SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒说明书生工资料下载.pdf

SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒说明书生工资料下载.pdf

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该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除反应液中的各种酶蛋白、引物、dNTP等，得到高质量的DNA纯化产物，可直接用于酶切、测序等后续的分子生物学试验。

本试剂盒具有以下特点：

1.适用范围广，回收效率高，对于100bp10kb之间的DNA片段回收效率在90%以上。

2.操作简单快速，整个回收过程仅须5分钟左右。

3.洗脱效率高，洗脱体积最小可低至15l。

快速操作流程（快速操作流程（PCR产物纯化）产物纯化）1.准备工作。

a.检查WashSolution中是否已加入乙醇。

b.检查BufferB3中是否已加入异丙醇。

c.检查BufferB3是否出现沉淀。

2.在PCR反应液中加入5倍体积的BufferB3，充分混匀。

3.8,000g离心30秒。

倒掉收集管中液体。

4.加入500lWashSolution，9,000g离心30秒，倒掉收集管中液体。

5.重复步骤4一次。

6.空柱于9,000g离心1分钟。

7.将吸附柱放入一个干净的1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入15-40lElutionBuffer，室温静置1分钟后，离心1分钟。

保存管中DNA溶液。

收集上柱洗涤洗脱收集上柱洗涤洗脱试剂准备试剂准备1.自备材料：

水浴锅、小型高速离心机（最大离心力12,000g）、1.5ml离心管、无水乙醇、异丙醇等。

2.按瓶身标签说明在WashSolution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。

密封于室温保存。

3.按瓶身标签说明在BufferB3中加入相应量的异丙醇（异丙醇终浓度为20%），混匀后在瓶身做好标记。

4.BufferB3在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37C溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

标准纯化步骤标准纯化步骤1.将PCR反应液或酶促反应液移至一干净的1.5ml离心管中，加入3倍体积的BufferB3，充分混匀。

首次使用前请先检查是否已加入适量的异丙醇。

若反应液体积过小，可用TE或水补足至100l，然后再加入300lBufferB3。

2.将混合液全部移入吸附柱，8,000g离心30sec。

倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。

如果体系总体积大于750l，则每次使用750l，多次上柱。

将滤出液再次加入吸附柱中再次过柱，可以进一步提高DNA回收率。

3.向吸附柱中加入500lWashSolution，9,000g离心30sec。

WashSolution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。

4.重复步骤3一次。

5.将空吸附柱和收集管放入离心机，9,000g离心1min。

此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。

6.在吸附膜中央加入1540lElutionBuffer，室温静置12min，9,000g离心1min。

将所得到的DNA溶液置于-20C保存或用于后续试验。

ElutionBuffer为2.5mMTris-HCl，pH8.5，可以用TE或水（pH7.0）代替。

将ElutionBuffer预热至60C可以进一步提高得率。

如果片段4kb，在3760C温浴2分钟可以显著提高得率。

请勿使用小于15l的洗脱液进行洗脱。

常见问题解答常见问题解答1.PCR产物回收效率较低或者未回收到目的片段a.WashSolution中未加入正确量的无水乙醇。

b.提高BufferB3的相对浓度，增加DNA与吸附膜的作用时间（静置时间），在一定程度上可以提高回收率。

c.如果纯化的片段长度大于4kb或者目的片段含量较少，可将洗脱液再次加入吸附柱进行洗脱，以提高回收效率。

d.洗脱液加入位置不正确。

洗脱液应加在硅胶膜的中心部位，以完全覆盖硅胶膜的表面，达到最大的洗脱效率。

e.洗脱液不合适。

洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值7.0，pH值过低可能导致低洗脱效率。

f.洗脱时将洗脱液预热至60C后使用，有利于提高洗脱效率。

g.洗脱时间过短。

洗脱时间对回收率也有影响。

洗脱时放置1分钟可达到较好的效果。

2.回收的PCR产物进行后续酶切或者连接效率低a.若洗脱产物中含有残留的乙醇会影响酶切。

可将空柱离心后的吸附柱开盖室温晾干25分钟，有助于残留的酒精挥发完全。

b.盐份的残留。

请确保使用WashSolution冲洗两次，每次500l沿管壁加入，有助于彻底去除管壁上的盐份。

c.回收后的PCR产物在反复冻溶的情况下，会加速末端A和整个PCR产物的断裂，从而造成与T载体连接或直接酶切效率的下降。

建议回收后立即进行酶切或连接实验。

d.选择合适的PCR产物和T载体的分子数比例，有助于提高连接效率.e.请确保PCR最后72C510分钟的延伸时间，这样才有足够的PCR产物在末段带有A附加碱基，保证较高的连接效率。

3.回收的片段为什么电泳上样会漂起来？

主要原因是纯化过程中的乙醇没有去除干净。

可将离心后的吸附柱开盖室温干燥25分钟，有助于残留的酒精挥发完全。