葡萄糖杂质检查及葡萄糖注射液分析实验报告.docx

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葡萄糖杂质检查及葡萄糖注射液分析实验报告

葡萄糖杂质检查及葡萄糖注射液分析实验报告--------------－---－-----－--－－--－-－

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实验报告　葡萄糖的杂志检验名字：

学号:

１1４5039　2０１4年３月28日

检品名称：

葡萄糖　　　批号：

　　　规格:

_＿

一、目的要求

1．掌握药物的一般杂质检查原理与实验方法。

2.　掌握杂质限度试验的概念及计算方法。

３.熟悉一般杂质检查项目与意义。

二、主要仪器与药品

5０mＬ纳氏比色管、坩埚、鼓风干燥箱、马弗炉、药物天平、葡萄糖、氯化钠原料药等。

三、原理：

　葡萄糖是用淀粉以无机酸水解或在酶催化下经过水解得稀葡萄糖液,再经脱色、浓结晶制得。

1．国内生产方法有以下几种:

⑴酸水解法：

以无机酸将淀粉水解为葡萄糖。

⑵双酶水解法:

以生物酶为催化剂将淀粉水解为葡萄糖。

⑶酸酶水解法:

以盐酸为液化剂,糖化酶为催化剂，将淀粉水解为葡萄糖。

根据葡萄糖生产工艺特点，应进行氯化物、重金属、砷盐等一般杂质检查，进行蛋白质、可溶性淀粉等特殊杂质检查。

四、实验方法

1.酸度　取本品2.0g,加水２0ｍL溶解后，加酚酞指示液3滴与氢氧化钠滴定液（0．02mol/Ｌ）0.２０mL,应显粉红色。

2.氯化物取本品0.6g，加水溶解使成2５ｍL,再加稀硝酸10ｍＬ；溶液如不澄清,应滤过;置5０mL纳氏比色管中，加水使成约4０mL,摇匀,即得供试溶液。

另取标准氯化钠溶液6.0mL，置５0ｍL纳氏比色管中,加稀硝酸１0mL,加水使成4０ｍL，摇匀,即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0mL,用水稀释，使成５０mL，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上,从比色管上方向下观察、比较（附录A）。

供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0．01％）。

3.　硫酸盐　取本品2.0g,加水溶解使成约40mＬ；溶液如不澄清，应滤过；置50mL纳氏比色管中,加稀盐酸2mL，摇匀,即得供试溶液。

另取标准硫酸钾溶液2.0ｍL,置50ｍL纳氏比色管中,加水使成约4０ｍＬ，加稀盐酸2ｍL,摇匀,即得对照溶液。

于供试溶液与对照溶液中，分别加入25%氯化钡溶液５mＬ，用水稀释至50mL,充分摇匀，放置10分钟,同置黑色背景上，从比色管上方向下观察、比较（附录B）。

供试溶液所显浑浊度不得较对照液更浓（0.0１%）。

４.　亚硫酸盐与可溶性淀粉取本品１.0g，加水10mL溶解后,加碘试液１滴,应即显黄色。

5.干燥失重取本品,在105℃干燥至恒重，减失重量不得过9．５%（附录C）。

6.炽灼残渣不得过0.1%（附录D）。

7.蛋白质取本品１.0g,加水10ｍL溶解后，加磺基水杨酸溶液（１→5）3mL，不得发生沉淀。

8．铁盐取本品２．0ｇ,加水20mL溶解后，加硝酸３滴,缓缓煮沸5分钟,放冷，加水稀释使成45ｍL,加硫氰酸铵溶液（30→１00）3ｍL,摇匀,如显色,与标准铁溶液２.0mL用同一方法制成的对照液比较,不得更深（0.00１%）。

９.重金属取25ｍL纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液（ｐH3.5）2ｍL后，加水稀释成２5mＬ。

取本品4.０g，置乙管中,加水适量溶解后,加醋酸盐缓冲液（pH3．5）２ｍL,加水使成25mL;若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管颜色一致。

再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各２mL,摇匀,放置2分钟，同置白纸上,自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较,不得更深（附录Ｅ），含重金属不得过百万分之五。

五、实验结果

1.酸度

原理:

检品中酸性杂质被碱中和,过量的碱使酚酞显粉红色。

实验现象:

显粉红色。

　见图一。

结论:

符合规定。

2.氯化物检查

原理:

Cl－+Ａg+ＨNＯ3　　　　　AgCl↓（白色）

实验现象:

样品管浑浊度浅于标准管。

见图二。

结论:

符合规定（﹤0.01%）。

3.硫酸盐

原理：

SO4 2-  十Ba2+  —→ BaＳ0４↓

实验现象:

样品管浑浊度浅于标准管。

见图三。

结论:

符合规定（﹤0．01％）。

4.亚硫酸盐与可溶性淀粉

原理:

黄色为碘试液本身的颜色,证明无亚硫酸盐与可溶性淀粉存在。

当有亚硫酸盐与可溶性淀粉存在时,淀粉遇碘遍蓝色，亚硫酸盐与碘发生氧化还原反应生成碘离子，变为无色。

实验现象:

溶液显黄色。

见图四。

结论：

符合规定。

5.干燥失重

原理:

干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，根据所减失的重量和取样量计算供试品干燥失重的百分率。

实验现象：

干燥失重８.0%

结论:

符合规定（﹤９．5％）。

6.炽灼残渣

实验现象：

ｍ0=20.0014gm1=22．7435g　m2=2２.7410ｇ

残渣重=（m1－m２）/（m1-m０）*1０0%＝0．09％　

结论:

符合规定（﹤0.１％）

7.蛋白质

实验现象：

没有发生沉淀。

见图五。

结论:

符合规定。

8.铁盐

原理：

Fe3＋＋6SCN- —→  ［Ｆe（ＳCN）6］3-    红色

实验现象:

样品管颜色浅于标准管。

见图六。

结论:

符合规定。

9.重金属

原理：

硫代乙酰胺在弱酸性（pＨ约3.5）溶液中水解,产生硫化氢,可与重金属离子结合生成有色硫化物的均匀沉淀，可与对照标准液同法处理比较。

实验现象:

样品管颜色浅于标准管。

见图七。

结论：

符合规定。

六、结果分析

图一　葡萄糖酸度　　　　　　　　　图二葡萄糖氯化物

注：

葡萄糖中酸性杂质被碱中和，　　　　　注:

左为供试管，右为标准管

　　碱使酚酞显粉红色　　　　　左管浊度浅于右管

图三葡萄糖硫酸盐　　　　　　　　　　　　图四　亚硫酸盐与可溶性淀粉

注:

左管为标准管,右管为供试管　　　注:

溶液显黄色

左管浊度深于右管

图五　葡萄糖蛋白质实验　　　　图六　葡萄糖铁盐实验

　注:

葡糖糖水溶液与磺基水杨酸　　　注：

上管为标准管,下管为供试管

　溶液不产生沉淀　　　　　上管溶液颜色深于下管

图七葡萄糖重金属实验

注：

左管为标准管，右管为供试管

左管颜色深于右管

七、讨论

1.观察实验结果时，比色方法一般是将两管同置于白色背景上，从侧面观察；比浊方法是将两管同置于黑色或白色背景上,自上而下地观察。

2.精密称定,选用的是精确度为千分之一的称量天平。

3.铁盐试验中，由于缓缓煮沸叫麻烦，可在温度80。

C水中水浴约五分钟,实验结果也十分明显。

4.酸度实验中,氢氧化钠溶液可添加至0．４mL，若还不显粉色，可再滴加氢氧化钠溶液。

实验报告　葡萄糖注射液分析　名字：

开德美　　学号:

１１4503920１4年3月28日

检品名称：

葡萄糖注射液　　　　批号:

　　　　　　　规格：

一、目的要求

1.掌握pＨ值测定原理和ｐH计的正确操作。

2．掌握比旋度的概念、求算方法和旋光法测定旋光性物质含量的原理与计算。

３．熟悉紫外法检查杂质的原理与方法。

4．了解注射液杂质检查的一般项目。

二、主要仪器与药品

WZZ－1自动指示旋光仪、pH酸度计、PＨ试纸、纳氏比色管、紫外分光光度仪、10％葡萄糖注射液。

三、原理

本品为无水葡萄糖的灭菌水溶液。

含葡萄糖（C6H１２O6·H2O）应为标示量的95.0%~105．0%。

［鉴别]取本品，缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。

原理：

5-羟甲基糠醛

原理:

葡萄糖注射液在高温加热灭菌时，易分解产生5－羟甲基糠醛：

利用５-羟甲基糠醛在28４nm的波长处有吸收，而葡萄糖无吸收,将样品配制成一定浓度的溶液，在28４ｎｍ的波长处测定，规定吸收度不得大于０.３2来控制５-羟甲基糠醛的量。

[含量测定]

旋光法（原理:

　葡萄糖分子中含不对称碳原子，具有旋光性，在一定条件下，其水溶液的比旋度[α]tD为+52.5°～+53.0°，根据旋光度α与浓度C的比例关系可进行含量测定：

式中Ｌ为液层厚度（dm）,C为溶液的百分浓度（g/ｍL，按干燥品或无水物计算）。

所以：

四、实验方法

1.鉴别取本品,缓缓滴入温热的碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜的红色沉淀。

　［检查]pH值应为3.2~５.5。

2.精密量取本品适量（约相当于葡萄糖１.０ｇ），置100mL量瓶中，加水稀释至刻度,摇匀，在２84nｍ的波长处测定,吸收度不得大于0.32。

３．重金属　取本品3０mｌ（约相当于葡萄糖3g）,必要时,蒸发至约２0mL,放冷，加醋酸盐缓冲液（ｐH３.5）２mＬ与水适量使成25mL,置２5mL纳氏比色管中。

另取标准铅溶液1ｍl与醋酸盐缓冲液（ｐH3.5）2mL后，加水稀释成２５mL,置另一2５mL纳氏比色管中。

若供试液带颜色,可在标准管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与样品管颜色一致;再在两管中分别加硫代乙酰胺试液各２mＬ，摇匀,放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，样品管所显颜色与标准管比较,不得更深）。

按葡萄糖含量计算，含重金属不得过百万分之五。

4.含量测定精密量取本品1０0ml（约相当于葡萄糖1０ｇ）,置1００mL量瓶中,加氨试液0.2ｍL

（1０%或１0%以下规格的本品可直接取样测定）,用水稀释至刻度，摇匀,静置１０分钟,测定旋光度。

用读数至0.01°并经过检定的旋光计，将测定管（长度为1ｄｍ）用供试液体冲洗数次,缓缓注入供试液体适量（注意勿使发生气泡），置于旋光计内检测读数,记录旋光度，同法读取旋光度３次,取3次的平均值作为样品的旋光度。

与2．0852相乘，即得100mL供试液中含有Ｃ6H12O6·H２O的重量（g）。

测定前用水校正零点，测定后再用水核对零点,若零点变动，应重测。

五、实验结果

1.鉴别

原理：

实验现象：

生成红色沉淀。

见图一。

结论:

符合规定。

2.检查

实验现象：

pH为

结论：

符合规定。

（３.２～５.5）

3.吸光度

实验现象:

吸光度为0.14２

结论：

符合规定（<0.32）

4.　重金属

实验现象:

样品管颜色浅于标准管。

见图二。

结论：

符合规定。

4.含量测定

实验现象:

旋光度为5．35,100mＬ供试液中含有C６H１2O6·H２O的重量（g）为１１.１6ｇ。

结论：

符合规定。

六、结果分析

图一鉴别实验　　　　　　　　　　　　　图二葡萄糖注射液重金属实验

注:

葡萄糖注射液与碱性酒石酸铜溶液反应　　　　注：

左为样品管，右为标准管,

　成红色,pH约为4.８。

　　　　　　　　　左管颜色浅于右管。

七、讨论

1.pH值测定时，每次更换标准缓冲液或供试液前，应用纯化水充分洗涤电极,然后将水吸尽，也可用所换的标准缓冲液或供试液洗涤。

配制标准缓冲液与溶解供试品的水，应是新沸过的冷蒸馏水,其pＨ值应为5.５～7．０。

2.旋光仪接通电源后需预热5~20分钟。

每次测定前后应用溶剂作空白校正。

配制溶液及测定时，均应调节温度至２0℃±0．5℃（除另有规定外）。

供试溶液应澄清,如显浑浊或含有混悬的小粒，应预先滤过，并弃去初滤液。

旋光管装样时应注意光路中不应有气泡，使用后应立即用水洗净晾干,切勿用刷子刷，也不能用高温烘烤。

3、用旋光度法测定葡萄糖的含量时,要加氨试液，是加速变旋作用，促进达到平衡，否则测得的旋光度数据不准。