TH-BooksVerlagsgesellschaft;1998.p.192-202.
2. TolmanKG,RejR.Liverfunction.In:
BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:
W.B.SaundersCompany;1999.P.1125-77.
3. RandRN,diPasquaA.Anewdiazomethodforthedeterminationofbilirubin.ClinChem1962;6:
570-8.
20.其他：
仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
ABCD人民医院检验科生化室作业指导书
文件编号：
ABCD-3-SF-02
版本/修订号：
A/0
主题内容
血清总胆红素（T-BIL）测定
生效日期：
20060808
第12页共223页
血清直接胆红素（D-BIL）测定
1.实验原理
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物，在酸性条件下呈红色。
2.标本：
2.1病人准备：
无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型：
血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。
3.标本存放：
15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！
。
4.标本运输：
常温条件下避光保存运输。
5.标本拒收标准：
标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6.实验材料
6.1试剂：
申能总胆红素试剂盒：
14108271701 试剂＋试剂2
6.1.1试剂组成
试剂1：
16×64ml
EDTA-Na20.07mmol/L
氯化钠6.6g/L
氨基磺酸70mmol/L
试剂2：
6×16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L
盐酸130mmol/L
EDTA-Na20.02mmol/L
6.1.2试剂准备：
试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存：
试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示：
当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5注意事项：
此试剂为体外诊断用。
警告！
腐蚀剂！
不要入口。
避免和眼睛，皮肤或衣服接触。
如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。
接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。
6.2校准品：
使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品：
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器：
奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数：
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤：
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
检验结果的判断与分析
10.质量控制：
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法以TruCalU复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。
手工测定计算方法为：
△Au
直接胆红素（μmol/L）=--------×校准液浓度
△As
12.参考值范围：
≤6.8mmol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义：
胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14.操作性能
14.1线性范围：
1.7～171mmol/L
14.2精密度：
精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04，总精密度小于5%或SD≤0.07。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20
（μmol/L）
s
（μmol/L）
CV
（%）
批间精密度
n=20
（μmol/L）
s
（μmol/L）
CV
（%）
样品1
6.0
0.20
3.34
样品1
6.2
0.19
3.12
样品2
12.8
0.12
1.00
样品2
13.0
0.19
1.46
样品3
36.4
0.26
0.71
样品3
35.4
0.46
1.30
14.3方法学比较：
本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x），同时对85个样品进行DBIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：
y=0.95x+0.68μmol/L；r=0.995。
14.4灵敏度：
1.7mmol/L。
14.5病人结果可报告范围：
1.7～171μmol/L
15超出范围结果处理本法线性上限为171mmol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:
1稀释，重新测定，结果乘以2。
16.病危报警值的处理无。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为171mmol/L。
样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:
1稀释，重新测定，结果乘以2。
17.2干扰物质：
当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
血红蛋白浓度≥0.50g/L将产生干扰。
18.补救措施：
当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献：
Tietz,N.W.（Ed）,FundamentalsofClinicalChemistry,3rdEdition,W.B.Saunders,1987.
VandenBergh,A.andMueller,P.,BiochemZ,77:
90,1916
NCCLS,InterferenceTestinginClinicalChemistry,EP7-P,1986.
Young,D.S.,EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests,4thEdition,AACCPress,1995.
NCCLS,EvaluationProtocolEP5-T2,1992.
Rand,R.N.,DIPasque,A.,ClinChem1962;8:
570
Henry,J.,Cannon,D.C.,Winkelmann,J.V.,Clinicalchemistry,principlesandtechnics,Harper&RowPublishersIns.,HagerstownMaryland,1974:
1042
Thomas,L.:
Laboranddiagnose,4thedition,DieMedizinischeVerlagsgesellschaft,Marburg,1992:
235
20.其他：
仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
ABCD人民医院检验科生化室作业指导书
文件编号：
ABCD-3-SF-03
版本/修订号：
A/0
主题内容
血清总蛋白液体测
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