液相基本术语及操作Word文档格式.docx

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对于液相色谱，改变流动相的组成，可以有效控制k；

2仪器的操作规程

2/28

程操作规日立液相设备L-2000/24002.1

2.1.1使用环境

环境温度：

4℃—55℃；

相对湿度：

小于95%RH。

2.1.2使用前准备

检查所用溶液（如流动相，乙腈等）是否足够。

检查线路是否连接正常。

2.1.3设备操作方法

具体操作如下：

（1）依次开启泵开关，检测器开关，自动进样器开关，

柱温箱开关；

（2）打开软件，点击“i”按钮，出现联机界面，点击

“Iinitialize”按钮，当文本框出现文字时，表示联机成功；

.laiz]?

?

[i'

ni（3）检查所用方法是否符合要求。

如不符合，进行设置；

（4）开泵。

检测

（1）建立所需样品盒；

（2）点击检测按钮，选择刚建立的样品盒；

（3）首先进行走基线；

（4）当基线走平时，点击系列样品检测按钮，进行标样，

样品检测；

3/28

（5）当标样检测结果出来时，打开结果窗口，选择所需

标样结果，点击“Recalculate['

ri:

'

k?

lkjuleit]

进行重新计算，然后点击“Calibration”[k?

li'

brei?

n]进行定标；

（6）当样品结果出来时，打开结果窗口，选择所需样品

结果，点击“Recalculate”['

lkjuleit]进行重新计算，然后点”ModifyReport击“:

t,][ri'

p['

m?

difai,]?

出现结果报告，即可查看样品具体结果。

2.1.4更换流动相

（1）当流动相快不够时或异常时，及时更换流动相；

（2）先把泵关闭，将流动相入口放入新流动相中；

（3）将泵阀逆时针旋转，进行排气。

大约3分钟后，关闭

排气功能；

（4）排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；

（5）走基线，当基线走平时，开始做标样，做样。

2.1.5关机

（1）先把泵关闭，将流动相入口更换为超纯水；

（2）将泵阀逆时针旋转，进行排气。

（3）排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；

4/28

（4）用超纯水冲洗管路大约20分钟；

（5）把泵关闭，将超纯水更换为100%甲醇或100%乙腈；

（6）将泵阀逆时针旋转，进行排气。

（7）排气完毕后，将泵阀顺时针旋转拧紧，开泵；

（8）用100%甲醇或100%乙腈冲洗管路大约30分钟；

（9）关泵，关液相软件，关泵开关，检测器开关，自动

进样器开关，柱温箱开关。

2.1.6维护保养、注意事项

（1）进行旬维护检查工作，主要检查事项：

软件是否正常、温度、清洗、进样器、泵单元；

（2）每次测量前进行标样检测，斜率达到99.99%要求才能检测样品，测完样品及时清理。

个小时以上的清洗。

2按要求进行每天（3）2.2Waters高效液相色谱-2695/2489

2.2.1开机自检

（1）打开Alliance[?

lai?

ns]2695和2489的电源开关至ON

（1）

的位置，仪器开始进行自检；

（2）仪器将进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现以下画面，画面上方的状态显示区会出现“Idle”['

aidl]状态，表示开机测试正常。

2.2.2流动相

有机溶剂要求用色谱纯（进口名牌最好），水或缓冲盐溶液要用超5/28

纯水（电阻率：

18.2MΩ），每48小时制备新鲜的水相流动相,尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。

6根管子都在液面以下。

溶剂的位置必须高于溶剂混合阀（GradientProportioning

Valve）。

[lv]v?

?

p?

:

ni?

greidi?

ntpr清洗柱塞密封垫（SealWash）的溶液：

含5%～10%甲醇][si:

l]?

[w的超纯水。

洗针液（NeedleWash）：

50%甲醇：

50%水（该比例仅]['

ni:

d?

l][w?

适用于反相试验）。

注:

以上溶剂或溶液均需用0.45μm的膜过滤并超声脱气1分钟，用洁净的玻璃容器盛放,避免污染，同时玻璃容器应用超纯水来清洗而不能用自来水。

2.2.3灌注柱塞密封清洗

清洗操作步骤：

（1）回到Menu画面，选择Diag；

['

menju:

]

（2）确定SealWash的管路放在正确的位置；

][si:

（3）按PrimeSealWash，再按Start，直到清洗溶]?

[praim][si:

l][w剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，按Halt；

:

lt][h?

（4）按Close。

注意：

密封圈清洗（Sealwash）溶剂，在反相液相色谱中]?

[si:

l][w可使用Water/MeOH=90/10或][醇methylalcohol

甲Water/Acetonitrile根据实际需要使用不同=95/5（]乙腈u'

naitril?

sit[?

）。

溶剂灌注针头清洗2.2.4

Main操作步骤：

回到，选择Diag的画面，选择Prime[praim][mein]6/28

NdlWash。

设定值为30秒，若想要多清洗几次时，请按StartAgain。

清洗溶剂：

50%的甲醇溶液

若上述清洗溶剂无法避免进样时的交叉污染，使用较强的溶剂系统来进行清洗操作。

2.2.5打开真空脱气机

如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：

按“Menu/Status”键，进入Status

（1）画面；

利用方s]?

steit向键将光标移至“Degasser”位置，按Enter；

利用上下键选][di:

g?

s?

择模式为ON。

在开启除气装置时，要确认所有溶剂管路都充满溶剂；

若没有溶剂时请执行溶剂的DryPrime操作。

[drai][praim]2.2.6执行干灌注

确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器（Detector

）废液管及定量环（SampleLoop）的废液管是否放置于适[lu:

p][di'

tekt?

]当的废液容器中。

摇动溶剂瓶内的过滤器（SolventFilter），防止气泡]nt]['

filt?

['

lv附着在过滤器的外表面。

将空的针筒插入抽液阀（Prime/Ventvalue）中，以逆时针的方向旋转3圈。

按“Menu/Status”键，进入Status

（1）画面，按“Directs]?

steitFunction”功能键，选择DryPrime，按Enter。

n][di'

rekt'

f?

按下面使用的溶剂开启阀门（例如:

OpenA），然后将针筒向外拉，抽出5～10mL溶剂并完全抽出溶剂管子内的气泡，完成后关闭Prime/Vent阀门。

在“Enteraduration”中输入3分钟，按“Continue”n][dju'

rei?

7/28

键，泵即以3.0mL/min的流速进行清洗（Purge）。

可重复上两个步骤，将所要使用的流动相溶剂DryPrime。

2.2.7执行湿灌注

按“Menu/Status”键，进入Status

（1）画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，将欲WetPrime的溶剂输n]?

zi[k?

mp入100%。

按“DirectFunction”功能键，选择WetPrime，n]?

[di'

f按Enter。

WetPrime的原设定值，一般为FlowRate:

7.5mL/min，Time:

3.0min，然后按下“OK”键，泵即开始进行WetPrime操作。

重复上述的步骤直到所有溶剂WetPrime进行完毕。

2.2.8设定流动相平衡色谱柱

按“Menu/Status”键，进入Status

（1）画面，利用方向键将光标移至“Composition”字段，利用仪器面板右侧的数字n]'

zi?

[k?

mp?

键设置试验要求的溶剂组成比例，此时会在原溶剂比例表的下方出现新编辑溶剂比例表（NewComposition）。

设定好新的溶剂组成比例后，按“ChangeComp”[t?

eind?

[k?

mp]功能键（改变溶剂组成比例changecomposition），此设定的溶剂组成比例即为当前的比例。

利用方向键将光标移至“Flow”字段，利用仪器面板右侧的u][fl?

数字键设定流速，此时仪器即设定的溶剂组成比例和流速来平衡色谱柱。

特别提示:

对于常规的反相色谱试验至少要用30倍柱体积来平衡，而对于离子对色谱的平衡可能需要多达500柱体积的流动相来平衡。

2.2.9冲洗进样器

溶剂管理系统的前处理（Primethesolventmanagement

8/28

system）要求如下：

（1）改变溶剂;

（2）发现注射针头内有气泡;

（3）每天开机的时候。

冲洗进样器执行步骤：

（1）按“Menu/Status”键，进入Status

（1）画面，在设定溶剂的画面中设定适当的流速与溶剂比例；

（2）按“DirectFunction”键，选择Purge

n]?

fInjector，按Enter；

]?

][in'

ekt?

[p?

d（3）输入SampleLoop体积清洗的倍数（原定值为6倍），按Enter；

（4）压缩测试（CompressionCheck）请先不需要测试，设定完成后按OK。

2.2.10放入样品盘

打开计算机，运行Empower软件，选择存放数据文件的][im'

pau?

Project，运行RunSamples；

按DevelopMethods[di'

vel?

p]['

meθ?

d]按钮，建立方法；

按Monitor按钮，观察基线，待基线平稳，]?

['

nit可准备进样。

2.2.11关机

首先关闭检测器电源；

在2695溶剂槽中换上适当的清洗溶剂，清洗系统约60分钟（针对离子对试验，建议50%乙腈：

50%水1mL/min流速冲洗色谱柱2小时以上）；

按2695面板Diag键，选择Prime

SealWash，清洗泵头约1分钟；

再选择PrimeNdlWash，清洗进样针1～2次；

按Menu/Status键进入手动控制模式，按DirectFunction

键，选择PurgeInjector，冲洗进样器（针]][in'

n][di'

[p:

d对离子对试验，建议设定50%乙腈：

50%水的溶剂来冲洗进样器）；

降9/28

低流速至0，待系统压力回零后，关闭2695电源，关闭计算机及显示器电源。

2.3岛津LC-20AT液相色谱仪操作规程

2.3.1准备工作

在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标样及样品。

流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。

打开LC-20A×

2SETS,CTO-10ASvp，SPD-M20A（或RF-10AXL）电源，待自检通过。

打开SCL-10Avp电源，检查开机屏幕应显示各单元，如果某单f2键取消屏幕需按Fixed标志即可元没有显示，则不能控制该单元，显示并控制该单元。

否则检查通讯设置。

打开计算机电源或重新启动计算机，待正常进入WINXP操作系统。

），按Purge泵排空阀（逆时针180度以上排空操作：

打开LC-20AT键，泵开始排空运行。

Teflon管路没有气泡后，再按Purge检查流动相入口键停止排空。

压力调零：

如果purge时，压力不为零，需要进行压力调零,按项，按FUNCCONTROL键直至屏幕显LC-20ATvp泵Func键选择示***mlZEROADJ项，按Enter键，再按CE键，即完成调零。

然后关紧排空阀（顺时针旋紧）。

在计算机中双击LCSOLUTION图标，进入工作站。

再双击Operation∈Analysis1～4进入实时分析窗口（根据不同的检测器选择）。

10/28

在开机画面中，UserID选中Admin，不需输入Password，点OK（可听到峰鸣一声），在下面操作中A∈B击表示在A菜单下选择B，以此类推。

选中□表示在□中打√号。

在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即可（可以跳过执行）：

（1）Systemconfiguration系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）；

（2）SystemCheck编辑仪器检查参数：

并且RUN运行检查。

通常不操作（跳过）；

（3）点击Dataacquisition进入采集数据编辑方法界面

点击InstrumentParameter进入仪器参数设置界面：

——选中Normal（通用简单）或Advanced（高级详细）项，分别设定Pumps泵参数，Oven柱箱参数，Detecter检测器参数，Controller系统控制器参数，TimeProgram时间程序参数等。

仪器配置不同，控制单元项的数目多少不同;

——Pumps泵参数：

Mode控制方式，Flow流速，B，C，DConc各项浓度，PMax最大压力；

——Oven柱箱参数：

Oven设定温度，TMax最大保护温度；

——Detecter检测器参数：

Cell设定池温。

Wavelength设定波长；

——Controller系统控制器参数；

——Dataacquisition选中AcquisitionTime□后，设置分析时间，等等；

——LCTimeProg时间程序参数：

编辑泵梯度洗脱程序，也可以控制柱箱，检测器等等；

11/28

（4）点击Method∈DataAnalysisParameter编辑积分参数：

设置Width峰宽，Slope斜率，MinArea最小峰面积等等。

新建方法推荐使缺省值，待分析完样品后再设置此项参数，得到优化的色谱数据结果后，将参数保存在当前方法中；

（5）保存方法：

点击File∈SaveMethodas如图：

起文件名*****保存后，该方法即作为当前运行的方法;

DownLoad键，向仪器传送参数。

（6）下载方法：

点击2.3.2运行方法

点击如图图标（InstrumentOn/Off系统开/关）系统开始运行，检查各单元参数应与方法设定一致。

等待系统平衡。

一般情况下，由于流动相不同，交换平衡时间不定。

可以观察Detecter检测器吸收变化,如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，准备进样分析。

可以通过改变衰减或予览基线观察基线变化，待基线平稳（初始化显示时与横轴平行），准备进样操作。

2.3.4进样

分析如下：

（1）单针进样分析：

如图点击SingleStart图标：

出现如下采样对话框；

（2）编辑样品参数：

SampleID样品信息，MethodName方法文件名，DataPath数据存储路径，DataName数据文件名，Vial样品瓶号（无），Tray#架号（无），Injection进样量等；

OK后，开始进样操作（★重复单针进样，（3）点击重复执行第7步骤即可★）；

（4）每个样到时间分析结束，根据方法中的积分参数，所有色谱数据会自动进行积分处理。

2.3.5报告予览和打印

12/28

⊙点击Top返回上级引导操作栏。

点击PostRunAnalysis进入数据后处理界面：

点击report进入报告界面：

点击reportformat进入格式界面：

调入报告格式文件也可以自己编辑报告格式，然后点击Data打开数据文件，将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。

关于报告格式，可以通过内容选择图标，在报告中确定位置后，添加即可。

右键功能很强大，用户可以参考说明书灵活使用。

选择快捷图标的预览或打印图标执行报告预览或打印。

2.3.6关机

步骤如下：

（1）更换洗液清洗流路系统（如用缓冲液，先用水清洗1小时，再用有机溶剂清洗30分钟以上），最后用有机溶剂封存；

（2）清洗结束后，停止系统运行，在LCSOLUTION工作站中，按Instrumenton/off键即停止所有单元工作；

（3）退出LCSOLUTION（可听到峰鸣一声），再完全退出；

（4）关系统控制器SCL-10Avp电源开关；

（5）关主机SPD-M20A（或RF-10AXL）检测器，LC-20AT泵，CTO-10ASvp柱箱电源开关。

2.3.7清洗流路系统要求

如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟；

如果使用有机溶剂（水），直接更换甲醇清洗40分钟即可。

2.4安捷伦高效液相色谱操作规程

2.4.1开机

打开计算机,进入WindowsXP（或Windows2000）画面,并运行BootpServer程序。

打开1100/1200LC各模块电源。

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待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC/1200LC。

从“View”菜单中选择“MethodandRuncontrol”画面,单击”View”菜单中的“ShowTopToolbar”，“Showstatustoolbar”，“Systemdiagram”,”Samplingdiagram”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。

把流动相放入溶剂瓶中。

打开Purge阀。

单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入泵编辑画面。

设Flow：

5ml/min，单击OK。

单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。

单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭Purgevalve。

单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：

1.0mL/min。

单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击Ok。

2.4.2关机

关机前，用100%的水冲洗系统20分钟，然后用有机溶剂冲洗系统10分钟（如ACN），然后关泵（适于反相色谱柱，正相色谱柱用适当的溶剂冲洗）。

退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shut

14/28

down关）。

关掉Agilent1100/1200电源开关

2.5C8柱修复操作规程

2.5.1目的

为节约检测成本，同时统一操作方法，特制定本作业指导书。

2.5.2适用范围

本标准适用于爱杰尔、天津兰博生产的C8柱修复方法（其它厂家可以尝试使用）。

C8柱使用一段时间后，会出现柱压高、峰变形问题，大部分的原因为C8柱污染，通过对污染C8柱柱头过滤网进行超声清洗，然后再生，解决问题。

2.5.3工具、试剂

2个扳手，1把钝剪刀。

乙腈（色谱纯）、异丙醇（色谱纯）。

2.5.4修复过程

（1）将故障C8柱柱头处拧开

用2个扳手将C8柱两柱头拧开，取下两端柱头。

用钝的剪刀夹住塑料封口，取下塑料封口，过滤网就在封口处。

观察C8柱内填料是否有污染，如有污染，用干净的滤纸轻轻擦掉污染物。

只能擦去表面一层填料，不能太多，否则会损坏柱子。

两端端口两端端口：

图1C8柱15/28

内有过滤网柱内部塑料封口，内有过滤网2图：

C8柱的后端柱头进C82）对两端柱头进行超声清洗（或者对另一支旧（柱前端柱头）行清洗，并代替此C8乙腈，然后将第一步取出的两端柱头（包10%准备小烧杯，倒入乙乙腈更换为100%括过滤网）放入烧杯，超声半小时；

然后将10%乙腈更换为超纯水，超声半小时。

或者腈超声半小时；

最后将100%柱的前C8进行清洗，并代替此柱的后端柱头卸下，将以前用过的旧C8端柱头。

：

对端口，塑料封口，过滤网进行超声清洗图3）安装柱子3（将过