菌落总数实验报告Word格式文档下载.docx
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2011年8月8日
菌落总数的检测
一、实验目的
为了进一步了解与熟悉我们产品的操作规范和关键点的控制，掌握菌落总数的检验方法和了解超净工作台的操作规范。
二、实验仪器设备和所需试剂及试剂的配制。
1、实验仪器及设备
杀菌锅YXQ—LS—SU编号5090、无菌超净工作台SW—CJ—IC编号24、JJ-Z型组织捣碎机、隔水或智能恒温培养箱GHP—9080、出厂编号13475、烘箱ZFD—5040（全自动型鼓风干燥箱）、蒸馏水制备机、灭菌过的250ml锥形瓶、1ml吸量管、10ml的吸量管、酒精灯、锥形瓶1000ml、培养皿、电子天平AL104、电磁炉、锅、锅铲、PH试纸、恒温水浴锅HH—4出厂标号160.53。
2、试验试剂及配制
2.1主要试剂：
琼脂、无菌生理盐水、无菌水、75%的酒精、1moL/L氢氧化钠、1moL/L的盐酸。
2.2药品试剂
2.21琼脂：
准确称取12.5g胰蛋白胨、酵母浸膏7.5g、葡萄糖3.0g、琼脂37.5g、蒸馏水2500ml，加入至锅中煮沸溶解，先加入琼脂将其熬化，在加入其它样品，直至样品熬化即可关掉火，冷却后调解PH值（7.0左右即可）。
酸性用氢氧化钠调节、碱性用盐酸进行调节，将在1200C高压灭菌15min即可。
2.22无菌生理盐水：
准确称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中。
2.23无菌水：
吸取1000ml的蒸馏水，将在1200C高压灭菌15min即可。
2.241moL/L氢氧化钠：
称取40g的氢氧化钠溶于1000ml的蒸馏水中在1200C高压灭菌15min即可。
2.4575%的酒精：
分别吸取400ml的95%的无水乙醇和100ml的蒸馏水与500ml的容量瓶中。
2.461moL/LDE盐酸：
移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml，在1200C高压灭菌15min即可。
三．试验步骤
1、样品的稀释
1.1固体和半固体样品：
称取25g样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:
10的样品匀液。
1.2液体样品：
以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:
36℃±
1℃48h±
2h.
2、检样与接种：
25g（ml）样品+225ml稀释液，均质，10倍系列稀释选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内。
2.1用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1:
10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:
100的样品匀液。
2.2.按上述操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。
每递增稀释一次，换用1次1ml无菌吸管或吸头。
12.2.根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1ml样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。
同时，分别吸取1ml空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。
3、倒平板：
在酒精灯开着的条件下进行到培养皿的3分之一即可，而其中琼脂的温度需要在46℃即可倒入琼脂，不然会影响其细菌的生长繁殖。
平板计数琼脂培养基，混匀.
4、培养：
待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±
1℃培养48h±
2h。
水产品30℃±
1℃培养72h±
3h。
如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4ml），凝固后翻转平板，
5、报告
6.菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。
6.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
6.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；
若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
6.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
7结果与报告
7.1菌落总数的计算方法
7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式
（1）计算：
N=∑C/（N1+0.1n2）d…………………………
（1）
式中：
N——样品中菌落数；
ΣC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；
n1——第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；
n2——第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；
d——稀释因子（第一稀释度）。
上述数据按7.2.2数字修约后，表示为25000或2.5×
104。
7.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可
记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
7.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.1.5若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
7.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
7.2菌落总数的报告
7.2.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
7.2.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；
也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。
7.2.4若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
7.2.5称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
四、数据处理及结果计算
一、乐棒棒菌落总数的数据分析
稀释倍数
平板个数
空白
1细菌菌落数
2细菌菌落数
3细菌菌落数
10
37
39
38
100
5
8
1000
若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
所以：
N=37+38+39/3×
N=380个/g
二、奇爽菌落总数的数据分析
1
2
3
267
281
295
44
34
29
4
6
若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式
（1）计算：
N=267+281+295+44+34+29/（3+0.1×
3）×
N=2879个/g
三、香猪脆菌落总数的数据分析
结果1
57
60
12
感杂
所以：
N=57+60+34/3×
N=503个/g
结果2
N=36+35+12/3×
N=243个/g
四、夸夸唔菌落总数的数据分析
452
336
650
53
118
84
15
7
N=53+118+84/3×
N=8500
五、有友菌落总数的数据分析
只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（ml）样品中菌落总数结果。
N=1+7+3/3×
N=33个/g
六、香脆肚菌落总数的数据分析
131
444
376
158
121
136
43
47
55
N=158+121+136+43+47+55/【3+0.1×
3】×
10-1
N=16969
五、数据分析。
通过一系列的实验论证表明：
自己的贴牌产品的菌落总数含量较高，而其中香脆肚的菌落总数的含量更高，而泡椒风爪的菌落总数都控制的都较好。
因此，在以后的生产过程中药控制好贴牌产品的环境和杀菌效果。
菌落总数对环境的要求较高需要在无菌的条件下进行，以免被污染。
在倒平板时要注意琼脂的温度，温度控制在46℃左右。
还有在放入培养箱之前要将凝固好的琼脂倒置，以免水蒸气影响其结果。
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