MSC检定规程模板版药典Word格式.docx
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第5代细胞
1鉴别试验
1.1细胞形态
检定标准：
在倒置显微镜下观察，细胞应贴壁生长，呈长梭形。
1.2STR图谱鉴别
应表达人的16个等位基因，为单一细胞来源。
1.3流式细胞仪检测细胞表面标记物
按照BD公司的人间充质干细胞分析试剂盒（BD货号562245）说明进行。
CD73、CD90、CD105≥95%；
CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR≤2%。
1.4种属间细胞污染检查（PCR法）
应为人源细胞，无种属间交叉污染。
1.5染色体核型分析
参考正常中国人体细胞的G显带带型标准，染色体数量应为46XX或者46XY，染色体结构应无缺失、重复、倒位、易位。
2细菌、真菌检查
取细胞培养上清液样品,参照《中华人民共和国药典》2021年版无菌检查法（通则1101）进行检查，应为阴性。
3分支杆菌检查
取至少107个活细胞样品用培养上清制备细胞裂解物,参照《中华人民共和国药典》2021年版无菌检查法（通则1101）进行检查，应为阴性。
4支原体检查
4.1培养法
取细胞培养上清液样品,参照《中华人民共和国药典》2021年版（通则3301）进行检查，应为阴性。
4.2DNA荧光染色
5细胞内、外病毒因子检查
5.1细胞形态观察及血吸附试验
细胞接种于细胞培养瓶中，参照《中华人民共和国药典》2021年版第三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程进行，细胞持续培养2周逐日镜检，细胞形态正常，无病变，血吸附试验阴性。
5.2体外不同指示细胞接种培养法检测病毒因子
细胞接种于细胞培养瓶中，按照体外不同指示细胞接种培养法（中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程）进行。
细胞形态正常，血吸附试验阴性，血凝试验阴性。
5.3动物体内接种法
5.3.1乳鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于出生24小时内的乳鼠腹腔和脑内，按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后乳鼠应至少有80%健存。
5.3.2小鼠脑内及腹腔接种
取细胞悬液注射于小鼠腹腔和脑内，按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，21天后小鼠应至少有80%健存。
5.3.3豚鼠腹腔接种
取细胞悬液注射于豚鼠腹腔，按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，42天后豚鼠应健存，解剖无结核病变。
5.4鸡胚接种检查
取细胞悬液注射于5～7日鸡胚卵黄囊，按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应至少80%存活。
取细胞悬液注射于9~11日龄鸡胚尿囊腔，按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应至少80%存活，尿囊液血凝试验应为阴性。
5.5特殊人源病毒检查
5.5.1HIV检查
按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应为阴性。
5.5.2HBV检查
5.5.3HCV检查
5.5.4HCMV检查
5.5.5EBV检查
5.5.6HPV检查
5.5.7HHV检查
5.6牛源病毒检查
5.7猪细小病毒检查
5.8逆转录病毒检查
参照中国药典2021版三部附录逆转录酶活性检查法，应为阴性。
6免疫学反应检测
6.1淋巴细胞增殖抑制试验
按照淋巴细胞增殖抑制试验法检测，应具有抑制淋巴细胞增殖的能力。
6.2特定淋巴细胞亚群检测
按照特定淋巴细胞亚群检测法检测淋巴细胞Th1\Th17增殖抑制率和Treg增殖促进率。
6.3淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验
按照淋巴细胞分泌TNF-α抑制试验法检测，应具有抑制淋巴细胞分泌TNF-α能力。
7诱导分化能力检查
7.1成骨分化
细胞在体外成骨诱导培养后，茜素红S染色分析成骨细胞分化能力。
7.2成脂分化
细胞在体外成脂诱导培养后，油红O染色检测细胞内红色脂肪滴。
8细胞活性检测
8.1细胞数和细胞存活率
血细胞计数板对细胞计数，台盼蓝染色法检测细胞平均存活率应不低于90%
8.2细胞生长曲线
用细胞计数方法绘制细胞生长曲线来判断细胞活力。
8.3细胞周期测定
用流式细胞术进行细胞周期测定。
9成瘤性检测
9.1裸鼠体内接种试验
9.2软琼脂克隆形成试验
按照中国药典2021版三部生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程中要求，应无克隆形成。
9.3端粒酶活性检测
按照端粒酶活性检测法检测。
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