家兔基础实验操作及注意事项总结.docx

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家兔基础实验操作及注意事项总结

家兔基础实验操作及注意事项总结

基本技能操作经验总结

（一）家兔的给药、基本手术及相关仪器的初步使用

1.家兔的捉拿

【实验方法】先轻轻打开笼门，勿使其受惊，随后手伸入笼内，从头前阻拦其跑动，一只手迅速抓住兔的颈背部的皮毛，慢慢提起家兔，然后用另一只手轻轻托住臀部，尽量使兔处在舒适、放松的状态。

【注意事项】避免抓住耳朵提拿家兔，这样不但会损伤家兔的耳朵，而且易引起家兔的紧张并激起挣扎和反抗。

抓取动物时手法不当，动作过激导致家兔惊吓，产生强烈挣扎而长时间处于激动状态，大脑皮层细胞兴奋阈值增加，肾上腺素的释放，大脑中枢电位频率增高，大脑皮层运动区过度兴奋，导致麻醉效果不佳。

2.家兔的称重与放置

【实验方法】兔笼放置在电子秤上，去皮。

将兔子脖子卡住兔笼头端的凹槽，盖上兔笼盖，使兔子呈趴伏状，记录数据。

压住兔笼盖和后座，将兔笼转移到操作台准备实验。

【注意事项】兔笼重量提前去皮；尽量避免头尾不对应；时刻注意压住兔笼盖，避免转移途中兔子挣脱。

3.耳缘静脉麻醉

【实验方法】穿刺前准备工作：

穿刺前应拔除待穿刺血管部位的兔毛，轻柔或以手指轻弹待穿刺的血管使其充血扩张，或用酒精棉球涂擦待穿刺的血管使血管扩张。

穿刺手法：

左手食指和中指夹住静脉的近端，拇指绷紧静脉的远端，无名指及小指垫在下面，右手持头皮针尽量从静脉的远端刺入。

若回抽注射器有暗红色血液流出或注射时若无阻力、无隆起现象，说明针头在血管内。

移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，将药液缓慢注入，然后拔出针头，用手压迫针眼片刻。

●注：

本实验所用麻醉药——乌拉坦用药剂量为1000mg/Kg。

【注意事项】1.进针部位宜选择在耳缘静脉远心端的血管段，若穿刺失败，可向近心端前移一段再进行穿刺；

2.可利用酒精棉球擦拭使耳缘静脉血管扩张，便于操作；

3.静脉注射必须缓慢（大概每分钟推送5ml），同时观察家兔肌肉紧张、角膜反射和对皮肤夹捏的反应，当这些活动明显减弱或消失时，应立即停止注射。

在注射麻醉药物时，可先用麻醉药物总量的三分之二，密切观察动物生命体征的变化，若已达到预计麻醉效果剩余药液可暂不注射，以避免麻醉过深抑制呼吸中枢导致动物死亡；

4.实验动物的固定

【实验方法】将动物麻醉后，仰卧位固定于手术台上，颈部伸直，口腔与气管成一直线，保持气管畅通。

用粗麻绳打类蝴蝶结固定家兔四肢，用棉麻线套住家兔上切牙固定在兔台头端，使家兔四肢和头部伸展并固定。

【注意事项】1.打结最好打利于捆缚的结，避免家兔挣脱。

2.尽量使颈部抻直，避免扭曲。

5.清理兔毛

【实验方法】使用弯头兔毛剪剪掉实验部位兔毛。

【注意事项】1.左手捏住要剪的兔毛，方便剪掉后及时清理。

注意不要将兔毛掕起，这样容易剪到皮肤和皮下神经，引起兔子的强烈挣扎。

2.尽量清理干净，并且避免兔毛乱飞，可在废物桶中加水防止兔毛乱飘。

6.组织切开

【实验方法】1．组织切开的一般原则

（1）根据实验目的要求确定手术切口的部位和大小。

如肾切除取左背部斜切口，肠切除取腹正中切口。

（2）根据不同部位的切口采用不同的执刀方法，常用的执刀方法有三种，如图1。

【注意事项】

（1）切开前，应先将切口部位的皮肤（或其他组织）拉紧，使其平坦紧张而固定。

（2）刀刃与切开的组织垂直，以一次切开为佳。

（3）组织要逐层切开，并以按皮肤纹理或各组织的纤维方向切开为佳。

图1执刀方法和组织切开方法

（4）组织的切开处应选择无重要血管及神经横贯的地方，以免将其损伤。

（5）选择切口时，应注意选择易于敷料或导管包扎和固定的部位。

避免术后动物活动时被碰撞、磨擦而脱落。

7.组织分离

【实验方法】分离目的在于充分显露深层的组织或血管，便于手术操作。

1．组织分离的一般原则

（1）根据不同部位手术的需要采用不同的分离方法。

常用的分离方法有两种：

①用刀或剪作锐性分离，用剪割的方式将组织分离。

该方法常用于致密组织，如皮肤、韧带、筋膜等的分离。

②用止血钳、手指或刀柄等将组织推开或牵拉开的钝性分离。

该法多用于皮下组织、肌肉筋膜间隙等疏松组织的分离。

（2）沿正常组织间隙分离。

这样易于分离，且出血少，视野干净、清楚。

【注意事项】

（1）肌肉的分离应顺肌纤维方向作钝性分离。

若需要横行切断分离，应在切断处上下端先夹两把血管钳，切断后结扎两断端以防止肌肉中血管出血。

（2）神经、血管的分离应顺其平行方向分离。

要求动作轻，柔，细心操作，不可避暴，切忌横向过分拉扯，以防断裂。

8.气管内插管

【实验操作】气管插管的目的主要是为了辅助呼吸、测定气道压力、通气量以及描记呼吸曲线等。

⑴气管的暴露和分离切开皮肤后，对肌肉、气管、血管和神经的分离应用止血钳进行钝性分离。

钝性分离皮下组织，暴露颈部肌肉，分开颈部正中肌群即可看到气管。

在甲状腺下1～1.5cm处，用止血钳将气管后的软组织稍加分离，在气管下穿二条较粗的结扎线，准备结扎固定气管插管之用。

⑵气管插管在甲状腺以下约1～2cm处，用手术剪将气管软骨环剪一倒“T”型切口，剪开气管口径约一半以上，用棉签向肺方向擦净气管内分泌物，然后再向肺方向插入气管插管。

用已穿好的粗线扎紧后，再在插管的侧管上打结，以防插管脱出。

【注意事项】1.切忌粗暴操作，小心勿伤及甲状腺及气管两侧后方的静脉；

2.不要在软骨环之间的气管组织切开，因此处血管较多，如仍有出血，可用温湿纱布压拨迫片刻，同时将兔台后部抬高，使兔头位置低下，以防止血液流入气管造成窒息，出血停止后再做插管；

3.插管前注意检查气管内有无内分泌物，有的话先清理气管后插管；插管后，若气管内分泌物或血液较多，可用一细塑料管从插管的侧管处将液体吸出。

4.用已穿好的粗线扎紧后，再在插管的侧管上打结，以防插管脱出；

5.气管插管的过程中应随时注意观察动物的呼吸变化。

最好隔一段时间放开被夹闭的Y型管软管，避免人为性呼衰。

9.颈总动脉的分离及插管

【实验操作】沿胸锁乳突肌前缘分离胸骨舌骨肌与胸骨甲状肌之间的结缔组织，在肌缝下找到呈粉红色较粗血管，用手指触之有搏动感，即为颈总动脉。

分离颈总动脉时应选在距甲状腺以下较远地方开始，防止将甲状腺前动脉切断，用玻璃分针轻轻分离该动脉与神经之间结缔组织，切勿损伤血管和神经。

在分离好的颈总动脉下面穿过两根结扎线，先结扎远心端，再用动脉夹夹闭血管近心端。

于远心端结扎线前用眼科剪呈45°角做V型切口，剪开血管管径的1/3～1/2。

将准备就绪的动脉导管插入血管2cm～3cm，用备用线将导管与血管牢固结扎并与远心端结扎线连接扎紧，以防导管滑脱出血管。

取下动脉夹，可见导管中有动脉回血，并随心跳而搏动。

用少许肝素将回血推回血管内，实时观察血压。

【注意事项】1.分离颈总动脉时应选在距甲状腺以下较远地方开始，防止将甲状腺前动脉切断，并且切勿损伤血管和神经。

伴行血管的一束神经包括：

迷走神经最粗且明亮；交感神经次之，光泽较暗；最细的是减压神经；

2.为了便于动脉插管，颈总动脉应尽量分离得长一些。

一般家兔4cm～5cm，豚鼠和大鼠2cm～3cm；

3.结缔组织尽量分离干净，否则插管时容易插到膜内；

4.两根结扎线可通过一根线对折穿过动脉下后剪断获得。

远心端结扎线和备用结扎线一定要结扎紧，避免出血；

5.动脉夹操作时一定要小心避免磨破动脉，最好将动脉夹深入颈总动脉下于动脉夹中段夹闭血管，以防夹闭不完全；

6.插入血管内插管尽量长，此时易于固定。

但是一定不要插到动脉夹夹闭处，因为插管和动脉夹都是硬性材料，两厢触碰易使动脉管破裂；

7.喷血时，应迅速找到出血口，并及时夹闭近心端血管，并用棉球清理创面；若还是出血不止，则考虑是否是远心端结扎线未扎紧，这时夹闭远心端；若各种措施都不起效，则可以考虑完全结扎实验侧颈总动脉；

8.若是少量出血，则可能只是毛细血管受到损伤，这是可用棉球轻轻压迫创面即可止血。

10.输尿管插管

【实验方法】下腹部剪毛，普鲁卡因局麻，在耻骨联合向上沿中线做长约4cm的切口，沿腹白线切开腹膜，暴露出膀胱，并将膀胱翻向体外，在膀胱底部找到并分离两侧输尿管，在输尿管靠近膀胱处用线结扎，略等片刻，待输尿管略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一根细塑料管，结扎，收集尿液。

【注意事项】1.家兔膀胱十分脆弱，分离时应用镊子探查，避免直接用手术刀或剪刀粗暴分离；

2.输尿管位置较深，分离和插管时需一人协助拨开肠子和拉扯膀胱，此时需注意用力大小，用力过大时膀胱会因尿液排出而迅速缩小（并不影响实验）；

3.如果可以，分离输尿管时避免损伤伴行血管，否则会大出血影响视线；

4.输尿管近膀胱处结扎后，可略等片刻，待输尿管略充盈后在剪口插管，会容易很多；

5.插管的管子剪口需有一定锐度，但锐度过高易损伤输尿管；插管时，可转动插管，使斜面向下，否则易撕裂输尿管。

11.处死

【实验方法】空气栓塞法

【注意事项】判断家兔死亡的标准可以是呼吸停止，这是可能生物电还存在波动，可能原因是心脏自律细胞还在活动，但此时心脏功能细胞其实已经停止工作，故可以判定为死亡。

12.其他注意事项

1.创面长时间开放时，可撒些生理盐水或用生理盐水浸润的纱布覆盖，以防组织风干；

2.切开皮肤前，可少量多点注射局麻，避免家兔因损伤皮神经而剧烈反抗。

13.整体动物体征的观察及应对

1.兔耳耷拉，表示家兔饮水不足，这时需及时给家兔补充水分，否则会影响实验结果；

2.家兔呼吸急促并伴有鸣声，表示家兔呼吸系统有问题，气管插管时应注意清理气管，并在不需要呼吸频率数据的时段打开Y型管软管，使呼吸通畅。

时刻注意呼吸频率的变化。

3.当血压降低时，可能是失血过多，此时家兔可能已经休克。