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ObjectiveTostudyonanovelextractionprocessofastragaluspolysaccharidesby
ultrasoundcombinedwithcelluloseenzyme.MethodsTheoptimumextractingconditions
weretestedwithorthogonalexperimentaldesign.ResultsThesignificanceofthesefactorsin
sequencewereenzymeamount,solid/liquidratio,ultrasoundtemperatureandultrasound
extractiontime.Theoptimalparameterswere:
ultrasoundtimeof30min,ultrasound
temperatureof40℃,solid?
liquidratio1∶20,theenzymeamountof10mg.ConclusionThe
optimalprocessofultrasoundcombinedwithcelluloseenzymeisavailableandworkablefor
highyieldoftotalAPScomparedwithtraditionalwaterextraction.
Keywords:
ultrasoundcombinedwithenzyme;
Astragalusmongholicus;
total
polysaccharides;
orthogonalexperiment
黄芪为豆科植物黄芪Astragalusmembra?
naceus（Fisch.）Bge.var.mongholicus（Bge）Hsiao
或荚膜黄芪Astragalusmembranaceus（Fisch.）Bge的干燥根。
具有补气固表、利尿脱毒、
排脓、敛疮生肌的功效,为历代常用之补益中药。
黄芪多糖（Astragalus
Polysaccharides,APS）是黄芪中重要的天然有效活性成分,具有促进免疫器官功能和抗体
生成,抗菌抗病毒及抗肿瘤,抗衰老，防辐射,双向调节血糖等作用[1,2]。
由于其多种生物
活性及良好的临床效果,多年来在国内外已成为中药提取及中草药现代化研究的焦点之
一[3]。
目前已有黄芪多糖冲剂、黄芪精口服液、黄芪注射液等药品应用于临床,其提取
工艺的选择直接影响到药品的质量。
2
目前黄芪多糖的提取主要采用传统的水提工艺,多糖粗品的收率极低,而提取成本却很
高,使得黄芪多糖的开发利用受到限制。
酶技术是近年来用于植物有效成分提取的生物
工程技术，选用恰当的酶可以比较温和地将植物组织分解，加速有效成分的释放，从
而提高其提取率[4,5]。
超声提取法是基于超声波的空化作用来加速物质分子运动的频
率和速度、增加溶剂穿透能力,以提高药物溶出速度和溶出次数,从而有利于植物有效成
分溶出的一种提取方法,同时它还避免了高温加热对有效成分的破坏。
基于酶法与超声
提取法的优点，作者首次采用超声联合纤维素酶法提取黄芪中的总多糖，通过正交试
验确定最优提取工艺，旨在提高黄芪多糖的得率，最大限度地利用黄芪资源，为其工
业化生产提供参考依据。
1仪器与试剂
1.1仪器
HH?
6恒温水浴锅（江苏金坛市宏华仪器厂）;
RE?
52CS旋转蒸发器（巩义市英峪予华仪
器厂）;
循环水真空泵（河南省巩义市英峪予华仪器厂）;
UV1101紫外/可见分光光度仪（上
海天美科学仪器有限公司）;
AY120电子分析天平（日本岛津公司）;
KH?
400KDB型高功率
数控超声清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，频率40kHz，功率400W）;
摇摆式高速
中药粉碎机（大德中药机械有限公司）。
3
1.2试剂
葡萄糖对照品（分析纯，纯度99%,广州汕头市西陇化工厂）;
纤维素酶（活性单位15
Umg-1）由上海伯奥生物科技有限公司提供。
黄芪药材（购自广州致信中药饮片有限公
司，批号：
08207）。
实验用水为蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1样品前处理
将黄芪药材经粉碎机粉碎后过40目筛，备用。
2.2葡萄糖对照品溶液的制备
精密称取葡萄糖对照品25.0mg，置50.0mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解，并稀释至
刻度，摇匀，即得（每1mL中含葡萄糖0.500mg）。
2.3标准曲线的制备
4
分别精密吸取上述葡萄糖对照品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL至7个25
mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
分别精密吸取1.0mL于试管中，于冰水
浴条件下缓慢加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀，迅速加入浓硫酸溶液5.0mL，振摇5
min，沸水浴10min，然后置冷水浴中冷却20min。
同时以苯酚-浓硫酸溶液作为空白
对照，在490nm处测量其吸光度值。
以葡萄糖的质量浓度（）为横坐标,溶液的吸光度
（A）为纵坐标，绘制标准曲线。
经回归分析，得标准曲线方程：
A=13.154+0.0158，
r=0.9981。
葡萄糖的质量浓度在0.02～0.12mgmL-1范围内与吸光度线性关系良好。
2.4黄芪中黄芪多糖提取率的测定
tips:
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仅供参阅！
5
蒿甲虚热清颗粒解热作用及机制的研究
作者：
江涛，唐春萍,曾昭智1,张锦红,陈艳芬
【摘要】目的探讨蒿甲虚热清颗粒的解热作用及机制。
方法采用家兔阴虚热盛证
模型和酵母混悬液复制大鼠发热模型，观察蒿甲虚热清颗粒的解热作用，并采用放射
免疫法测定下丘脑中cAMP含量的变化。
结果蒿甲虚热清颗粒对家兔阴虚热盛证模型
和酵母混悬液复制大鼠发热模型的动物体温升高有明显的抑制作用，并能抑制下丘脑
中cAMP含量的增高。
结论蒿甲虚热清颗粒有明显的解热作用，其机制可能与其减少
下丘脑cAMP生成与释放有关。
【关键词】蒿甲虚热清;
解热;
cAMP
（1.LaboratoryAnimalCenter;
2.SchoolofTraditionalChineseMedicine,Guangdong
PharmaceuticalCollege,Guangzhou,Guangdong510006,China）Abstract:
ObjectiveToexplore
theantipyreticeffectsofHaojiaXureqinggranulesandthemechanismoftheantipyretic
effects.MethodsRabbitmodelofextremeheatduetodeficiencyofyinandratfevermodel
inducedbysubcutaneousinjectionofbeeryeastsuspensionwereused,theantipyreticof
HaojiaXureqinggranuleswasobserved,andvariationsofcAMPlevelinhypothalamuswas
determinedwithradioimmunoassay.ResultsIntragastricadministrationwithHaojiaXureqing
granulesshowedobviousinhibitiveeffectsontemperatureelevationintherabbitmodelof
6
extremeheatduetodeficiencyofyinandratfevermodelinducedbysubcutaneousinjection
ofbeeryeastsuspension,andinhibitedtheincreasingofcAMPlevelin
hypothalamus.ConclusionHaojiaXureqinggranuleshadsignificantantipyreticeffects,andthe
mechanismmightberelatedtothegenerationandreleaseofcAMPinhypothalamus.
HaojiaXureqinggranules;
antipyreticeffects;
蒿甲虚热清颗粒是根据《温病条辨卷三下焦篇》中青蒿鳖甲汤的改良剂型。
该药由
青蒿、醋鳖甲、石斛、生地、知母、葛根、丹皮、甘草等8味药材组成，具有清热、
养阴、透邪等功效，主治瘟病后期，阴液损伤、阴虚邪伏之证，是治疗瘟病后期阴虚
发热的代表方剂[1]。
前期的研究表明，该药对阴虚小鼠模型有明显的影响（另文发
表），本文选用家兔阴虚热盛模型和啤酒酵母致热大鼠模型，研究蒿甲虚热清颗粒的解
热作用及机制，以期为临床应用蒿甲虚热清颗粒治疗阴虚热盛证发热提供依据。
1试验材料
1.1药物及试剂
蒿甲虚热清颗粒（4g/袋，每袋含丹皮酚6mg、葛根素12mg，批号：
20080401，由
广东药学院药物研究所提供）;
阳性对照药：
小柴胡颗粒（广州光华药业股份有限公司，
7
批号：
K24802）;
速尿注射液（20mg/支，江苏武进制药厂生产）;
大肠杆菌内毒素工作标准
品（8EU/mL，批号：
20080518，湛江海洋生物制品厂生厂）;
啤酒酵母（500g/包，安琪酵
母股份公司生产，批号：
20080912）;
cAMP放免试剂盒（上海中医药大学同位素室）。
1.2动物
SPF级SD大鼠、普通级新西兰兔，由广东省医学实验动物中心提供，生产许可证
号:
SYXK（粤）2003?
0002,正常饲养3d后供试。
1.3仪器
TSN?
695B型放免测量仪（上海原子核所日环仪器厂）。
2方法
2.1对家兔阴虚热盛证模型的影响[2]
新西兰兔48只，体质量2.0～2.5kg，雌雄各半。
实验室温度23～25℃，实验前2
8
d先测兔肛温，每隔15min测1次，连续3次，以每天体温波动不超过0.2℃、基础
体温均值为38.7～39.3℃的动物供试验用。
实验前18h开始禁食禁水，实验当日先测
动物体温2次（波动不超过0.2℃），作为基础体温，自家兔耳缘静脉注射速尿，剂量为
2.5mL/kg，1h后再注射等量的速尿，2h后耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素4Eu/kg（0.5
mL/kg）。
选取注射大肠杆菌内毒素0.5h后体温上升超过0.5℃家兔40只，随机分为
5组:
（A）大肠杆菌内毒素+生理盐水对照组;
（B）大肠杆菌内毒素+柴胡冲剂组;
（C）大肠杆
菌内毒素+蒿甲虚热清颗粒低、中、高剂量组，各组家兔灌胃给予相应药物，正常对照
组给予等容量生理盐水，给药后于0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0h各测定兔体温，以给
药前家兔体温平均值为基础体温，计算各测定时间点家兔体温的变化。
2.2对大鼠背部皮下注射啤酒酵母混悬液致热实验的影响[3]
取SD大鼠，雌雄各半，实验室温度23～24℃，实验前2d将温度计插入肛门内2
cm，每日测定体温1次，连续3d，使大鼠适应测体温操作。
选取体温36.6～38.3℃
之间，体温波动在0.2℃以内者，测定给药前体温，随后皮下注射10%（）啤酒酵母混
悬液（用质量分数0.5%CMC?
Na配制），给药容积为10mL/kg，5h后测定体温1次，选
择体温升高1℃以上者作为实验对象，然后随机分成5组:
（A）啤酒酵母混悬液+生理
盐水对照组;
（B）啤酒酵母混悬液+柴胡冲剂组;
（C）啤酒酵母混悬液+蒿甲虚热清颗粒
低、中、高剂量组，立即灌胃给予相应的药物，给药容积为5mL/kg，生理盐水对照组
给予等量的生理盐水，测定给药后1.0、2.0、3.0、4.0、5.0h大鼠体温，以给药前大鼠
体温平均值为基础体温，计算各测定时间点大鼠体温的变化。
9
2.3对酵母致发热大鼠下丘脑cAMP含量的影响[4]
取SD大鼠，雌雄各半，实验室温度、啤酒酵母混悬液的使用及体温测量方法同
2.2。
选择体温升高1℃以上大鼠40只，随机分成4组，即模型组、模型组+蒿甲虚
热清颗粒高、中、低剂量组，并另取体温正常大鼠10只作为正常对照组。
每组灌胃给
予相应的药物，给药容积为5mL/kg，正常对照组给予等量的生理盐水，给药2h后测
体温，记录并比较各组间体温变化值（T=药后2h体温-基础体温）。
然后快速断头取全
脑，在冰浴下于灰结节和视交叉之间的中心点取出下丘脑，按cAMP放免药盒说明书
操作步骤处理下丘脑组织并测定cAMP的含量。
2.4统计学处理
采用SPSS12.0软件,计量资料以（s）表示，采用单因素方差分析，相关分析用直线相
关分析法,以P0.05为差异有显著性。
3结果
10
取黄芪中黄芪多糖提取液用紫外分光光度计于490nm下测出吸光度A，代入回归方
程及以下公式，即可计算出黄芪中黄芪多糖的提取率。
提取率（%）=CV10-3W100%
式中：
C为黄芪多糖提取液浓度（mgmL-1），V为定容体积（mL），W为黄芪药粉质量
（g）。
2.5酶解条件的确定
2.5.1考察酶解时间对提取率的影响称取黄芪粉1g，进行酶解试验。
酶解温度为50
℃，料液比为1∶20，酶量为8mg，根据文献[4]选择pH=4.5，考察不同酶解时间对提
取率的影响。
当酶解时间为30、60、90、120、150min时，提取率分别是19.05%、
21.75%、22.31%、22.13%、20.82%。
在考察范围内随着酶解时间的增加，黄芪多糖的
提取率呈先上升后下降的趋势。
为节省时间，选择酶解时间为60min。
2.5.2考察酶解温度对提取率的影响称取黄芪粉1g，进行酶解试验。
酶解时间60
11
min，料液比为1∶20，酶量为8mg，pH=4.5。
当酶解温度分别为30、40、50、60、
70℃时，提取率分别是19.01%、22.01%、23.84%、22.39%、21.08%。
随着酶解温度
的增加，黄芪中多糖的提取率呈先上升后下降趋势，50℃时提取率最高。
因此本实验
选择酶解温度为50℃。
2.5.3考察酶用量对提取率的影响（见2.6）
2.6单因素实验
取黄芪约1g，精密称取，加入缓冲溶液和一定比例的酶，按2.5项下确定的酶解
条件（酶解时间60min，酶解温度50℃，pH=4.5），在不同条件下进行提取，滤过，按
2.3项下方法测定其吸光度，以考察超声提取时间、超声提取温度、固液比及酶用量对
黄芪总多糖提取率的影响，结果见图1。
2.7正交试验
根据单因素试验结果，设计了四因素三水平正交试验，结果见表1、表2、表3。
由表2可以看出，在影响超声酶法提取黄芪多糖的四个因素中，影响黄芪多糖提取
12
率的大小次序先后为超声提取时间超声提取温度酶量固液比，超声提取时间影响最
大，固液比影响最小。
各因素的优化工艺参数为A2B2C2D3，即超声时间30min、超
声温度40℃、固液比1∶20、酶量10mg。
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