届高考生物大一轮总复习 第十一单元 生物技术实践 第42讲 微生物的培养及应用.docx

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届高考生物大一轮总复习第十一单元生物技术实践第42讲微生物的培养及应用

第42讲　微生物的培养及应用

[考纲要求]　1.微生物的分离和培养。

2.培养基对微生物的选择作用。

考点一　微生物的分离与培养

1．培养基

（1）概念：

人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养组成：

一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（3）种类：

按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术

（1）含义：

指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）关键：

防止外来杂菌的入侵。

（3）不同对象的无菌操作方法（连线）

3．大肠杆菌的纯化培养

（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基

①操作步骤

→

→

→

→

②倒平板的方法及注意事项

a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：

丙→乙→甲→丁。

b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

（2）纯化大肠杆菌的方法

①纯化培养原理：

想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤：

接种。

③常用的微生物接种方法有两种

a．平板划线法：

是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b．稀释涂布平板法：

是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作（如下图所示）：

涂布平板操作（如下图所示）：

（3）菌种的保存方法

①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

[思维诊断]

（1）培养基分装到培养皿后进行灭菌（2013·江苏，18A）（　×　）

（2）从有机废水中分离分解有机物的微生物时，接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养（2013·江苏，18C）（　×　）

（3）消毒的原则是既杀死材料表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害（2013·重庆，5A）（　√　）

（4）培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐，有时还需要加入一些特殊的物质（　√　）

（5）无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料（如培养基、接种环等）都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌（　×　）

（6）下图中甲为平板划线法中最重要的环节，乙为操作的结果：

①每一次划线后要将接种环灼烧（　√　）

②除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端（　×　）

（7）用稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时，只要稀释度足够高，就能在培养基表面形成单个菌落（　√　）

题组一　培养基及其制备方法分析

1．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。

下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述，不正确的是（　　）

A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素

B．碳源物质也是该微生物的能源物质

C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质

D．水是该微生物的营养要素之一

答案　B

解析　碳源分为有机碳源和无机碳源。

当有机物作为碳源时，既是碳源，又可作为能源；当无机物作为碳源时，只能作为碳源，不能作为能源。

该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质。

2．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（　　）

A．操作顺序为计算→称量→溶化→倒平板→灭菌

B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯

C．待培养基冷却至50℃左右时倒平板

D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置

答案　A

解析　制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，其顺序不能颠倒。

牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。

待培养基冷却到50℃左右，用手触摸锥形瓶刚刚不烫手，并且培养基处于溶化状态时开始倒平板，平板冷却凝固后才能倒置。

1．培养基的配制原则

（1）目的要明确：

配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。

（2）营养要协调：

注意各种营养物质的浓度和比例。

（3）pH要适宜：

细菌为6.5～7.5，放线菌为7.5～8.5，真菌为5.0～6.0，培养不同微生物所需pH不同。

2．微生物对主要营养物质的需求特点

不同种类的微生物代谢特点不同，因此对培养基中营养物质的需求也不同。

（1）自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。

（2）异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。

题组二　无菌技术的操作

3．微生物培养过程中，要十分重视无菌操作，现代生物学实验中的许多方面也要进行无菌操作，防止杂菌污染，请分析下列操作中错误的是（　　）

①煮沸消毒可以杀死微生物的营养细胞和部分芽孢　②接种操作要在酒精灯火焰附近进行　③无菌繁殖脱毒苗时，植物的外植体要进行消毒　④家庭制作葡萄酒时要将容器和葡萄进行灭菌　⑤培养基要进行高压蒸汽灭菌　⑥加入培养基中的指示剂和染料不需要灭菌

A．①③B．②④C．③⑤D．④⑥

答案　D

解析　无菌操作包括消毒和灭菌。

需进行消毒处理的有植物的外植体及操作人员的双手等，需进行灭菌的有器皿、培养基、添加剂（指示剂或染色剂）等。

煮沸可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢，属于消毒；为防止空气中杂菌污染，接种时要在酒精灯火焰附近进行；家庭制作葡萄酒时所利用的微生物是葡萄表面的酵母菌，故不能灭菌；培养基常进行高压蒸汽灭菌。

故④⑥操作错误。

4．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（　　）

A．接种环、手、培养基B．高压锅、手、接种环

C．培养基、手、接种环D．接种环、手、高压锅

答案　C

解析　一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。

消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌而对被消毒的物体基本无害，如操作者的手和衣着需要消毒处理。

高压蒸汽通常用于培养基的灭菌。

用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。

火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环。

消毒和灭菌的辨析

项目

条件

结果

常用方法

应用范围

消

毒

较为温和的物理或化学方法

仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物

煮沸消毒法

日常用品

巴氏消毒法

不耐高温的液体

化学药剂消毒法

用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源

灭

菌

强烈的理化因素

杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子

灼烧灭菌法

接种工具

干热灭菌法

玻璃器皿、

金属工具

高压蒸汽

灭菌法

培养基及容

器的灭菌

题组三　大肠杆菌的纯化方法及过程分析

5．下图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法的操作结果。

下列叙述中错误的是（　　）

A．甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却后才能取菌液

B．对于浓度较高的菌液，如甲中的稀释倍数仅为102，则所得的菌落不是由单一的细胞或孢子繁殖而成

C．乙中培养皿中所得的菌落都符合要求

D．乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端

答案　C

解析　灼烧后的涂布器如果没有冷却就接触菌种，会将菌体杀死，A正确。

稀释倍数过低会导致多个菌体聚集在一起繁殖成菌落，B正确。

平板划线法中最后一次划线的末端处形成的菌落才是由单一的细胞或孢子繁殖而成，这种菌落才符合要求，C错误。

连续划线中，除了第一次划线外，每一次划线的起点是上一次划线的末端，目的是使得菌体密度越来越小，保证最后划线末端处的菌落是由单一的细胞或孢子繁殖而成。

6．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。

下列相关叙述错误的是（　　）

A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释

B．需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面

C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落

D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理

答案　C

解析　只有菌液稀释到一定程度后，在固体培养基表面才能形成单个的菌落，否则可能会出现两个以上的细菌共同形成一个菌落，或菌落出现重叠。

两种纯化细菌的方法的比较

项目

优点

缺点

适用范围

平板划

线法

可以观察菌落特征，对混合菌进行分离

不能计数

适用于

好氧菌

稀释涂

布平

板法

可以计数，可以观察菌落特征

吸收量较少，较麻烦，平板不干燥效果不好，容易蔓延

适用于厌氧菌和兼性厌氧菌

考点二　微生物的筛选和计数

1．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

（1）分离原理：

土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

（2）统计菌落数目：

统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

（3）实验流程：

土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。

2．分解纤维素的微生物的分离

（1）纤维素酶

①组成：

纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。

②作用

纤维素

纤维二糖

葡萄糖

（2）纤维素分解菌的筛选

①原理

　　　　　　　　纤维素分解菌

　　　　　　　　　　　↓

→红色复合物

红色消失，出现透明圈

②筛选方法：

刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

③培养基：

以纤维素为唯一碳源的选择培养基。

④实验流程

土壤取样：

富含纤维素的环境

↓

选择培养：

用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的浓度

↓

梯度稀释：

制备系列稀释液

↓

涂布平板：

将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上

↓

挑选产生透明圈的菌落

[思维诊断]

（1）选择培养基可以鉴定某种微生物的种类（　×　）

（2）从物理性状的角度看，选择培养基多属于固体培养基（　√　）

（3）对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用平板划线法（　×　）

（4）筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源（　√　）

（5）分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低（　×　）

（6）纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，在纤维素酶的作用下，纤维素可以水解成葡萄糖（　√　）

（7）刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌（　×　）

（8）在筛选能分解纤维素的细菌的实验中，选择培养的目的是增大样品中目的菌株的浓度（　√　）

（9）刚果红染色法只能在培养微生物的时候加入刚果红（　×　）

题组一　选择培养基成分及配制方法的分析

1．选择培养基是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。

利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

为选择酵母菌和硝化细菌，应选用的培养基分别为（　　）

A．伊红美蓝培养基、含青霉素培养基

B．含青霉素培养基、含氨的无机培养基

C．含氨的无机培养基、含青霉素培养基

D．含青霉素培养基、伊红美蓝培养基

答案　B

解析　酵母菌是真菌，通常可以用含青霉素的培养基进行选择培养，因为青霉素抑制细菌生长，但不能抑制真菌生长。

硝化细菌为自养型生物，能够利用氨转变为亚硝酸和硝酸所释放的能量把无机物转变为有机物以维持自身生命活动，利用含氨的无机培养基可进行选择培养。

2．苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。

某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，①为土壤样品。

请回答下列问题：

（1）②中培养目的菌株的选择培养基中应加入________作为碳源，②中不同浓度碳源的培养基________（A.影响；B.不影响）细菌的数量，如果要测定②中活细菌数量，常采用____________法。

（2）④为对照，微生物在④中不生长，在⑤中生长，④与⑤培养基的主要区别在于________________________________________________________________________

________________________________________________________________________；

使用______________________________法可以在⑥上获得单菌落。

采用固体平板培养细菌时进行倒置培养的原因是______________________________________________________。

（3）实验过程中如何防止其他微生物的污染？

________________________________________________________________________

________________________________________________________________________。

答案　

（1）苯酚　A　稀释涂布平板　

（2）④的培养基没有加入苯酚作为碳源，⑤的培养基加入苯酚作为碳源　稀释涂布平板法或平板划线　防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基　（3）培养基灭菌，接种环境灭菌，接种过程无菌操作

解析　根据微生物对营养的需求，在培养基中加入或不加某些物质以达到促进目的菌生长，抑制或阻止其他杂菌生长的目的，然后再用涂布平板法、平板划线法或其他方法筛选出单个目的菌落，再接种培养即可获得纯目的菌。

为防止培养基中水分蒸发形成的水珠落入培养基中影响菌体生长，所以要将培养皿倒置。

在设计实验中要注意单一变量原则和对照原则，操作中要严格进行无菌操作。

选择培养基的制作方法

（1）在培养基全部营养成分具备的前提下，加入物质：

依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以抑制不需要的微生物，促进所需要的微生物生长，如培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可将该菌分离出来；而在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌。

（2）通过改变培养基的营养成分达到分离微生物的目的：

培养基中缺乏氮源时，可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存；培养基中若缺乏有机碳源则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存。

（3）利用培养基的特定化学成分分离特定微生物：

如当石油是唯一碳源时，可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物。

（4）通过某些特殊环境分离微生物：

如在高盐环境中可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存；在高温环境中可分离得到耐高温的微生物，其他微生物在高温环境中因酶失活而无法生存。

题组二　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

3．下列说法错误的是（　　）

A．因为土壤中各类微生物的数量不同，所以为获得不同类型的微生物，要按不同的稀释倍数进行分离

B．测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围不同

C．只有得到了3个或3个以上菌落数目在30～300的平板，才说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数

D．牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落

答案　C

解析　样品的稀释度直接影响平板上生长的菌落数目，土壤中各类微生物数量不同，含量最多的是细菌，大约占70%～90%，其次是放线菌，最少是真菌，所以为获得不同类型的微生物，要按不同稀释倍数进行分离；在同一稀释度下只要得到2个或2个以上的菌落数目在30～300的平板，就说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数；验证选择培养基是否具有选择作用，需设立牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，若后者上的菌落数明显大于前者，说明前者具有筛选作用。

4．下面是探究如何从土壤中分离出自生固氮菌与计数的实验，完成下列问题：

实验原理：

农田的表层土壤中，自生固氮菌的含量比较多。

将用表层土壤制成的稀泥浆，接种到无氮培养基上进行培养。

在这种情况下，只有自生固氮菌才能生长繁殖。

用这种方法，可以将自生固氮菌与其他细菌分离。

材料用具：

农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛有9mL无菌水的试管、无菌吸管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛有90mL无菌水的锥形瓶、恒温箱。

（1）方法步骤：

①倒平板：

分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板，应在________________________旁操作。

②制备土壤稀释液：

取土样10g加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。

用无菌吸管吸取上清液1mL，转至盛有9mL的无菌水的试管中，依次稀释到107稀释度。

③涂布：

按照由103～107稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布，每个稀释度下，无氮培养基应至少涂布________个平板，牛肉膏蛋白胨培养基涂布________个。

④培养：

放入恒温箱内，在28～30℃下培养3～4d。

⑤细菌的计数：

当菌落数目稳定时，选取菌落数在________的平板进行计数。

如果测定的平均值为50，则每克样品中的菌株数是________。

（稀释度是105）

（2）预期结果：

相同稀释度下，牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数________（选填“多于”或“少于”）无氮培养基上的数目。

原因是________________________________________________。

答案　

（1）①酒精灯火焰　③3　1　⑤30～300　5×107

（2）多于　无氮培养基上只有土壤中的自生固氮菌能生长繁殖，而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存

解析　

（1）在酒精灯火焰旁倒平板，可以减少杂菌的污染。

为了保证结果准确，一般设置3～5个平板，选择菌落数在30～300的平板进行计数，并取平均值，则每克样品中的菌株数为（50÷0.1）×105＝5×107。

（2）牛肉膏蛋白胨培养基作为对照，以消除无关变量对实验结果的影响，该培养基适合土壤中几乎所有细菌生存，所以，它比无氮培养基上的菌落数目多。

稀释涂布平板法计数微生物的注意问题

用稀释涂布平板法计数微生物时，要求选择菌落数在30～300的平板进行计数。

解题时易出现以下误解：

（1）只得到1个菌落数在30～300的平板是错误的。

错误的原因是不符合实验的重复原则，易受到偶发因素的影响。

（2）得到3个或3个以上菌落数在30～300的平板，也不一定正确，这可能有两种情况：

①不同平板间差异较大，如得到3个平板，菌落数分别为230、34、240，虽然菌落数均在“30～300”之间，这也是不正确的，因为“34”与“230”“240”差异太大，应重新实验找出原因。

②不同平板之间差异不大，是符合要求的，用其平均值作为估算的最终结果。

可见，并不是只要得到3个“菌落数在30～300的平板”即可，而应该是涂布的同一稀释度的平板均符合“菌落数在30～300的平板”且无较大差异，说明实验操作合格，才能按照计算公式进行计算。

题组三　分解纤维素的微生物的分离

5．通过分离分解纤维素的微生物实验，对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，这只是分离提纯的第一步，还需要进行（　　）

A．发酵产纤维素酶的实验B．提取纤维二糖的实验

C．浓缩纤维素分解菌的实验D．提取葡萄糖的实验

答案　A

解析　为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验，纤维素酶的测定方法一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后产生的葡萄糖进行定量测定。

6．下面从土壤中筛选纤维素分解菌的实验步骤，正确的是（　　）

①土壤取样　②称取10g土壤加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中　③吸取0.1mL进行平板涂布　④依次稀释至101、102、103、104、105、106、107稀释度

A．①→②→③→④B．①→③→②→④

C．①→②→④→③D．①→④→②→③

答案　C

解析　在分离土壤中某细菌时，应先选取土样（10g），然后加无菌水获得土壤浸出液，并进行不同倍数稀释，最后将稀释液涂布到培养基表面进行培养，并分离和计数。

两种微生物筛选方法的比较

项目

土壤中分解尿素的

细菌的分离

分解纤维素的

微生物的分离

方法

使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养

利用富含纤维素的选择培养基进行培养

原理

土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生长，能够分解尿素的微生物能利用尿素为氮源正常生长，从而起到选择作用

因为培养基中含有丰富的纤维素，因此能够分解纤维素的微生物具有更多的生存机会而大量繁殖

特有

代表

过程

CO（NH2）2＋H2O

CO2＋2NH3

纤维素

纤维二糖

葡萄糖

网络构建

要语强记

1．无菌操作技术包括消毒和灭菌，消毒包括煮沸消毒、巴氏消毒、化学药剂消毒和紫外线消毒等；灭菌包括灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌。

2．培养基的制备包括计算、称量、溶化、灭菌、倒平板等步骤，倒置平板的目的是防止培养皿盖上的水滴滴入培养基造成污染。

3．大肠杆菌的纯化包括平板划线法和稀释涂布平板法。

平板划线法要求多次划线，稀释涂布平板法要求菌液要充分地稀释。

4．微生物的计数要求制作多个平板，且每个平板上能长出30～300个菌落。

5．尿素分解菌和纤维素分解菌的分离都运用了选择培养基，前者所用的培养基中尿素是唯一的氮源，后者所用的培养基中纤维素是唯一的碳源。

探究高考　明确考向

1．（2013·江苏，18）某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理。

下列叙述正确的是（　　）

A．培养基分装到培养皿后进行灭菌

B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线

C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养

D．培养过程中每隔一周观察一次

答案　B

解析　培养基灭菌后再分装到培养皿中；转换划线角度后要灼烧接种环，冷却后再从上次划线的末端开始进行划线；接种后的培养皿必须放在恒温箱中进行培养，一般每隔12h或24h观察一次。

2．（2012·北京，5）高中生物学实验中，在接种时不进行严格无菌操作对实验结果影响最大的一项是（　　）

A．将少许干酵母加入到新鲜的葡萄汁中

B．将毛霉菌液接种在切成小块的鲜豆腐上

C．将转基因植物叶片接种到无菌培养基上

D．将土壤浸出液涂布在无菌的选择培养基上

答案　C

解析　在酿制葡萄酒的过程中，如果灭菌不彻底会影响葡萄酒的品质，但影响不大；在制作腐乳的过程中，发酵过程有多种微生物的参与，所以该过程不进行严格的无菌操作对结果影响不大；在植物组织培养过程中，如果灭菌不彻底，杂菌产生的物质会影响外植体的生长，甚至杀死外植体，导致培养失败，对结果影响最大；土壤浸出液本身就含有大量的杂菌，另外在选择培养基上只能生存我们所要筛选的细菌，所以无菌操作不严格，对结果影响也不会太大。

3．（2011·新课标，39）有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。

某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。

回答问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以________为唯一碳源的固体培养基上。

从功能上讲，该培养基属于__________培养基。

（2）纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即____________________和______________