香草兰豆荚中香兰素的测定.docx
《香草兰豆荚中香兰素的测定.docx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《香草兰豆荚中香兰素的测定.docx(13页珍藏版)》请在冰点文库上搜索。
![香草兰豆荚中香兰素的测定.docx](https://file1.bingdoc.com/fileroot1/2023-4/29/a636461b-abba-4fde-a468-7fcc69a4eadb/a636461b-abba-4fde-a468-7fcc69a4eadb1.gif)
香草兰豆荚中香兰素的测定
香草兰豆荚中香兰素的测定
NY/T713——2003
1 范围
本标准规定了属于Vanillafragrans(Salisbury)Ames和syn.VanillaplanifoliaAndrews种的
香草兰中香兰素测定方法。
本标准适用于香草兰豆荚、切段和粉末中香兰素的测定。
本标准不适用于香草兰豆荚抽提物中香
兰素的测定。
本标准描述了分析香兰素的三个分析方法:
a) 高效液相色谱法;
b) 紫外分光光度法;
c) 气相色谱法。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T12806 实验室玻璃仪器 单标线容量瓶
3 高效液相色谱法(仲裁方法)
试样进行抽提和稀释,加入内标物,用高效液相色谱法(HPLC)分离,再用紫外检测器测定香兰素
的含量。
3.2 试剂
分析纯试剂、蒸馏水、去离子水或相等纯度的水
3.2.1 乙醇,95%(体积分数)。
3.2.2 甲醇。
3.2.3 磷酸溶液:
c(H3PO4)=0.01mol/L。
3.2.4 流动相:
用25份甲醇(3.2.2)与75份稀磷酸(3.2.3)混合。
用膜(3.3.3)过滤、脱气。
3.2.5 香兰素(4—羟基—3—甲氧基苯甲醛)为对照标样,纯度大于99%。
3.2.6 内标物:
乙酰水杨酸,纯度大于99%。
3.2.7 香兰素储备液:
称取一定量的香兰素(3.2.5),精确至0.001g。
用流动相配制成为浓度为1g/L
的标准储备液。
3.2.8 工作溶液
用流动相(3.2.4)稀释储备液(3.2.7),获得工作溶液,使工作溶液的浓度符合3.2.8.1中的要求。
香兰素工作溶液浓度为0.1g/L可在4℃下暗处保存不超过10天。
3.2.9 内标物溶液
将乙酰水杨酸(3.2.6)溶解于流动相(3.2.4)中,使其浓度为0.6g/L,称量时精确至0.001g
注:
内标浓度应与样品溶液中香兰素浓度基本一致。
3.3 仪器
3.3.1 气密研磨器。
3.3.2单标容量瓶,容量为100mL和200mL,符合GB/T12806的要求。
3.3.3过滤膜,孔径为0.45µm。
3.3.4高效液相色谱仪:
—紫外检测器;
—进样装置;
—色谱柱:
C18硅胶柱,5/µm~10/µm粒径。
3.3.5注射器:
用于高效液相色谱。
3.3.6分析天平,精确度为0.001g。
3.4 试样的制备
将样品(香草兰豆荚、切段或香草兰粉)研磨并使之充分混匀。
3.5 称样
称20g已制备好的样品,准确至0.001g。
3.6 抽提
在抽提仪器(3.3.4)中用大约200mL乙醇(3.2.1)抽提试样(3.5)16h,即溶剂进行25次~30次
循环。
每一100g豆荚用1L溶剂抽提。
将抽提物转移至一个200mL的容量瓶(3.3.2)中。
用少量的乙醇清洗抽提仪器中的烧瓶数次,并
将洗出液加入容量瓶中,乙醇定容并混合均匀,
用流动相稀释该溶液10倍。
3.7 分析步骤
3.7.1 色谱操作条件
流动相(3.2.4)流速大约为1mL/min,在3.3.5规定的条件下室温进行分析。
3.7.2 校准
3.7.2.1 对照标准品和内标物分别进样,然后两者混合起来进样。
调整操作条件使内标和样品峰的分
辨率大于1。
3.7.2.2 经过膜(3.3.3)过滤后3.6中制备的样品上机测定。
3.了.2.3 用10mL内标物与10mL3.2.7所得到的标准溶液混合。
用膜过滤上机进样测定峰高或峰
面积。
校正因子(ki)由式
(1)给出。
…………………………………………
(1)
式中:
ki——待测定的组份中组份i的响应系数;
mi——上机溶液中组份i中的质量,单位为毫克(mg);
ms——上机溶液中内标物的质量,单位为毫克(mg);
hi——组份i的峰高度,单位为厘米(cm);
hs——内标物的峰高度,单位为厘米(cm)。
注:
式中峰高可由其峰面积代替。
3.7.3 测定
3.7.3.1 用10mL内标物与10mL根据3.6制备的样品溶液混合。
用膜过滤。
3.7.3.2 在3.7.2.3规定的条件下将3.7.3.1所得到的溶液进样。
待测定的物质的质量用式
(2)计算:
…………………………………………
(2)
式中,各符号的含义与3.7.2.3中的相同。
注:
式中的峰高可由其峰面积代替。
4 紫外分光光度法
4.1 原理
试样中所含的香兰素用乙醇抽提,用紫外分光光度法测定乙醇溶液中的香兰素含量。
4.2 试剂
分析纯试剂、蒸馏水、去离子水或者相同纯度的水。
4.2.1 乙醇,96%(体积分数)。
4.2.2 氢氧化钠溶液,c(NaOH)=1mol/L。
4.2.3 香兰素(4—羟基—3—甲氧基苯甲醛)。
4.3 仪器
4.3.1 气密研磨器。
4.3.2 100mL、250mL单标容量瓶,符合GB/T12806的要求。
4.3.3 10mL、20mL和25mL移液管。
4.3.4 干燥器。
4.3.5 索氏抽提仪(3.3.4)。
4.3.6 分光光度计。
4.3.7 样品池,光路长度为1cm。
4.3.8 称量瓶,容量为25mL,带有气密的塞子
4.3.9 分析天平,精确度为0.001g。
4.4 程序
4.4.1 香兰素比吸光度的测定
4.4.1.1 标准溶液的制备
在称量瓶(4.3.8)中称取在干燥器(4.3.4)中干燥好的香兰素(4.2.3)约30mg,精确至0.001g。
将其溶于约20mL。
的乙醇(4.2.1)中,转移至一个250mL。
的容量瓶中。
用乙醇冲洗称量瓶数次,并将
其倒人容量瓶中,用乙醇定容并摇匀(溶液A1)。
用移液管移取25mL。
溶液A1至100mL的容量瓶(4.3.2)中。
用乙醇定容并摇匀(溶液B1)。
用移液管移取10mL溶液B1至100mL的容量瓶中。
加入60ml。
乙醇和2mL。
氢氧化钠溶液
(4.2.2),混合均匀。
用乙醇定容并摇匀(溶液C1)。
4.4.1.2 参比溶液的制备
将2mL氢氧化钠溶液(4.2.2)用移液管加入一个100mL。
的容量瓶中,并用乙醇定容并摇匀,制成
参比溶液。
4.4.1.3 测定
用分光光度计(4.3.6)和样品池(4.3.7)测定并记录在250nm~420nm波长范围的溶液瓤相对
于参比溶液(4.4.1.2)的光谱图。
4.4.1.4 计算
最大的吸收发生于350nm
3nm,其吸光度应在0.2~0.8之间。
从大约270nm~380nm处画
一条基线。
记录最大吸光度(Amax)及相同波长的基线吸光度(Abase),按式(3)计算香兰素的比吸光度(
)
…………………………………………(3)
式中:
m——用于制备溶液的香兰素的质量,单位为毫克(mg)
4.4.2 试样的制备
将样品磨碎并混合均匀。
4.4.3 称样
称取20g已制备好的样品(4.4.2),精确至0.001g。
4.4.4 抽提
在抽提仪器(4.3.5)中用大约200mL乙醇(4.2.1),抽提试样16h,即溶剂进行25次~30次循环。
将其转移至一个250mL的容量瓶(4.3.2)中。
用少量的乙醇冲洗抽提仪器中的烧瓶数次,然后将这些
洗出液倒人容量瓶(4.3.2)中。
用乙醇定容并混合均匀(溶液A2)。
4.4.5 参比溶液的制备
用移液管将2mL氢氧化钠溶液(4.2.2)加入一个100mL的容量瓶(4.3.2)用乙醇稀释至刻度,混
合均匀,制成参比溶液。
4.4.6 测定
用移液管将25mLA2溶液加入一个100mL容量瓶中,用乙醇定容并混合均匀(溶液B2)。
用移液管将20mLB2溶液加入一个100mL容量瓶中,用乙醇定容并混合均匀(溶液C2)。
用移液管将10mLC2溶液加入一个100mL容量瓶。
加入约60mL乙醇和2mL氢氧化钠溶液
(4.2.2)。
用乙醇定容并混合均匀(溶液D2)。
用分光光度计(4.3.6)和样品池(4.3.7)测定并记录在波长范围250nm~420nmD2溶液相对于
参比溶液(4.4.5)的光谱图。
4.4.7 结果计算
香兰素含量Wv用样品质量百分数表示,按式(4)计算:
…………………………………………(4)
式中:
Amax——最大吸光度;
Abase——相同波长下基线处的吸光度;
香兰素的比吸光度(4.4.1.4);
m——用于抽提的试样的质量,单位为克(g)。
如果要将结果表示为相对于干物质的含量,将产品的水分含量计算进去即可。
5 气相色谱法
5.1 原理
用无水乙醇抽提试样,加入一种内标物用气相色谱法分离,再用FID检测器测定香兰素的含量。
5.2 试剂
分析纯。
5.2.1 无水乙醇。
5.2.2 无水硫酸钠。
5.2.3 内标:
丁香酚(98%)。
5.2.4 香兰素标准品:
纯度大于99%。
5.2.5 标准溶液的配制:
准确称取香兰素标准品,用无水乙醇溶解,配制成1.00mg/mL的香兰素标准
溶液,分别吸取1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL标准溶液于10mL比色管中,用无水乙醇定容
到10.00mL,加入2.00µL丁香酚和少量无水硫酸钠,充分摇匀后,上机测定。
5.3 仪器
5.3.1 气相色谱仪,附FID检测器。
5.3.2 索氏抽提仪(3.3.4)。
5.4 样品制备
将样品充分研磨并充分均匀。
5.5 分析步骤
5.5.1 提取
称取样品约2.5g(5.4),精确至0.001g。
用无水乙醇抽提试样16h,即溶剂进行25次~30次循
环。
提取液合并,定容到100mL,取5.00mL提取液加入2.00µL。
丁香酚内标,摇匀后上机。
5.5.2 测定
5.5.2.1 气相色谱参考条件
5.5.2.1.1 色谱柱:
玻璃柱,1.1mx3.2mm,内装填有OV-17ChromsorbW(AW-DMCS),或用同等
性能的填充柱或毛细管柱。
5.5.2.1.2 温度:
柱温180℃,气化室及检测室温度240℃。
5.5.2.2 色谱分析
吸取1µL试样注入气相色谱仪,记录色谱峰的保留时间和峰高。
再吸取1µL。
混标溶液进样,记录
色谱峰的保留时间和峰高。
根据组分在色谱上的出峰时间与标准组分比较定性;用内标法与标准比较
定量。
5.6 结果计算
5.6.1 校正因子(ki)由式(5)给出。
…………………………………………(5)
式中:
ki---待测定的组份中组份i的响应系数;
mi---溶液中组份i的质量;
ms---溶液中内标物的质量;
hi---色谱图测量到的组份i的峰高;
hs---色谱图测量到的内标物的峰高。
注:
式中峰高可由其峰面积代替。
5.6.2待测定的物质的质量按式(6)计算:
…………………………………………(6)
式中:
各符号的含义与5.6.1中的相同。
注:
式中峰高可由其峰面积代替。
5.6.3 香草兰豆荚中香兰素的质量百分数按式(7)计算:
………………………………………(7)
式中:
mi——溶液中香兰素的质量;
m——上机溶液中样品的质量。
附 录 A
(资料性附录)
本标准章条编号与ISO5562—2章条编号对照
表A.1 本标准章条编号与IS05562-2章条编号对照一览表
本标准章条编号
ISO5562—2章条编号
1
1
2
2
-
3
-
4.1
3
4.2
4
4.3
5
5
-
附 录 B
(资料性附录)
本标准与ISO5562-2技术性差异及其原因
表B.1 本标准与ISO5562-2技术性差异及其原因
本标准的章条编号
技术性差异
原 因
1
删除了ISO5562—2中a);b)改为a)、并删除了测定“香兰酸、4—羟基苯甲醛和4—羟基苯甲酸”;c)改为b);增加了c)气相色谱法测定香草兰豆荚中的香兰素。
ISO5562—2中a)为测定香荚兰豆和香荚兰粉的水分含量,不属于本标准范围。
增加的气相色谱法测定香草兰豆荚中的香兰素,已经是成熟和通用的分析方法,所以在本标准中采用。
2
ISO5562—2中“ISO1042”改为GB/T12806。
为了与国内标准的一致。
3
删除了ISO5562-2中3“术语和定义”、4测定香荚兰豆和香荚兰粉的水分含量。
本章中的内容与ISO5562—2中的4.2一致。
对与测定“香兰酸、4—羟基苯甲醛和4—羟基苯甲酸”的相应章节3.2.5、3.2.7、3.2.8的部分进行了删减。
为了与国内标准的一致。
4
本章中的内容与ISO5562—2中的4.3一致。
只是序列号作了相应的变动。
ISO5562—2中"IS01042"改为GB/T12806。
为了与标准序列号一致。
为了与国内标准的一致。
5
本章为新增内容。
增加气相色谱法测定,使本标准的实施更具有普遍性,标准的可操作性更强。