基因工程限时练习Word文档格式.docx
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回答问题：
（1）将目的基因导入动物受精卵内需要构建基因表达载体，基因表达载体除了含有目的基因外，还必须有______等。
常用将目的基因与表达载体导入动物的受精卵中。
为检测目的基因是否表达成功，可采用
方法，若有杂交带出现，表明目的基因已表达成功。
（2）在体外培养受精卵时，为了维持，需向培养液中添加抗生素。
受精卵发育到囊胚时期开始分化，该时期的属于胚胎干细胞。
该细胞在形态上表现为；
在功能上具有。
（3）将早期胚胎移植到代孕雌性体内时，为使代孕个体与供体雌性生殖器官的生理变化相同，此前需要代孕个体做处理。
4、（2016全国Ⅲ）图（a）中的三个DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoRI、Sau3AI的切点是唯一的）。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）经BamHI酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是。
（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。
这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的是____________，不能表达的原因是。
（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和
__________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。
5、（2016新课标全国Ⅰ）（15分）
某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活（Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因）。
有人将此质粒载体用BamHI酶切后，与用BamHI酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。
被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。
回答下列问题：
（1）质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有______________
（答出两点即可）。
而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。
（2）如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含有环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是
；
并且______________和______________的细胞也是不能区分的，其原因是。
在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含有_____________的固体培养基。
（3）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于_____________。
6、（2016海南）（15分）
基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：
（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即______和从_______
中分离。
（2）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是______
。
（3）在基因表达载体中，启动子是______聚合酶识别并结合的部位。
若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是______。
（4）将目的基因通过基因枪法导入植物细胞时，常用的携带目的基因的金属颗粒有_____和颗粒。
7、（2016江苏）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。
请回答下列问题：
（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。
为了扩增重组质粒，需将其转入处于______________态的大肠杆菌。
（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加__________，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________。
（3）若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶（填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。
（4）若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得种大小不同的DNA片段。
8、（2016天津）人血清白蛋白（HSA）具有重要的医用价值，只能从血浆中制备。
下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。
（1）为获取HSA基因，首先需采集人的血液，提取_____________合成总cDNA，然后以cDNA为模板，采用PCR技术扩增HSA基因。
下图中箭头箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出标出另一条引物的位置及扩增方向。
（2）启动子通常具有物种及组织特异性，构建在水稻胚乳细胞内特异表达rHSA的载体，需要选择的启动子是_____________（填写字母，单选）。
A.人血细胞启动子B.水稻胚乳细胞启动子
C.大肠杆菌启动子D.农杆菌启动子
（3）利用农杆菌转化水稻受体细胞的过程中，需添加酚类物质，其目的是
__________________________。
（4）人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。
与途径II相比，选择途径I获取rHSA的优势是__________________________
（5）为证明rHSA具有医用价值，须确认rHSA与____________的生物学功能一致。
9、（2015新课标Ⅱ）（15分）
已知生物体内用一种蛋白质（P），该蛋白质是一种转运蛋白.由305个氨基酸组成。
如果将p分子中158位的丝氨酸变成亮氨酸，240位的谷氨酰胺变成苯丙氨酸.改变后的蛋白质（P1）不但保留P的功能，而且具有酶的催化活性。
（1）从上述资料可知，若要改变蛋白质的功能，可以考虑对蛋白质进行改造。
（2）以P基因序列为基础，获得P1基因的途径有修饰基因或合成基因。
所获得的基因表达时是遵循中心法则的，中心法则的全部内容包括的复制；
以及遗传信息在不同分子之间的流动，即：
。
（3）蛋白质工程也被称为第二代基因工程，其基本途径是从预期蛋白质功能出发，通过和，进而确定相对应的脱氧核苷酸序列，据此获得基因，再经表达、纯化获得蛋白质，之后还需要对蛋白质的生物进行鉴定。
10、（2014海南）下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。
请据图回答：
⑴获得A有两条途径：
一是以A的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；
二是根据目标蛋白质的序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的序列，再通过化学方法合成所需基因。
⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有、
、4种脱氧核苷三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。
⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为。
⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是。
11、（2014新课标Ⅱ）（15分）
植物甲具有极强的耐旱性，其耐旱性与某个基因有关。
若从该植物中获得该耐旱基因，并将其转移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。
（1）理论上，基因组文库含有生物的__________基因；
而cDNA文库中含有生物的____________基因。
（2）若要从植物甲中获得耐旱基因，可首先建立该植物的基因组文库，再从中____________出所需的耐旱基因。
（3）将耐旱基因导入农杆菌，并通过农杆菌转化法将其导入植物_________的体细胞中，经过一系列的过程得到再生植株。
要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的，如果检测结果呈阳性，再在田间试验中检测植株的是否得到提高。
（4）假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为3:
1，则可推测该耐旱基因整合到了（填“同源染色体的一条上”或“同源染色体的两条上”）。
12、（2015福建）GDNF是一种神经营养因子。
对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。
研究人员构建了含GDNF基因的表达载体（如图1所示），并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。
请回答：
（1）在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中，使用胰蛋白酶的目的是。
（2）构建含GDNF基因的表达载体时，需选择图1中的限制酶进行酶切。
（3）经酶切后的载体和GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有三种：
单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、GDNF基因与载体反向连接（如图1所示）。
为鉴定这3种连接方式，选择HpaI酶和BamHI酶对筛选的载体进行双酶切，并对酶切后的DNA片段进行电泳分析，结果如图2所示。
图中第泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。
（4）将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测GDNF基因是否成功表达，可用相应的与提取的蛋白质杂交。
当培养的神经干细胞达到一定的密度时，需进行培养以得到更多数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。
13、（2012新课标）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
（1）限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有和。
（2）质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：
AATTC……G
G……CTTAA
为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是。
（3）按其来源不同，基因工程找那个所使用的DNA连接酶有两类，即
和。
（4）反转录作用的模板是，产物是。
若要在体外获得大量反转录产物，常采用技术。
（5）基因工程中除质粒外，和也可作为运载体。
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是。
14、在遗传病及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析，PCR技术能快速扩增DNA片段，在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝，有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。
据图回答相关问题。
（1）在相应的横线上写出引物Ⅱ，并在复性这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。
（2）在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。
（3）若将作为原料的四种脱氧核苷酸用
32P标记，请分析循环一次后生成的DNA分子的
特点：
，循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为___________。
（4）PCR技术利用了______原理。
利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的。
15、为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注．我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系．
（1）获得耐盐基因后，可通过___扩增目的基因．构建重组DNA分子所用的限制性核酸内切酶作用于图中的___处，DNA连接酶作用于___处．（填“a”或“b”）
（2）将重组DNA分子导入水稻受体细胞常用的方法有__法和___
（3）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的作探针进行分子杂交检测，又要用方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性．
（4）若将该转基因植株的花药在高盐碱的培养基上作离体培养，则获得的再生植株群体中耐盐型植株大约占%．
（5）利用基因工程技术培育耐盐水稻新品系，相比传统的杂交育种方法，其优点主要表现为．
16、阅读下列资料：
资料甲：
某种细菌体内有抗虫基因，该基因能指导抗虫毒蛋白的合成．我国科学家成功地将该抗虫基因导入棉花细胞中，培育出了抗虫效果好的棉花新品种．
资料乙：
研究表明，抗H蛋白单克隆抗体能抑制过量表达H蛋白的乳腺癌细胞的生长，科学家利用小鼠制备出了抗H蛋白的单克隆抗体．
（1）资料甲中，获取抗虫基因时可使用EcoRI，其原因是含抗虫基因的DNA片段中含有。
向棉花细胞导入抗虫基因时，我国科学家采用了法．抗虫基因导入棉花细胞后，为确定棉花植株是否具有抗虫特性以及抗性的程度如何，需要做实验进行个体水平的鉴定．
（2）资料乙中，选择H蛋白作为单克隆抗体的作用靶点，是因为H蛋白在成年个体的正常组织细胞中（填“低表达”或“高表达”）．将H蛋白注射到小鼠体内，从该小鼠的脾脏中获得相应的B淋巴细胞，将其与骨髓瘤细胞进行融合，细胞融合利用的原理是．与植物原生质体融合过程相比，该融合过程特有的诱导方法是．在杂交瘤细胞的体外培养过程中，培养液中是否需要添加血清（填“需要”或“不需要”）；
培养箱中充入5%
CO2的主要作用是．为避免培养过程中代谢产物对杂交瘤细胞的毒害，常采取的措施是．
基因工程限时练答案
1、
（1）537bp、790bp、661bp
（2）2
PCR
（3）BamHI抗生素B抗生素A
（4）不一定因为目的基因和抗生素B抗性基因拼接处不一定出现GGATCC
2、
（1）PCRClaⅠ和DNA连接A和D
（2）基因表达载体（或“重组质粒”）四环素
（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞植物组织培养
（4）抗原-抗体杂交
3、
（1）启动子、终止子和标记基因显微注射（2分〕抗原一抗体杂交（2分）
（2）无菌环境（2分）内细胞团（1分）体积小、细胞核大，核仁明显
（3分，一点1分）发育的全能性（1分）
（3）同期发情（1分）
4、
（1）Sau3AⅠ（2分）两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端（2分）
（2）甲和丙（2分）甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录（3分）
（3）E．coliDNA连接酶（2分）T4DNA连接酶（2分）T4DNA连接酶（2分）
5、（15分）
（1）具有限制酶的切割位点；
能自我复制；
具有标记基因（答出两点即可）
（2）二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长
含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒（或答含有重组质粒）
二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长
四环素
（3）受体细胞
6、（15分）
（1）人工合成生物材料（每空2分，共4分，其他合理答案可酌情给分）
（2）cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因（5分，其他合理答案可酌情给分）
（3）RNA（2分）大肠杆菌（或细菌）（2分）
（4）金粉钨粉（每空1分，共2分）
7、
（1）BclI和HindⅢDNA连接感受
（2）四环素引物甲和引物丙
（3）
都不能（4）7
8、
（1）总RNA（或mRNA）
（2）B
（3）吸引农杆菌移向水稻受体细胞，有利于目的基因成功转化
（4）水稻是真核生物，具有膜系统，能对初始rHSA多肽进行高效加工
（5）HSA
9、（15分）
（1）氨基酸序列（或结构）（1分，其他合理答案也给）
（2）
（每空2分，共4分）DNA和RNA（或遗传物质）（2分）
DNA→RNA、RNA→DNA、RNA→蛋白质（或转录、逆转录、翻译）（3分）
（3）设计蛋白质结构推测氨基酸序列（每空2分，共4分）
功能（1分）
10、
（1）逆转录DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷酸
（2）引物模板DNA
（3）基因表达载体（或重组DNA）
（4）提高受体细胞的转化率（或使之处于感受态，有利于其吸收重组DNA分子）
11、
（1）全部部分
（2）筛选
（3）乙表达产物耐旱性
（4）同源染色体的一条上
12、（10分）
（1）使细胞分散开
（2）XhoI
（4）抗体传代
13、
（1）黏性末端平末端
（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同
（3）大肠杆菌DNA连接酶T4DNA连接酶
（4）mRNA（或RNA）cDNA（或DNA）PCR
（5）噬菌体动植物病毒
（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
14、
（1）
（2）
（3）每个DNA分子各有一条链含
32
P
1/2
n
（4）DNA双链复制核苷酸序列
15、
（1）PCR技术
a
a
（2）农杆菌转化
基因枪法（或花粉管通道法）
（3）耐盐基因（目的基因）
一定浓度盐水浇灌（移栽到盐碱地中）
（4）100
（5）能根据人类的需要，定向改造遗传物质，获得优良遗传性状
16、
（1）EcoRI能够识别的特定的核苷酸序列
花粉管通道
抗虫的接种
（2）低表达
细胞膜具有流动性
用灭活的病毒处理
需要
维持培养液（适宜）的pH
定期更换培养液（基）
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