微生物实验室培养练习题学生Word文档下载推荐.docx

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平板3菌落数

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3．人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值，为了增加发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，并对其降解纤维素能力进行了研究，请回答下列问题：

（1）在样品稀释和涂布平板步骤中，下列选项不需要的是　　（填序号）

①酒精灯②培养皿③显微镜④无菌水

（2）在涂布平板时，滴加到培养基表面的菌悬液量不宜过多的原因是　　

（3）向试管内分装含琼脂的培养基时，若试管口粘附有培养基，需要用酒精棉球擦净的原因是　　

（4）刚果红可以与纤维素形成红色复合物，但并不与纤维素降解产物纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，研究人员在刚果红培养基平板上，筛到了几株有透明降解圈的菌落（见图1），图中降解圈大小与纤维素酶的　　有关，图中降解纤维素能力最强的菌株是　　（填图中序号）

（5）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株J1和J4，在不同温度和pH条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见图2，推测菌株　　更适合用于人工瘤胃发酵，理由是　　

4．回答下列关于微生物和酶的问题．

高温淀粉酶在大规模工业生产中有很大的实用性．研究者从热泉中筛选了高效产生高温淀粉酶的嗜热菌，其筛选过程如图所示．

（1）①过程称为　　，②过程是为了　　．

（2）Ⅰ号培养基称为﹣﹣　　（按功能分）；

该培养基中除了加入淀粉外，还需加入另一种重要的营养成分　　．A．琼脂B．葡萄糖C．硝酸铵D．碳酸氢钠

（3）一般对配制的培养基采用高压灭菌，其中“高压”是为了　　．

在高温淀粉酶运用到工业生产前，需对该酶的最佳温度范围进行测定．图中的曲线①表示酶在各种温度下酶活性相对最高酶活性的百分比．将酶在不同温度下保温足够长的时间，再在酶活性最高的温度下测其残余酶活性，由此得到的数据为酶的热稳定性数据，即图中的曲线②．

（4）根据图中的数据，判断该酶使用的最佳温度范围是　　．

A．40℃一50℃B．50℃一60℃C．60℃一70℃D．70℃﹣80℃

（5）据图判断下列叙述错误的是　　．

A．该酶只能在最佳温度范围内测出活性

B．曲线②35℃数据点是在80℃时测得的

C．曲线①表明80℃是该酶活性最高的温度

D．曲线②表明该酶的热稳定性在70℃之后急剧下降．

5．多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用，是土壤、河水中常见的污染物之一．如图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲的菌株Q的主要步骤．请回答：

（1）步骤①→③的培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；

另一方面能　　．

（2）步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中，在做第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线，原因是　　．采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是　　

（3）接种环通过灼烧来灭菌，完成步骤④中划线操作，共需灼烧接种环　　次

（4）为了获得分解多环芳烃菲能力更强的菌株，研究人员又对菌种Q进行了诱变处理，得到突变株K．为了进一步鉴定菌株K并比较两种菌株降解多环芳烃菲的能力，设计了下列实验，请补全实验步骤：

①取9只锥形瓶均分成三组，编号A、B、C

②向A、B、C三组锥形瓶中加入　　的培养液．

③向A、B、C三组培养液中分别加入　　．

④28℃恒温培养3天后，测定　　．

6．【生物﹣﹣选修1生物技术实践专题】

从自然界微生物中筛选某菌种的一般步骤是：

采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定．富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其群落的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法．

（1）接种前要对培养基进行　　处理．在整个微生物的分离和培养过程中，一定要注意在　　条件下进行．

（2）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化．如培养纤维素分解菌的菌样应从　　环境中采集．

（3）从土壤中筛选纤维素分解菌需要配制　　培养基，该培养基中需要加入纤维素粉作为唯一的　　．

（4）经过梯度稀释后，要将样品均匀涂布在用于鉴别纤维素分解菌的培养基上，在该培养基中需要加入的特殊染料是　　，当形成菌落以后可以根据菌落周围是否产生　　来筛选纤维素分解菌．某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是　　．

7．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验．实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数．请回答与此实验相关的问题．

（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了氮源和　　．除此之外，培养基还必须含有的基本成分是　　和　　．

（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是　　．

（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于　　中培养，培养的温度设定在37℃．要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种　　作为对照进行实验．

（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有　　种细菌．一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越　　．

（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐　　细菌，这种培养基（按功能分）被称为　　．

8．在农业用地中发现一种广泛使用的除草剂（含氮有机化合物）在土壤中不易降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按下面程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度一定，该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行　　处理．

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，上述培养皿中培养基的特点是：

固体培养基且　　．若需要调节培养基pH，应该在各种成分都溶化后且分装　　（填“前”或“后，’）进行．

（3）在划线前，接种环应该在酒精灯火焰上　　．培养后发现，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是　　或有氧条件抑制了这些细菌的生长．

（4）在固体培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是　　，有透明带菌落利用的氮源主要是　　，据此可筛选出目的菌．

（5）A细菌和B细菌都能降解该除草剂，研究发现以每克菌体计算，A细菌降解该除草剂的能力比B细菌要强，对此现象合理的假设是　　．

9．烧伤病人容易感染绿脓杆菌，引起化脓性感染，比阿培南、美罗培南、头抱菌素和碳青霉烯类抗生素都是非常经典的抗绿脓杆菌的药物．临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验．实验时，从病人身上获取少量样本，按照一定的实验步骤操作，以确定该病人体内的绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性．

（1）获取绿脓杆菌单菌落：

配制适于绿脓杆菌生长的培养基，培养基中的营养成分一般含有　　、　　、水和无机盐，调节pH至7，灭菌处理，待培养基冷却至50℃时，在　　附近倒平板．经过选择培养、鉴别等步骤获得单菌落．

（2）检测绿脓杆菌对不同抗生素的敏感性：

取该单菌落适当稀释，用　　法接种于固体培养基表面，使其均匀生长，布满平板．将分别含等剂量的比阿培南、美罗培南、头抱菌素和碳青霉烯类抗生素的同大小的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，适宜条件培养一段时间，结果是含不同抗生素的滤纸片周围均出现透明圈，这说明绿脓杆菌对上述抗生素　　；

含头抱菌素的滤纸片周围的透明圈比含美罗培南的小，这说明

　　；

含比阿培南、碳青霉烯类的滤纸片周围的透明圈也比含美罗培南的小，且比阿培南透明圈中出现了一个菌落，请推测此菌落产生的可能原因：

一是　　，二是　　．

（3）根据上述实验结果，为达到抗绿脓杆菌的目的，对于该患者来说最好应选用抗生素　　．

10．生物﹣选修1：

生物技术实践

金黄色葡萄球菌是一种具有高度耐盐性的微生物，可引起人类肺炎、肠炎等疾病．金黄色葡萄球菌在血平板（培养基中添加适量血液）上生长时，可破坏菌落周围的红细胞，使其褪色．下图为定性检测鲜牛奶中是否存在金黄色葡萄球菌的操作流程，请回答相关问题．

（1）按细胞结构分类，金黄色葡萄球菌属于　　生物，从培养过程分析，金黄色葡萄球菌可进行　　呼吸．

（2）7.5%NaCl肉汤培养基可为微生物提供的营养成分包括　　，用7.5%NaCl肉汤培养基进行选择培养的主要目的是　　．

（3）操作中在血平板上的接种方法是　　，接种操作前后需要对接种工具进行　　灭菌．

（4）在制备血平板时需将pH调节至　　（“微酸性”或“微碱性”）后灭菌，待培养基　　后，再加入适量血液．按培养基功能分类，血平板属于　　培养基．

（5）经多次规范操作、重复实验，血平板上均出现　　的菌落，初步证明鲜牛奶中存在金黄色葡萄球菌，但鲜牛奶供应商仍认为此菌并非鲜牛奶所携带，因此，要对本操作进行完善，完善的方案是　　．

（二）土壤中分解尿素的细菌的分离

11．人和哺乳动物的尿中含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染．土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素作为其生长的氮源．现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：

（1）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有　　、　　和　　．

（2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养．在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在　　旁进行操作．接种后的培养皿　　于37℃的　　中培养．

（3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于　　培养基．若培养基中存在有分解尿素的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素被分解产生的　　使pH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源．变色区域越大，表明该菌株利用尿素的能力　　．

（4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素为氮源的培养基中菌落数　　．

A．多B．少C．相等D．几乎为零．

12．已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶，脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产．回答有关问题：

（1）显微观察时，微生物A菌体中的油脂通常可用　　染色．微生物A产生的油脂不易挥发，可选用　　（填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”）从菌体中提取．

（2）为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以　　为碳源的固体培养基进行培养．

（3）若要测定培养液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用　　直接计数，若要测定其活菌数量，可选用　　法进行计数．

（4）为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35℃、40℃、45℃温度下降解10g油脂所需酶量依次为4mg、1mg、6mg，则上述三个温度中，　　℃条件下该酶活力最小，为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕　　℃设计后续实验．

13．回答下列关于微生物的问题．

尿素是一种重要的农业氮肥，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们尝试从土壤中筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．他们设计的实验步骤如图所示，如表是培养基成分．

KH2PO4

1.4g

Na2HPO4

2.1g

MgSO4•7H2O

0.2g

葡萄糖

10g

尿素[CO（NH2）2]

1g

琼脂

15g

将上述物质溶解后，用自来水定容到1000mL

（1）此培养基按物理状态属于　　培养基．

（2）培养基中加入尿素的作用是　　（多选）

A．筛选目的菌B．作为氮源C．作为碳源D．杀死杂菌

（3）图中稀释步骤的目的是　　．

（4）此实验操作过程中，接种前应对培养基进行　　灭菌，灭菌温度为　　；

接种时应无菌操作，这两个步骤的目的是为了使培养基接种培养后，培养基中　　（多选）

A．无杂菌B．只有目的菌C．无菌D．有土壤中的固氮菌．

14．一种广泛使用的除草剂（含氮有机物）在土壤中不易被降解，长期使用可污染土壤．为修复被该除草剂污染的土壤，可按图甲程序选育能降解该除草剂的细菌（已知该除草剂在水中溶解度低，含一定量该除草剂的培养基不透明）．

（1）制备土壤浸出液时，为避免菌体浓度过高，需将浸出液进行稀释处理．现有一升土壤浸出液，用无菌吸管吸取1mL液样至盛有9mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度．各取0.1mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原土壤浸出液样中菌体数为　　．

（2）要从长期使用该除草剂的土壤中分离目的菌，从用途方面来看，上述培养皿中培养基的特点是　　．

（3）接种技术的核心是　　．在划线接种时，连续划线的目的是将聚集的菌种逐步　　，培养时，只有很少菌落出现，大部分细菌在此培养基上不能生长的主要原因是　　或有氧条件抑制了这些细菌的生长．

（4）在培养基上形成的菌落中，无透明带菌落利用的氮源主要是　　，有透明带菌落利用的氮源主要是　　，据此可筛选出目的菌．实验结果如图乙显示的A～E五种菌株中，　　是最理想菌株．

（5）科研人员用放射线处理该细菌获得两个突变株A和B，然后对突变株A和B进行实验，结果如下表所示：

接种的菌种

一般培养基

实验处理及结果

A

不生长

添加营养物质甲，能生长

B

添加营养物质乙，能生长

A+B

能生长

不添加营养物质甲、乙就能生长

突变株A不能在一般培养基上生长的原因是　　．突变株A和B混合在一起接种于一般培养基中能生长的最可能原因是　　．

15．尿素是一种高浓度氮肥且长期施用没有不良影响，但尿素只有通过土壤中某些细菌的分解作用，才能被植物吸收利用．某同学要分离出土壤中能分解尿素的细菌，并尝试进行计数，培养基配方如下：

K2HPO4

NaCl

H2O

尿素

酚红

0.12g

15mL

0.025g

2.0g

0.25mg

0.5g

（1）分解尿素的细菌都能合成　　，该种细菌在生态平衡中起到什么作用？

　　．写出细菌分解尿素的方程式　　．

（2）根据培养基的成分判断，该同学能否分离出土壤中分解尿素的细菌？

　　（能/不能），原因是　　．

（3）分离得到分解尿素的细菌后，如果要扩大培养，则应选择培养基进行培养．培养一段时间后，使用对微生物细胞进行计数．计数过程中，下列哪种行为会影响计数的准确性　　

A．计数时直接从静置培养的试管底部取培养液进行计数

B．如果方格内微生物细胞数量多于300个，培养液先稀释后再计数

C．如果微生物细胞有粘连，要数出团块中的每一个细胞

D．压在方格线上的细胞只计左线和上线上的细胞数

（4）为了提高尿素肥效，可以将分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”．为了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用　　技术．

16．土壤是“微生物的天然培养基”，下面是有关土壤中分解尿素的细菌分离和计数的实验过程，请根据图回答相关问题：

（1）能分解尿素的细菌代谢类型为　　，应从富含有机质的土壤表层取土样．

（2）为分离出土壤中分解尿素的细菌，应该用　　的培养基进行分离，并加入　　指示剂进行鉴别．

（3）若取土样5g，应加入　　ml的无菌水配制成稀释10倍土壤溶液．因土壤中细菌密度很大，需要不断加以稀释，配制成如图所示的不同浓度的土壤溶液．取样稀释前，一定要　　以减少误差．将103﹣107倍的稀释液分别吸取0.1mL加入到固体培养基上，用　　将菌液铺平．这种接种方法称为　　．

（4）将接种的培养皿放置在37℃恒温培养箱中培养24h～48h，观察并统计具有　　（现象）的菌落数，结果如下表，其中　　倍的稀释比较合适．

稀释倍数

103

104

105

106

107

菌落数（个）

500

367

248

36

18

17．如表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关间题：

蒸馏水

10.0g

1.0g

定容至1000mL

（1）该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为　　培养基．该培养基会抑制其它种类微生物生长，其原因是该培养基　　．

（2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成分是　　，接种时应采用　　法，该方法接种培养后的菌落，不可能是图中的　　（单选）．

（3）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入　　指示剂，培养该菌后，如果指示剂变　　，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素．

（4）某同学用0.1mL稀释液在稀释倍数为106的平板中测得菌落数的平均值为163，则每mL样品中的细菌数是　　．

18．【生物﹣选修1生物技术实践】

某研究小组设计了以下实验探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．实验步骤如图所示，培养基成分如表所示．请分析回答问题：

15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL

（1）培养基中加入尿素的目的是筛选　　，这种培养基属于　　培养基．

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的　　和　　，实验需要振荡培养，原因是　　．

（3）转为固体培养时，常采用　　的方法接种，获得　　后继续筛选．

（4）下列材料或用具中：

①培养细菌用的培养基与培养皿；

②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；

③实验操作者的双手．需要灭菌的是　　；

需要消毒的是　　．（填序号）

（5）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有　　（填序号）．

①由于土样不同　②由于培养基污染③由于操作失误　④没有设置对照

（6）在该实验中，可以通过检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解，所依据的原理是　　．所用方法是在培养基中加入　　，若尿素被分解，则培养基变成红色．

19．尿素是一种重要的农业肥料，但若不经细菌的分解，就不能更好地被植物利用．生活在土壤中的微生物种类和数量繁多，同学们试图探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，设计了以下实验，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌），培养基成分如表所示，实验步骤如图所示，请分析回答问题：

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到100mL

（1）此培养基能否用于植物组织培养？

为什么？

　　．

（2）如图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图．则获得图A效果的接种方法是　　，图B效果的接种方法是　　，一同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌落连成一片，最可能的原因是　　（答出一条即可）．

（3）“目的菌”生长所需的氮源来自培养基中的　　，其同化作用类型是　　．

（4）培养基中加入尿素的目的是筛选到　　，这种培养基从功能上属于　　培养基．

20．2011年，荷兰皇家航空公司宣布，从9月份起，启用以生物柴油（即俗称的“地沟油”）为燃料的客机执飞阿姆斯特丹至巴黎的航班，以减少碳排放．科学家发现，在微生物M（单细胞）产生的脂肪酶作用下，可以将地沟油提取的植物油与甲醇反应能够合成生物柴油．

（1）用培养基培养微生物时，培养基中应有　　、　　、　　和　　等营养，同时还必须满足微生物生长对　　、　　、　　的要求．在筛选产脂肪酶的微生物M时，应用　　培养基，可以在培养基中添加　　作为唯一碳源．

（2）培养基灭菌采用的最适方法是　　法．

（3）图示是采用纯化微生物M培养的两种接种方法接种后培养的效果图，过程一的接种方法是　　，过程二的接种方法是　　，此方法计数的微生物M的数目　　（＞、=、＜）实际活菌数，接种后应注意培皿基要　　放置．

（三）分解纤维素的微生物的分离

21．[生物﹣﹣选修l生物技术实践]

下列是对土壤微生物开展探究活动的三个案例，请在相应的空白处作答．

（1）案例l：

探究落叶在土壤微生物的作用下是否发生腐烂（分解）．

设计思路：

组别

对照组

实验组

处理

情况

不做处理的带落叶的土壤

处理过的带落叶的土壤

将等量的带落叶的土壤，用带有编号的相同的塑料袋分别包扎好，并埋在5cm深的土壤中

对实验组土壤应该进行　　处理，尽可能排除　　的作用．

（2）案例Ⅱ：

探究土壤微生物对淀粉的分解作用．

实验步骤：

①将取自农田的土壤制成土壤浸出液，放在烧杯中静置一段时间．

②另取两只烧杯，编号为A、B，放入等量的淀粉糊．在A烧杯中加入30mL土壤浸出液，B烧杯中加入　　．

③在室温条件下放置7天后，从A烧杯中取20mL溶液，分别加入A1和A2两支试管各10mL；

从B烧杯中取20mL溶液，分别加入B1和B2两支试管各10mL．

④在A1和B1中加入碘液；

在A2和B2中加入　　，并进行　　处理．

⑤观察各试管的　　，记录实验结果．

（3）案例Ⅲ：

探究土壤微生物中是否含有分解纤维素的细菌的实验过程中，应将土壤浸出液接种在以　　为惟一碳源的培养基上，并用　　（试剂）加以鉴别．

22．某些农作物秸秆富含纤维素，纤维素经过水解可以形成葡萄糖，葡萄糖再经过发酵可以生产酒精．如图是利用农作物秸秆生产酒精的大致流程，请回答下列问题：

（1）农作物秸秆含有丰富的纤维素，纤维素要经过纤维素分解菌分解成葡萄糖．人们常常是从土壤中分离纤维素分解菌．分离纤维素分解菌常用的方法是　　．其实验流程是；

土壤取样→选择培养→　　→将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上→挑选产生　　的菌落．