《临床微生物学检验》题目40单选2多选6简答4论述文档格式.docx
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C.外斐反应
D.立克次体凝集试验
6.血清流行病学调查时，若需要长期保存血清应置于：
D
A.－4℃冰箱
B.－8℃冰箱
C.－10℃冰箱
D.－20℃冰箱
E.以上都不对
7.用于血清流行病学调查的静脉采血量一般为：
E
A.1ml以下
B.1～2ml
C.2～3ml
D.3～5ml
E.5ml以上
8.能长期或永久保存血清的温度条件是：
A.4℃
B.-10℃
C.-20℃
D.-40℃
E.-70℃
9.志贺菌属中，下列哪一项不正确：
A.在普通琼脂平板上生长形成中等大小、半透明的光滑型菌落
B.K抗原为型特异型抗原
C.O抗原为群特异性抗原
D.分解葡萄糖，产酸不产气
E.分解乳糖，产酸产气
10.宋内氏志贺氏菌有两个变异相，急性患者分离的菌株一般是：
A.Ⅰ相
B.Ⅱ相
C.Ⅰ相或Ⅱ相
D.Ⅰ相和Ⅱ相
11.有关细菌培养基的描述，哪项是不正确的：
B
A.按物理状态可分为液体、固体和半固体三类
B.SS培养基属于鉴别培养基
C.血琼脂平板属于营养培养基
D.蛋白胨水为常用的基础培养基
E.庖肉培养基属于厌氧培养基
12.新从病人分离的肠道杆菌菌落是：
A.R型
B.S型
C.R或S型
D.R和S型
13.接种立克次体的鸡胚应置于下列哪一个温度的孵卵箱中孵育：
A.32～35℃
B.37～38℃
C.38～39℃
D.39～40℃
E.40～41℃
14.用吉姆尼茨染色法染色立克次体时加石炭酸复红染色液一般需要：
A.1分钟
B.2分钟
C.5分钟
D.10分钟
E.15分钟
15.最早采用的检测方法为：
A.分离培养
B.直接涂片镜检
C.血清学试验
D.动物试验
E.电镜检查
16.下列哪种细菌的最适生长温度为25℃：
A.肠炎沙门菌
B.空肠弯曲菌
C.假结核耶尔森菌
D.O157：
H7大肠杆菌
E.宋内志贺菌
17.常用琼脂扩散试验的琼脂浓度为：
A.0.3～0.5%
B.1～2%
C.3～4%
D.5～6%
E.7～8%
18.宋内志贺菌：
A.快速发酵乳糖
B.为B群
C.包括10型
D.培养中常出现扁平的粗糙型菌落
E.为A群
19.下列哪一项是痢疾志贺菌的特性：
A.可产生志贺毒素
B.只有1型
C.迟缓发酵乳糖
D.有15个型
E.培养中常出现扁平的粗糙型菌落
20.测定HIV感染的最简便方法是下列哪一个：
A.测定HIV抗体
B.分离HIV病毒
C.测定HIV抗原
D.测定HIV核酸
E.HIV基因测序
21.庆大霉素培养基适用于培养何种细菌：
A.鼠疫杆菌
B.布鲁氏菌
C.霍乱弧菌
D.白喉杆菌
E.奈瑟氏菌
22.HBV的抗原成分中哪一种与病毒的中和性作用有关：
A.HBvAg
B.HBsAg
C.HBcAg
D.HBeAg
E.HBuAg
23.甲型肝炎实验室诊断方法主要依赖于检测患者血清中的下列哪种成分：
A.抗HAV的IgA
B.抗HAV的IgG
C.抗HAV的IgM
D.抗HAV的IgD
E.抗HAV的IgE
24.沙门菌属在普通平板上的菌落特点为：
A.中等大小，无色半透明
B.针尖状小菌落，不透明
C.中等大小，粘液型
D.针尖状小菌落，粘液型
E.扁平粗糙型
25.立克次体病原学检查，脏器组织和节肢动物可做切片检查，切法要求越薄越好，一般不超过：
A.3～4微米
B.7～8微米
C.10～15微米
D.20～25微米
E.30～40微米
26.做补体结合试验前血清加热灭活以破坏它所含有的补体，通常羊血清用下列哪一个温度灭活：
A.48℃
B.58℃
C.68℃
D.78℃
E.88℃
27.在CFT反应中为了查Ag，常常降低反应温度，称为冷CFT，冷CFT反应温度通常是：
A.37℃
B.18℃
C.24℃
D.30℃
E.4℃
28.当进行抗球蛋白试验查不完Ab时，其中一个重要试剂是第二Ab，在抗球蛋白试验中第二抗体是：
A.双价抗体
B.单价抗体
C.IgE抗体
D.半抗体
E.IgD抗体
29.在CFT反应中有5种成份：
Ag、被检血清、补体、溶血素和SRBC，CFT反应中补体的作用是：
A.特异性结合
B.指示剂
C.抑制剂
D.中和作用
E.非特异性结合
30.在进行免疫血清学检查时进行Ag-Ab反应，进行此反应有许多影响因素，一般Ag-Ab反应中无电解质时：
A.敏感性下降
B.不反应
C.敏感性上升
D.反应正常
E.提高特异性
31.某菌属的一个血清群只有1个血清型，诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清，这一菌属为：
A
A.志贺氏菌
B.艾希氏菌
C.沙门氏菌
D.大肠杆菌
E.耶尔森氏菌
32.某菌属的一个血清群只有1个血清型，诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清，这一菌属分为几个血清群：
B
A.1
B.4
C.30
D.18
E.20
33.某菌属的一个血清群只有1个血清型，诊断时需同时含有Ⅰ相和Ⅱ相抗血清，所述血清群为第几群：
A.A群
B.B群
C.C群
D.D群
34.有关放射免疫测定，哪种说法是不正确的：
A.放射性强度常用毫居里（mCi）或微居里（μCi）表示
B.广泛应用于蛋白质、酶的测定
C.广泛应用于半抗原和药物的测定
D.其特点是特异性强，但敏感性低
E.可能存在的放射性污染为其缺点之一
35.Sereny试验是测试细菌：
A.产生志贺样毒素的能力
B.产生肠毒素的能力
C.侵袭力
D.产生内毒素的能力
E.粘附能力
36.军团菌培养时，BCYE-α琼脂与BCYE琼脂成分不同之处在于前者含有：
A.苏氨酸
B.酮戊二酸
C.头孢羟唑
D.多粘菌素
E.茴香霉素
37.鲎试验用于何种物质的测定：
A.外毒素
B.类毒素
C.内毒素
D.神经毒素
E.肠毒素
38.可用于扩增未知序列的PCR方法是：
A.对称PCR
B.反向PCR
C.RT-PCR
D.不对称PCR
E.嵌套PCR
39.把外源质粒导入细菌中的方法称为：
A.转导
B.转化
C.转染
D.转入
E.克隆
40.从有正常菌群存在的部位所采取的标本应接种在哪种培养基中分离培养病原菌：
A.增菌培养基
B.营养培养基
C.选择鉴别培养基
D.基础培养基
E.特殊培养基
二、多选题
1.可从粪便标本中分离的病毒有：
ACDE
A.甲型肝炎病毒
B.麻疹病毒
C.脊髓灰质炎病毒
D.人类轮状病毒
E.ECHO病毒
2.血清学诊断法，正确的是：
ABCD
A.伤寒—肥达反应
B.风湿病—抗“O”试验
C.斑疹伤寒—外斐反应
D.梅毒—瓦色曼试验
E.莱姆病—IgA抗体检测
三、简答题
1.什么是PCR技术，典型的PCR技术分几个步骤？
答：
PCR技术全称聚合酶链式反应（PolymeraseChainReacti-on）技术，是一种扩增、复制小分子核酸片段的分子生物学技术。
典型的PCR技术分为预变性，变性，退火，延伸，最后延伸5个步骤。
2.什么是ELISA技术，依据原理不同ELISA技术一般可分为几类？
ELISA技术全称为酶联免疫吸附技术。
依据原理不同ELISA技术可分为双抗体夹心法、双抗原夹心法、间接法、竞争法和捕获包被法。
3.常用的药物敏感性测试（AST）技术有哪些？
纸片扩散法（K-B法）、E-Test法、琼脂稀释法、肉汤稀释法（仅列出要点）。
4.细菌培养基按照其用途不同可分为哪五类？
基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧培养基（仅列出要点）。
5.霍乱弧菌在碱性蛋白胨水中培养形成菌膜的原因是什么？
霍乱弧菌为好氧、动力活泼菌，繁殖迅速，故在气液面形成菌膜（仅列出要点）。
6.核酸探针杂交技术有哪几种？
共分为两种，分别为DNA印迹杂交（Southernblot）与RNA印迹杂交（Northernblot）（仅列出要点）。
三、论述题
1.在食源性疾病暴发疫情的现场处置过程中，针对细菌性病原，如何进行样本采集与分离鉴定？
采集粪便用于细菌检测，最好是在病人使用抗菌药物之前，采集新鲜粪便。
既可以使用灭菌棉拭子直接从消化道下端采集，也可以蘸取病人排泄物样本。
采集的粪便样品一般有两种处理办法：
（1）立即投入到相应致病菌增菌液中进行培养增菌，如用于霍乱增菌的APW和用于检测EHEC的mEC增菌肉汤中。
（2）将采集的粪便拭子插入到Cary-Blair运送培养基中送至相关实验室进行检测。
在进行分离鉴定时：
（1）针对霍乱等弧菌，可将粪便拭子样本投入碱胨水（APW）中增菌6-8小时后用四号琼脂、庆大霉素琼脂或TCBS琼脂划线分离培养用于检测霍乱弧菌。
而继续增菌16-18小时，接种麦康凯琼脂划线分离培养，可用以检测嗜水气单胞菌与类志贺邻单胞菌、副溶血弧菌等。
（2）针对肠杆菌，可将粪便拭子投入SBG/SF/SC增菌液中增菌16-18小时后用沙门科玛嘉平板划线分离检测沙门氏菌;
可将粪便拭子投入mEC肉汤中增菌16-18小时后用O157免疫磁珠富集/科玛嘉平板划线分离检测EHECO157。
还可直接将粪便拭子转种麦康凯/SS培养基37度培养16-18小时检测志贺菌与大肠杆菌。
对于可疑大肠埃希氏菌，可用多重PCR的方法检测EA/ET/EI/EP/EH五种致泻大肠杆菌。
（3）针对弯曲菌，可将粪便拭子转种与CCDA或skirrow绵羊血平板，37度微需氧环境下培养24-48小时检测空肠、结肠弯曲菌等。
在整个分离培养过程中获得的可疑菌落也可以根据实际情况使用API、Vitek等系统生化鉴定方法进行鉴定与报告。
（4）在应急检测中，也可以使用PCR技术进行致病菌的核酸检测。
2.PCR技术近年来在传染性病原的快速诊断领域中得到越来越广泛的应用，请概述PCR技术的原理，反应的基本成分，基本步骤及操作注意事项。
PCR技术的原理是：
双链DNA在高温条件下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝，当温度降低后又可以复性成为双链。
因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
典型PCR反应的基本成分为：
特异性引物，热稳定DNA聚合酶/缓冲液（包含Mg离子），4种dNTPs，模板、灭菌去离子水。
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板DNA的变性：
模板DNA经加热至94-98℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板DNA与引物的退火（复性）：
模板DNA经加热变性成单链后，温度降至40-55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：
DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
PCR操作注意事项：
1.严格操作，避免交叉污染与气溶胶污染；
2.确保引物、试剂与扩增模板质量与配比；
3.产物电泳小心处理EB染料，防止污染和对人体造成危害。
3.请解释伤寒诊断中肥达氏反应O抗体与H抗体的诊断意义。
肥达反应是诊断伤寒副伤寒的辅助诊断。
其结果的解释必须结合临床变现和病程,病史,以及地区流行病学情况。
机体患伤寒、副伤寒，一般于发病后1—2周内血液中出现特异性抗体并且随着病程延长而效价渐升，此时即可为阳性，第4周可达峰值，以后又逐渐降低。
一般以“O”凝集效价在1:
80或以上和“H”在1:
160或以上为阳性。
抗体主要是IgM，出现较早；
H抗体主要是IgG，出现较晚。
根据此特点，肥达试验结果有如下诊断价值：
二者均超过正常值，患伤寒的可能性大。
二者均在正常值内，患伤寒的可能性小。
H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应。
O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染。
一般间隔1—2周复查，若抗体效价比前次结果增高2—4倍，则具有诊断价值。
4.霍乱是我国传染病防治法规定的甲类传染病，请列举霍乱弧菌实验室检测的方法及步骤，包括采样、增菌、分离培养、生化/血清学鉴定等环节。
霍乱检测的采样主要对象是病人呕吐物，粪便与环境水样。
对于粪便与呕吐物，可直接分离培养或用碱性蛋白胨水（APW）37度增菌6小时（必要时可二次增菌）后进行检测；
对于环境水样，可用10×
APW进行增菌。
增菌处理结束后可用接种环挑取表面增菌液划线分离于四号琼脂/庆大霉素琼脂/TCBS琼脂37度培养16-18小时后观察是否有可疑菌落生长（四号琼脂上为无色半透明黑心菌落，庆大霉素琼脂为无色半透明菌落，TCBS琼脂上为黄色菌落）。
挑取可疑菌落进行氧化酶/拉丝试验，氧化酶阳性/拉丝试验阳性菌落可初步判定为霍乱弧菌，可将其转种于营养平板培养后进行系统生化鉴定。
鉴定为霍乱弧菌的菌株还需进一步进行O1/O139群、小川/稻叶血清分型。
有条件的话还可以使用PCR/荧光定量PCR的方法检测其是否产CTX肠毒素。
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