20部哈佛商学院和斯坦福要求学生必看的电影文档格式.docx

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ChiJie

（DepartmentofClinicalMedicineof8yearsprogram,SchoolofMedicine,ShanghaiJiaotongUniversity,Shanghai200025）

Abstract:

ObjectiveTostudystressbehaviorandtheexpressionofbrainderivedneurotrophicfactor（BDNF）inH22tumor-bearingmice.MethodsThebehaviorchangesandtheexpressionofBDNFinthecerebrumandhippocampuswerestudiedinH22tumor-bearingmice.ResultsInthetailsuspensiontest,theimmobiletimeofthetumor-bearingmiceincreasedsignificantly.Correspondingly,thelevelofBDNFintumor-bearingmicealsodeclinedin12daysaftertumorimplantation.ConclusionTumormightserveasastressstimulusandcouldinducedepressionbyreducingtheexpressionofBDNF.

Keywords:

tumor；

stress；

hippocampus；

brainderivedneurotrophicfactor

临床研究表明肿瘤患者的抑郁症发病率及严重程度远远高出一般人群，其发病率国外报道约为6%~58%[1]，国内报道约为25%~58%。

癌症伴发抑郁可降低患者生存质量,促进病情恶化，加速病人死亡。

因此相关研究越来越受到医学科学工作者的关注。

抗抑郁药应用可明显改善肿瘤患者的抑郁情绪，提高肿瘤患者的生存质量，已成为肿瘤综合治疗中的一种重要手段。

然而，肿瘤与抑郁相互作用的研究多为临床流行病学调查及疗效观察，关于其生物学机制研究报道较少。

目前关于抑郁症发病机制的假说很多。

有研究认为抑郁症是一个与遗传因素有关的由环境因素共同导致的精神疾患，属多基因疾病，即在遗传因素的基础上，在环境因素的应激作用下，使基因易损个体脑内特定部位，主要是边缘系统，特别是海马、额叶皮层中的神经细胞凋亡与再生共轭平衡失调[2]。

失调状态的持续，将导致神经细胞的丢失，甚至局部性脑萎缩；

机体HPA轴负反馈机制失调和单胺特别是五羟色胺神经功能下降，导致大脑局部神经元的可塑性下降，不能适应环境应激因素的刺激，使认知功能和情绪自我调节能力下降，出现过度反应，引起以情绪改变为主，并伴有免疫内分泌功能改变和其他神经功能异常的抑郁症[3]。

于是我们做出这样的假设：

肿瘤的发生与转移，会导致机体产生一系列的应激反应，产生一定的抑郁症状。

基于这一假设，本研究通过观察荷瘤小鼠在抑郁模型中的行为学变化，并分析荷瘤小鼠神经营养和神经发生相关的基因BDNF的变化。

1材料和方法

1.1试剂及动物：

盐酸氟西汀（Fluoxetine）胶囊，由Elilillyandcompanylimited生产，规格：

20mg/每粒，批号：

20040715。

健康balb/c雄性小鼠，体重18+2g。

雄性肝癌H22腹水瘤小鼠，均为上海斯莱克实验动物有限公司提供。

实验动物分为三组，对照组，荷瘤组，荷瘤氟西汀治疗组。

盐酸氟西汀治疗组每日灌胃给药一次，对照组给与等量生理盐水。

1.2荷瘤模型制备：

取腹水瘤种鼠，处死后抽取腹水液，生理盐水

监测抑郁的悬吊试验：

每组试验模型（小鼠）倒置悬吊五分钟，先静止1分钟，然和累积计算其在5分钟内静止（即不活动）的时间。

1.3悬吊实验：

小鼠倒置悬吊五分钟（用透明胶纸粘住尾部悬吊），每两只小鼠中间用屏蔽物遮挡，使其不能互相干扰，然后累积计算其在5分钟内静止（即不活动）的时间。

实验于每次当天同一时间进行。

1.4RT-PCR法测定大脑皮层组织BDNF的表达BDNF以及beta-actin的引物序列为5’-TCATTGGTAACCTCGCTCAT-3’；

5’-CCGAACCTTCTGGTCCTC-3和5’-ACAGGCATTGTGATGGACTC-3’;

5’-TTGATGTCACGCACGATTT-3’.。

1.5实时定量RT-PCR（RealTimeRT-PCR）测定海马BDNF的表达2-SYBR为PCR的绿色荧光标记，引物序列为5’-GAGTCTTTGGTGGTTTGTGA-3’及5’-GCTCGGGTAGTTCGCTTTA-3’。

95°

C持续15分钟，然后经历40个循环使cDNA扩增，每个循环包括15秒94°

C高温变性、30秒56°

C低温退火、30秒72°

C适温延伸。

1.6统计学分析计量资料均以均数±

标准差表示（Mean±

s），采用单因素方差分析（one-wayANOVA），P<

0.05为显著性差异。

2结果

2.1荷瘤对小鼠不动时间的影响悬尾实验是经典的抑郁行为学模型，小鼠为克服不正常体位而挣扎活动,但活动一定时间后,出现间隙性不动,显示“失望”状态,小鼠不动时间了抑郁状态（图1）。

本实验发现随着荷瘤时间的增长，小鼠不动时间逐渐延长，氟西汀治疗组的不动时间较荷瘤组有显著缩短（图2）。

**

图1荷瘤对小鼠TST不动时间的影响

Fig1ImmobilitytimeintheTSTinH22tumor-bearingmice（Mean±

s，n=10）

**P<

0.01vsbeforetumorimplantation

图2氟西汀对荷瘤小鼠TST不动时间的影响

Fie2TheeffectoffluoxetineontheimmobilitytimeintheTSTinH22tumor-bearingmice.（Mean±

0.01vs12daysaftertumorimplantation

2.2荷瘤对小鼠大脑皮层BDNF表达的影响RT-PCR分析结果表明：

荷瘤12天后，小鼠皮层BDNF表达较正常对照组的BDNF表达明显下降（图3）。

图3BDNF基因在大脑皮层的表达

Fig3BDNFexpressioninthecortexofmice（n=3）

2.3荷瘤对小鼠海马BDNF表达的影响实时定量PCR分析结果表明海马组织中的BDNF表达下降，氟西汀处理12天后BDNF表达上调，与荷瘤模型组存在显著差异（表1）。

表1BDNF在小鼠海马组织的表达（Mean±

s，n=5）

Tab1BDNFexpressioninHippocampusinH22tumor-bearingmice（Mean±

组别

对照组

荷瘤模型组

荷瘤氟西汀处理组

相对浓度

0.96±

0.05

0.34±

0.10**

0.58±

0.15b

0.01vscontrolgroup；

bP<

0.01vstumor-bearinggroup

3讨论

TST作为一项经典的探索抑郁机制的试验被广泛应用，该试验基于动物在短期不可逃避的悬吊过程中，将会逐渐放弃挣扎而进入静止不动的状态，并将此作为一种抑郁的表现，对于抗抑郁药物和抑郁相关的基因改变的研究都有一定的验证意义[4]，因此我们也采用该实验作为对于小鼠的行为学改变的主要实验。

从我们的实验结果可以看出，悬尾实验中随肿瘤接种时间增加，荷瘤小鼠平均不动时间随之增加，即荷瘤小鼠的绝望行为加重，提示随荷瘤时间增加，小鼠精神状态发生了变化，挣扎行为减退，向抑郁症状发展。

用氟西汀处理的荷瘤小鼠在第12天的不动时间明显比未给药的荷瘤小鼠缩短，即荷瘤小鼠的抗抑郁治疗有效，这进一步说明荷瘤小鼠有抑郁表现。

大量证据表明BDNF属于神经生长因子（NGF）家族，是突触和形态可塑的调节分子，它是支持神经元生存和诱导神经突起生长的化学物质，具有很强的刺激和促进神经细胞生长分化、维持神经细胞存活和正常功能的作用[5-9]。

研究表明BDNF对神经元的生长、分化、存活及损伤后修复有重要的作用，并与长时程增强、学习、记忆有关。

BDNF在大脑的可塑和发育方面也起到轴心作用[10]。

抗抑郁剂氟西汀能增加大鼠海马、腹侧被盖区、前额皮质、伏核区域的BDNF的表达水平，延长神经元的轴突和增加海马CA3区锥体神经元细胞树突分支密度，从而提高神经元的重建作用[11-14]。

试验结果中，我们可以看到小鼠大脑海马及皮质中BDNF水平明显下降。

由此我们可以得出荷瘤小鼠模型中肿瘤的发生与转移，会导致机体产生一系列的应激反应。

后者也会影响大脑的海马组织BDNF基因低表达，从而产生一定的抑郁症状。

通过实验，我们可以初步认为，抗抑郁剂可能是通过增加海马的神经再生来激活神经保护通路：

抗抑郁治疗引起神经营养因子的上调，继而产生一系列生物学效应，增加海马齿状回的神经再生，完善海马神经重塑，从而使肿瘤患者的慢性应激反应引起的海马损伤得到不同程度的修复。

这可以用来解释抗抑郁药物对于肿瘤患者的抑郁症状的作用。

上述从海马神经元再生及可塑的角度对肿瘤引发抑郁所进行的研究，肯定了三者之间存在着明显的联系，无疑为肿瘤患者抑郁的病理生理机制和治疗的临床和研究工作拓宽了视野。

[参考文献]

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