大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定Word下载.docx

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主要仪器、试剂:

电热套、烧杯、20%硫酸、薄层硅胶G、0.5%CMC-Na。

实验操作步骤:

酸水解：

取大黄10g,粉碎，加20%硫酸水溶液100ml，水浴上加热3-4小时,抽滤,滤饼水洗后自然干燥。

铺薄层硅胶G板:

薄层硅胶G:

0.5%CMC-Na（1:

3）

实验注意事项:

加热温度不要太高。

溶液保持微沸，防止药渣炭化。

不断搅拌。

后记:

实验一大黄中游离蒽醌的提取与分离和鉴定

2

1.掌握从大黄中提取和分离游离蒽醌的方法。

2.掌握蒽醌类的色谱鉴别方法。

大黄滤饼

电热套、圆底烧瓶、冷凝管、乙醚、硅胶薄层板、石油醚、乙酸乙酯

总羟基蒽醌苷元的提取：

取干燥滤饼，放入100ml圆底烧瓶中，加入乙醚50ml,回流提取3－4小时，得乙醚提取液。

乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。

薄层板为硅胶G-CMC-Na,展开剂为石油醚（60-90℃）－乙酸乙酯（７：

３），直立展开。

加热回流时电热套电压小于50v。

取石油醚（60-90℃）7ml,乙酸乙酯3ml,混合均匀。

。

控制点样量，注意点样斑点位置。

仔细观察斑点、溶剂前沿移动距离。

结论：

在可见光下可看到4个斑点，Rf最大的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物，其余3个斑点依Rf由大到小分别为大黄素（橙色斑点），芦荟大黄素（黄色斑点），大黄酸（黄色斑点

实验二芦丁的提取及鉴定

8学时

新校区F楼6楼天然药物化学实验室

学习和掌握用碱提取—酸沉淀提取黄酮苷的原理和方法。

槐米中有黄酮苷—芸香苷（芦丁）,芸香苷（芦丁）是由槲皮素与芸香糖连接而成的二糖苷，能溶于热水。

本试验采用碱提取—酸沉淀提取芸香苷。

槐米

电热套、烧杯、石灰水、PH试纸、抽滤瓶。

1.提取：

槐花米—粉碎—碱水提取—加酸沉淀-—放置—粗品芦丁—精制—芦丁（纯品）。

2.粉碎:

称槐米40克，粉碎。

3.碱提:

在1000ml烧杯中加入500ml蒸馏水，加热煮沸后，将槐米粗粉投入，继续直火煮沸2-3分钟，在搅拌下，加入石灰乳，调PH8-9，加热保持微沸30分钟，趁热过滤收集，滤渣加160ml蒸馏水,加入石灰乳，调PH8-9，同上操作再提一次，滤液合并，滤渣弃去。

4.酸沉:

将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，放6小时以上，析出沉淀。

①碱提时加入石灰乳调PH8-9，不要太高。

②溶液保持微沸。

③酸化时将滤液在60-70℃，小心加浓HCL，调PH3-4，不要太低。

实验二芦丁的提取及鉴定（精制）

新校区F楼6楼天然药物化学实验室

粗品芦丁的精制

粗品芦丁能溶于热水，去除不溶性杂质，最后用甲醇重结晶。

粗品芦丁

电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇

精制：

粗品芦丁放在1000ml烧杯中，加500ml蒸馏水，加热煮沸，至全部溶解，趁热抽滤，滤液放冷，即析出黄色沉淀，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，干燥。

用甲醇重结晶，得精品芦丁。

（1）用甲醇重结晶时加热回流时电热套电压小于50v。

（2）粗品芦丁全部溶解，趁热抽滤。

（3）重结晶时甲醇的用量应适当，用量过多，则结晶不易析出；

用量过少，又会带入较多的杂质。

实验二芦丁的提取及鉴定

3

（1）芦丁的水解，鉴定；

（2）掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷元和糖的鉴定方法。

，

精品芦丁

电热套、圆底烧瓶、冷凝管、甲醇、正丁醇、醋酸、葡萄糖、鼠李糖、盐酸、镁粉、醋酸镁、醋酸铅、氧氯化锆、三氯化铝

1.水解：

取1克芦丁加1%H2SO4100ml与烧杯中，加热微沸，30分钟，开始为澄清，逐渐析出黄色针状结晶，待沉淀完全后，抽滤，收集沉淀，水解母液留作糖的纸层析鉴定。

2.芦丁、槲皮素的鉴定：

（1）糖的检出——圆形滤纸层析

取水解芦丁的滤液20ml，加Ba（OH）2细粉中和至pH7，滤除生成的BaSO4白色沉淀，滤液在水浴上小心浓缩近干（约1ml）注意防止炭化，加甲醇5ml,作为检识糖的样品溶液。

展开剂：

正丁醇-醋酸-水（4-1-5上层）。

对照品：

葡萄糖、鼠李糖（各2mg，分别溶于2ml甲醇中）

展开方式：

径向展开

显色剂：

苯胺邻苯二甲酸盐试剂（或，邻苯甲酸苯胺），喷雾后，105℃加热3～5分钟，有糖处显棕色或棕红色斑点。

（2）化学方法鉴别黄酮类成分

a.盐酸-镁粉反应

b.醋酸镁反应

c.醋酸铅沉淀反应

d.氧氯化锆

e.点滴反应

①糖的检出——圆形滤纸层析点样量不要太多。

实验三氧化苦参碱的提取分离与纯制

实验编号：

实验日期：

实验地点：

任课教师：

学时数：

2+8

实验目的：

掌握渗漉法和离子交换法提取生物碱的方法和原理

实验原理：

1.生物碱溶于酸水

2.阳离子交换树脂提取、分离生物碱

实验对象：

苦参

主要仪器、试剂：

渗漉筒、烧杯、玻璃棒

阳离子交换树脂柱、阳离子交换树脂、pH试纸、培养皿

0.5%盐酸、碘化铋钾、蒸馏水

主要操作步骤：

总碱的提取：

（1）酸水提取：

称取250g风干粉碎的苦参中加入适量0.5%的盐酸液，使其浸没药料，充分湿润，放置一小时。

将如上酸水浸泡好的药材及溶液装入渗漉筒，待全部加完，继续补充加入0.5%的盐酸液，浸过药面，放置过夜（此步骤在实验前一天提前完成）。

继续加入0.5%的盐酸液或蒸馏水，（当渗漉液的酸性过大，改加蒸馏水渗漉，将渗漉液的pH控制在3-4之间）以1mL/min的流速进行渗漉，收集渗漉液约3750Ml,到渗漉液生物碱反应微弱为止。

（2）交换：

将上述渗漉液pH控制在3-4之间，上柱交换，流速自快至慢，流出液要经常以碘化铋钾检查，如发现有未被交换的生物碱流下时，可调整流速继续进行交换，待渗漉液全部通过树脂后，把树脂倒入烧杯中，用蒸馏水洗涤数次，除去非阳离子杂质，然后滤干，放入大培养皿中自然干燥。

实验注意事项：

装渗漉筒时，药材应压实，尽赶空气，渗漉筒切勿走干。

当渗漉液的酸性过大，改加蒸馏水渗漉，将渗漉液的pH控制在3-4之间。

如发现有未被交换的生物碱流下时，可调整流速继续进行交换。

离子交换树脂柱切勿走干。

后记：

（教学体会、学生对教学内容的反应等）

实验二氧化苦参碱的提取分离与纯制

8

学习索氏提取器的使用方法

1.生物碱碱化后，溶于氯仿

2.索氏提取器氯仿连续提取将生物碱从阳离子交换树脂上洗脱下来

交换了生物碱的阳离子交换树脂

索氏提取器、烧杯、水浴锅

阳离子交换树脂、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸

浓氨水、氯仿、丙酮

（1）总碱洗脱：

将晾干后的树脂放入烧杯中，加浓氨水20mL，充分搅匀，使湿润度合适，（树脂充分膨胀，但又无不吸收的过剩水份溢出）盖好，静置20分钟后，装入索氏提取器中，用300mL氯仿在水浴上回流洗脱，至提尽生物碱为止。

回收氯仿，尽力抽干。

残剩物用2-3倍量丙酮溶解，尽快出现结晶，放置一定时间，过滤，得氧化苦参碱粗晶，（实际是总碱）用丙酮重结晶一次，得精品。

加浓氨水20mL，充分搅匀，使湿润度合适，使树脂充分膨胀，但又无不吸收的过剩水份溢出。

索氏提取器使用时要小心，易碎裂。

学习使用Al2O3薄层、柱层析法分离鉴定生物碱的方法

生物碱可以采用Al2O3薄层、柱层析法分离

总碱粗品，Al2O3薄层，Al2O3柱层析

层析柱、棉花、点滴板、试管、玻璃板、毛细管、

Al2O3、碘化铋钾、圆底烧瓶、冷凝管、漏斗、滤纸

甲醇、氯仿、丙酮

氧化苦参碱的分离与纯制：

取一根洗净干燥的1：

45的层离柱，在下端塞一点棉花，倒入一些氯仿，使棉花湿润，并放出氯仿液，以赶尽气泡后，缓缓加入30g氧化铝，以氯仿作媒介湿法装柱，最后加入拌有200mg氧化苦参碱精品，薄层检查两个点的少量氧化铝，再放入一点棉花，先用30mL氯仿，后用氯仿:

甲醇（99：

1）的混合溶剂洗脱，流速控制1mL/min，流分每10mL收集一份，收集中要经常以点滴板做生物碱显色反应的检查，薄层检识后，相同流分合并，回收溶剂至干，得氧化苦参碱部分用少量丙酮溶解，放置析晶，所得纯品为氧化苦参碱，测mp，并进行薄层检识。

苦参生物碱的薄层层析：

样品:

氧化苦参碱标准品，粗品，柱层析中任一流份

展开剂：

氯仿：

甲醇19：

1或19.5：

0.5

显色剂：

改良碘化铋钾

湿法装柱要尽量赶尽气泡

氯仿:

1）的混合溶剂洗脱，流速控制1mL/min，不能过快。

流分每10mL收集一份，薄层检识后，相同流分再合并。