温州医科大学研究生实验动物学考试整理Word格式.docx
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指动物体内无特定的微生物和寄生虫存在，但带有非特定的微生物和寄生虫的动物。
除了普通动物和清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件致病和对科研实验干扰大的病原。
来源于无菌动物，饲养在屏障系统或IVC系统中。
16.无菌动物（Germfreeanimals,GF）：
用现有的检测技术在动物体内外的任何部位均检不出任何活的微生物和寄生虫的动物。
无菌动物必须是生来就是无菌的。
饲养于隔离系统。
17.悉生动物（Gnotobioticanimals,GN）：
指在无菌动物体内植入一种或几种已知微生物的动物。
又称已知菌动物或已知菌丛动物。
分为单菌（Monoxenie），双菌（Dixenie），三菌（Trixenie），多菌（Polyxenie）动物。
18.人类疾病动物模型（10级）：
医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物实验对象和相关材料。
19.自发性疾病动物模型（10级）：
未经任何有意识的人工处置，在自然状况下所发生的疾病称之为自发性疾病动物模型。
20.诱发性疾病动物模型：
以物理的、化学的或生物的致病因素造成动物组织、器官或全身一定的损害，出现类似人类疾病的功能、代谢或形态结构方面的改变称之为诱发性疾病动物模型。
21.免疫缺陷动物（10级）：
由于先天性遗传突变或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。
22.转基因动物：
用实验方法将外源基因稳定地整合到动物细胞的基因组中，能稳定地表达并遗传给下一代的动物称之为转基因动物。
23.转基因动物模型：
利用转基因技术，将人类疾病基因分离出来，再转移到实验动物，获得相应疾病的动物模型。
问答题：
一.详述人员和物品进入屏障系统的移动路向及注意事项（07、08、09、10年试题，12分）
（1）人员的移动路向：
一更衣-----淋浴----二更衣-----风淋-----内准备室（清洁走廊）-----饲养室或动物实验室----亚清洁走廊（污染走廊）------一更衣-----外部。
（2）物品的移动路向：
物品-----高压灭菌（包装的消毒物品可以经传递窗、笼具泡有消毒液的渡槽）-----清洁准备室（内准备间）-----清洁物品储藏室------饲养室或动物实验室-----废物经包装处理-----亚清洁走廊-----外部。
主要注意事项：
随手关门，污物包装处理，消毒液擦洗，实验完毕后开紫外灯，规范操作等。
二.影响实验动物的主要环境因素。
1.温度：
国标：
23±
3℃；
（1）实验动物大多数属于恒温动物
（2）临界温度：
（4）温度对实验动物的影响：
①对繁殖、育成的影响②影响代谢③影响健康与抗感染能力④激发应激反应⑤对实验结果的影响。
2.湿度：
Hr：
40～70％（50±
5％最好）；
高温（30～32℃）湿度Hr高，小鼠由卵蛋白引起的过敏休克死亡率明显增高；
仙台病毒发病率增高；
3、臭气：
氨浓度国标：
<
14mg/M³
；
NH3：
41ppm可引起金鱼40％死亡；
NH3：
25～250ppm可引起大鼠鼻炎、中耳炎、支气管炎，支原体性肺炎；
NH3：
25ppm以下对人不产生危害。
4、噪声：
≦60dB（A）；
（1）对繁殖生长的影响
（2）对实验结果的影响：
金属钙化可使血检明显变化DBA心跳、呼吸、血压、明显增加（3）听源性痉挛；
5、空气溶胶：
（1）粉尘dust对动物的影响：
对皮肤、鼻粘膜、眼、消化、呼吸出现有害作用。
（2）落下菌数：
测试方法：
5～10㎡范围内，距地面1m,培养皿Φ9cm，内置8～10ml营养琼脂或血琼脂放置30分钟，37℃48小时培养。
落下菌数：
通环境：
30个/皿；
屏障环境：
3个/皿；
隔离环境：
无检出。
6、气流和风速：
①风速（m/s）～②换气次数（次/h）普通环境8~10，屏障环境15，隔离环境20～50③压力梯度：
（Pa）屏障环境,10，隔离环境100～150；
7、照明：
①照度对视网膜可造成障碍；
②对离乳率的影响③对繁殖的影响。
（1）照度（lx）①工作照度：
150～300；
②动物照度：
15～20；
（2）昼夜交替时间（h）12/12或10/14
三．实验动物设施分类。
按微生物控制程度分类：
（1）开放系统：
饲养室与外界相通，无空气净化装置。
通常为单走廊专用房舍，采用自然通风或设有排风装置，有防虫、防鼠设施，要求笼具和垫料消毒、使用无污染的饲料，人员进出有一定的防疫措施。
这类设施仅适用于普通级动物。
该系统通常分为三个区域：
前区，包括检疫室、办公室、休息室等;
控制区，包括动物饲育室、或动物实验室、清洁走廊、清洁物品储存室等;
后勤处理室，包括污染走廊、洗刷消毒室、污物处理设施等。
人员、动物和物品原则上按：
前区--控制区--后勤处理区的走向运行。
（2）屏障系统：
设有恒温、恒湿、除菌换气系统的相对封闭环境，空气洁净度达1000级，室内保持正压，有严格的微生物控制。
主要是用于SPF级动物的饲育。
有正压屏障构造、负压屏障构造（生物安全屏障系统）也有用层流架（正压/负压）或隔离器作SPF级屏障系统。
屏障系统设施，要求与外界隔离，空气经三级过滤净化后才进入屏障设施之内，除生物安全屏障系统为负压以外，通常应保持为正压，且不低于20--50Pa;
出风口设有防空气倒流装置。
屏障系统设有清洁和污染走廊，进入系统的笼具、饲料、饮水、垫料、器械等一切物品都要经过严格的消毒灭菌，人员进入要经淋浴、更衣，使用专用的服装，进入的动物要有专用包装，也经严格的消毒处理。
系统内的人员、物品和空气等采用单向固定的流通路线，有呼吸系统疾病和皮肤病的人员不能进入系统内。
（3）隔离系统：
以隔离器为主及其它附属装置组成的饲养系统，送入空气洁净度为100级。
主要设备是隔离器，分有正压和负压隔离器。
隔离器及其辅助装置共同组成的隔离系统，用于饲养无菌动物和悉生动物。
隔离器可置于开放系统内运转，则要严格控制系统内环境的温、湿度。
操作时，工作人员只能通过隔离器上的橡胶手套来进行饲养或实验。
物品是通过包装消毒后，由灭菌渡舱或传递窗传入;
动物是经由无菌剖腹产的方法进入;
进入隔离器的空气，应经高效过滤，保证隔离器内空气洁净度达100级，无菌并维持正压状态。
根据实验需要也可维持负压状态，但需要配置空气排放装置，保证空气排放符合标准。
四、杂交一代动物特点及应用
概念：
由二个不同近交杂交所生的第一代动物。
特点及应用：
1.遗传和表型一致性；
2.杂交优势；
3.遗传组成的杂合性；
4.同基因性:
BALB/cXCBA5；
两个亲本互交；
能表达所用品系性别C3HXIF1；
NZBXNZWF1。
五、人类疾病动物模型的概念、意义、分类。
（意义09年试题）
意义：
1.避免人体实验造成的危害；
2.可研究平时不易见到的疾病；
3.可提供发病率低,潜伏期和病程长的疾病动物模型；
4.克服复杂因素，增加方法学上的可比性；
5.样品收集方便，结果易于分析；
6.有利于更全面地认识疾病的本质。
分类：
1.按产生原因分：
（1）诱发性动物模型
（2）自发性动物模型（3）抗疾病动物模型（4）生物医学动物模型；
2.按模型种类分：
（1）整体动物
（2）离体器官和组织（3）细胞株（4）教学模型；
3.按系统范围分：
（1）疾病的基本病理过程动物模型
（2）各系统疾病动物模型。
六、影响动物模型的因素
1.致模因素；
2.动物：
种类，品系，年龄和体重，性别，生理状况和健康因素；
3.实验技术：
季节，昼夜变化，麻醉深度，手术技巧，实验给药，对照组；
4.环境和营养。
七、裸小鼠（免疫缺陷动物）特点（07、08、09、10年试题，10分）
先天性无胸腺，无毛；
隐性突变基因在11号染色体上；
一个基因两种表现；
已导入到不同的遗传背景；
体液免疫正常
生物遗传特点：
（1）无毛；
（2）寿命短,死亡率高；
（3）发育不良,新生鼠生长明显迟缓；
（4）繁殖能力差:
♀nu/+×
♂nu/nu；
（5）有肝脏疾病；
免疫学特征：
（1）先天性胸腺缺失；
（2）胸腺依存免疫功能（T细胞）丧失；
（3）B细胞生理功能正常,T细胞依存性B细胞功能底下；
（4）巨噬细胞活性比对照组（nu/+）高；
（5）NK细胞在弱阳性细胞中可能有T前驱细胞。
八、简述近交系动物的特性（09、10年试题）
（1）基因位点纯合性，
（2）遗传组成同源性，（3）表型一致性，（4）长期遗传稳定性，（5）遗传特征的可分辨性，（６）遗传组成的独特性（个体性），（７）敏感性，（８）近交衰退，（９）分布广泛性，（１０）背景资料和数据的完整性。
九、简述影响人体肿瘤裸鼠移植成功的因素
（1）人体肿瘤细胞本身特征
（2）
裸鼠免疫功能状态（3）裸鼠背景（4）移植部位和途经（5）激素和宿主性别（6）鼠龄（7）裸鼠的健康状况及洁净状况（8）其它因素。
十、简述小鼠在生物医学中的应用（10年试题，10分）
（1）药物研究：
药物筛选试验。
用于药物对疾病疗效筛选试验。
毒性试验和安全评价。
三致（致畸、致癌、致突变）试验。
生物药品和制剂的效价测定。
（2）病原学研究：
小鼠对多种病原体特别是病毒非常敏感，所以适用于这些疾病的发病机理、临床症状及药物疗效评价。
（3）放射学研究：
小鼠对放射线的反应与人的反应有可比性，可用来研究照射剂量、辐射效应等。
但要注意其对放射性敏感性在冬季和初夏显著升高，而在初春和夏季则降低。
（4）肿瘤学的研究：
许多小鼠品系能自发产生肿瘤。
如AKR小鼠白血病发生率可达90%，C3H小鼠乳腺癌发病率达90－97%。
这些肿瘤的发生与人体发生肿瘤机制相近。
无胸腺裸小鼠成为活的癌细胞试管。
（5）遗传病和遗传学研究：
许多小鼠品系有自发性遗传病。
由于小鼠繁殖力强，传代快，利于遗传学的研究。
（6）免疫学研究：
BALB/c小鼠免疫后的B淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合，可进行单克隆抗体的制备和研究。
有些具有免疫功能缺陷的突变系小鼠利于肿瘤植入研究，也有利于免疫机制的研究（7）计划生育研究：
小鼠繁殖力强、妊娠期短、生长快，适合各种计划生育研究和避孕药物的开发。
如日常用小鼠作抗着床、抗生育、抗早孕、抗排卵等实验。
（8）老年病学研究：
小鼠寿命短（－3年），晚期老年病多，肿瘤发病率高，其发病机理与人类疾病类似。
（9）呼吸和消化系统疾病研究：
小鼠在氢氧化氨气雾的刺激下有咳嗽反应，可用此特性研究镇咳药物的效果。
中毒性肝炎、肝硬化和胰腺炎均可在小鼠身上复制成功。
（10）内分泌疾病研究。
十一、简述大鼠在医学研究中的应用（07、08、09年试题，8分）
（1）药物学研究：
大鼠在药理学研究方面的应用极为广泛，几乎所有药物的药理研究都使用大鼠。
大鼠易诱发神经病，则测试神经病药物效力；
大鼠血压和血管阻力对药物反应敏感，则评价心血管药效；
大鼠踝关节对炎症反应敏感，则常用以筛选抗关节炎药物。
（2）行为学研究：
大鼠体形大小合适，行为表现多样，情绪反应敏感，对新环境易适应，具有探索性、易训练、对惩罚和暗示有敏感性等特性，所以在行为学和行为异常的研究中用得很多
（3）肿瘤学研究：
具有自发肿瘤的大鼠品系远较小鼠少，但容易诱发各种大鼠肿瘤，是肿瘤研究最常用的实验动物之一（4）内分泌学研究和内分泌疾病研究：
由于大鼠的垂体易摘除，便常用于研究腺体对全身生理生化功能的调节。
大鼠有相应的自发或诱发的内分泌失调的疾病模型，如糖尿病、甲状腺疾病、尿崩症、高血脂症、应激性胃溃疡等（5）传染病研究：
是研究支气管肺炎、副伤寒的重要实验动物。
是流行性出血热的自然宿主。
故应定期进行血清学检查。
不宜作慢性支气管炎模型及去痰平喘药研究。
（6）营养、代谢性疾病研究：
大鼠对营养物质缺乏敏感，可发生典型缺乏症状，是营养学研究使用最多、最早的实验动物。
常用于维生素或蛋白质缺乏及氨基酸和钙、磷代谢的研究。
（7）肝胆研究：
无胆囊，但胆总管较大，方便收集胆汁，这特殊的特点正适合肝胆功能的研究。
大鼠肝切除60-70%后，仍有再生能力，可用于肝外科实验等（8）老年学及老年病研究：
年老体衰时，心理和生理上的疾病很多（9）心血管疾病研究：
可用直接血压描记法研究降压药；
以灌流肢体血管或离体心脏研究心血管药物；
研究毒扁豆碱的升压作用。
已培育了几种高血压品系大鼠，如SHR/Oka大鼠，血压常180-200mmHg，其生育力、寿命尚可。
正常对照组WKY大鼠，血压140-150mmHg（10）环境污染与人类健康的研究：
大鼠的肺比较脆弱，空气污染、重金属污染可使大鼠很快相应的疾病症状（11）口腔医学研究：
用变异链球菌接种于大鼠口腔，然后喂给含蔗糖食物，大鼠牙齿上的珐琅质蛀损似人的龋齿，可用来研究龋齿的防治方法。
（12）放射医学研究（13）计划生育研究（14）中医中药研究
十二、简述家兔在医学生物学中的应用
1）免疫学研究：
家兔的最大用处是生产抗体，制备高效价和特异性强的免疫血清。
大多数免疫血清是采用家兔来制备的；
2）发热研究及热原试验：
家兔的体温变化灵敏，最易产生发热反应，发热反应典型、恒定。
注射某些药品和生物制品或异源蛋白也可引起发热反应。
3）眼科研究：
大眼睛，眼球体积约5－6立方厘米，重约3－4克，便于进行手术操作和观察。
可复制角膜瘢痕模型，进行眼前房内移植术等。
4）胆固醇代谢和动脉粥样硬化症的研究：
家兔是最早用于这方面研究的动物，容易制作动物模型。
兔子对外源性胆固醇吸收率达75－90%，并且高脂血症清除能力较低。
而大鼠吸收率仅40%。
兔子用高脂高胆固醇饲料饲喂二个月后，就出现了典型的高脂血症、主动脉粥样硬化斑块、冠状动脉粥样病变。
5）心血管和肺心病研究：
家兔颈神经血管和胸腔有特殊结构，是所以很适合用于急性心血管实验。
可复制心血管和肺心病的各种动物模型：
心肌梗塞、缺血性濒危心肌、心源性休克、缺血性心律紊乱、心律失常、冠心病、肺水肿等。
可用兔的离体心脏等方法研究药物对血管和心脏的作用。
6）皮肤反应试验：
可用于化妆品、芥子气、冻伤、烫伤等对皮肤局部反应的试验。
7）传染病和微生物学研究：
对许多病毒和致病菌非常敏感。
如对过敏、免疫、狂犬病、天花、脑炎、梅毒等的研究。
8）生殖生理和避孕药筛选及胚胎学的研究：
诱发排卵后，排卵时间可固定，排卵数也可从卵巢表面上鲜红色突起数加以计算，因此易于得到同期胚胎。
9）遗传性疾病和生理代谢失常的研究：
兔子的软骨发育不全、遗传性骨质疏松症、遗传性青光眼、脊柱裂、低淀粉酶血症、维生素A缺乏症、脑小症等与人类的遗传病相似。
10）口腔科学研究：
兔可作为口腔黏膜病、牙周病及整形材料毒性试验的对象。
还可用于唇裂、腭裂等口腔畸形的研究。
十三、以小鼠为例，简述显微注射技术的过程（07、08年考试题目，10分）
1）同步获得供体雌鼠和受体雌鼠。
取4-6周龄的雌鼠、腹腔注射孕马血清促性腺激素和人促绒毛膜性腺激素，与正常雄鼠交配，获供体雌鼠。
取6周龄或以上的雌鼠，与经过结扎雄鼠交配，获受体雌鼠。
2）在注射人绒毛膜促性腺激素10-13h后采集受精卵。
剖腹处置有阴道栓的雌鼠。
剪下输卵管和一小段子宫置于平衡液，在解剖镜下找出输卵管伞部，用带针头的注射器将受精卵冲出。
3）用显微注射法将纯化的外源基因导入受精卵的雄源核内。
4）将显微注射后鉴定为存活的受精卵（或培养过的存活胚胎）移植到假孕母鼠的输卵管（或子宫）内，其一部分移植卵能继续生长发育成个体。
5）鉴定子代鼠中外源基因的整合和表达。
6）转基因动物品系的建立。
用幼鼠组织或幼鼠尾巴用PCR或dotblot、southernblot等方法分析定。
十四、简述超数排卵的方法及其影响因素（07、08、09年考试题目，6分）
超数排卵：
是一种不正常的排卵，经外源激素处理的雌性动物，可以改变性周期，以致超常数的排卵，甚至可以超常数十几倍。
（1）常用激素：
PMSGHCGFSHLH。
（2）超排方法。
第一天腹腔注射PMSG。
第三或第四天腹腔注射HCG。
（3）剂量:
小鼠5~20IU兔30~60IU。
（4）影响因素:
动物,激素生物活性,发情期,气候季节。
超数排卵方法：
第一天腹腔注射PMSG，第三或第四天腹腔注射HCG
程序：
（1）于第一日中午先向小鼠腹腔内注入5一l0单位的PMSG；
（2）过48小时（第三天中午）腹腔内注入5—10单位的人hCG（注射后11—13小时后排卵）；
（3）令雌雄动物一对一的合笼交配；
动物半夜交尾，如未发生交配，两周后可再重用，但成功率下降；
（4）检查阴栓（第四日晨）；
检查阴栓可判定是否受精；
如已受精则出现阴栓。
超数排卵的意义：
采用超数排卵可大大增加每次的排卵数量；
在科研上可以在短时间内取得大量的卵和胚胎，可以满足胚胎工程研究、遗传工程研究和建立胚胎库的需要。
大大缩短了研究周期；
在生产中，可以提高优秀动物的繁殖数量，提高产量，增加经济效益。
十五、简述影响动物营养需求的因素（07、08年考试题目，10分）
1.遗传因素：
不同品种、不同品系的动物其营养需求不同。
因遗传基因的表达程度不同而影响营养需求。
近交系动物对蛋白质的需求要比封闭群动物要高。
如ODS大鼠因基因突变造成L－谷氨酸氧化酶的缺乏，而无法合成VC，饲料中必需添加VC。
2.生理状况：
动物在不同的生理状况过程中对营养需求会有所不同。
如产后发情配种的小鼠，如带仔多，营养供应不上，其受精卵会停留在输卵管而不能在子宫着床，结果是怀孕期大大地延长。
3.环境因素：
就恒温动物来说，若长期在低温下，动物必须产生较多的热能以维持体温的恒定，饲料中就要增加能量原料。
如长期在高温环境下，则动物的采食量就会下降，为了保证动物的正常的生长，就把饲料的营养素浓度提高。
4.微生物状态：
微生物在肠道中栖生，产生如水溶性VB、K及氨基酸等营养物质。
通常這些物质很少被机体再吸收利用，除非有食粪便行为再摄取。
食粪行为与动物的种类、饲料成分、饲养条件的不同而发生。
因此设计实验时就应考虑是否允许食粪行为的发生。
5.研究条件：
实验操作如外科手术或于饲料中添加测试药物时，会造成动物紧张或改变饲料的适口性，进而影响饲料的采食。
在限制性采食的实验中应调整饲料配方，增加部分养分的浓度，以补充因摄食减少而导致不足的部分。
6.营养成分的相互作用：
某些营养素摄取量增加时往往影响另外营养素的吸收和利用。
如能量和蛋白。
不同的矿物质会竞争同一吸收门户或同一运送系统，从而影响到彼此被吸收的效率。
如钙、磷、镁及VD间的关系.
十六、简述实验动物选择的基本原则
1）近似性原则；
2）差异性原则；
3）易化原则；
4）相容和匹配原则；
5）可获性原则；
6）重复性和均一性原则；
7）其它原则。
（1）选择与人的功能代谢结构和疾病特点相似的实验动物；
2）选择遗传背景明确体内微生物得到控制或模型症状显著的动物；
3）选用解剖生理特点符合实验目的要求的动物；
4）选择对实验因素最敏感的动物；
5）选择与实验目的相适应的动物。
十七、饲料的消毒
1.高温高压灭菌法：
最常用最可靠的方法，要求121℃，/cm²
15分钟以上。
会造成营养损失。
2.干热灭菌法：
置烤箱内70-80℃，6小时。
这种方法营养损失极大，消毒后饲料会变得干硬，从而适口性下降，同时花费时间，最少用。
3.射线照射灭菌法：
采用Co60-射线照射,灭菌总剂量为3－5Mrad。
这种方法营养损失最少，也最方便，有条件的话应当首选。
但太昂贵，不便推广。
4.药物熏蒸灭菌法：
用化学药品如氧化乙烯消毒剂的气雾对饲料饲料进行熏蒸消毒。
但是操作麻烦，又因饲料中会残留有害物，也不太好
十八、按微生物控制标准，简述我国实验动物的微生物等级分类。
（10年考试题目，10分）
1.普通动物（Conventionalanimals,CV）：
是在微生物学控制上要求最低的动物，要求不携带人兽共患病和动物烈性传染病的病原。
2.清洁级动物（Cleananimals,CL）：
3.无特殊病原体动物（Specificpathogenfreeanimals,SPF动物）：
除了普通动物和清洁级动物应排除的病原外，不携带主要潜在感染或条件治病和对科研实验干扰大的病原。
来源于无菌动物，饲养在屏障系统。
4.无菌动物（Germfreeanimals,GF）：
5悉生动物（Gnotobioticanimals,GN）：
指在无菌动物体内植入已知微生物的动物。
十九、鼠痘病毒的危害性
1脱脚病：
四肢，尾和头部肿胀，溃烂，坏死，甚至
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