色谱柱故障排除及维护手册.docx
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色谱柱故障排除及维护手册
目录
1目的1
2适用范围2
第一章：
气相色谱柱2
1.气相色谱柱介绍2
1.1聚硅氧烷2
1.2聚乙二醇3
2气相色谱柱选择3
2.1相似相溶原理是首要指导方针3
2.2特殊样品需要用特殊柱子分析4
2.3必要时需用不同极性的柱子对目标物进行对比分析4
2.4色谱柱参数对分离的影响4
3气体系统5
3.1气源纯度选择5
3.2气体过滤器的使用与更换5
3.3气体管路的材质与检漏6
4色谱柱的安装6
5气相色谱柱的清洗6
6气相色谱柱的老化7
7气相色谱柱的保存7
8色谱柱污染8
9毛细管色谱柱常见问题的解决8
9.1峰丢失（进样后没有峰出现）的原因：
8
9.2前沿峰的原因：
9
9.3拖尾峰的原因：
9
9.4只有溶剂峰的原因：
9
9.5宽溶剂峰的原因：
10
9.6假峰的原因：
10
9.7过去工作良好的柱出现未分辨峰的原因：
10
9.8基线不规则或不稳定的原因：
10
9.9同一根柱保留时间长短不一的原因：
11
1色谱柱的类型11
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶、离子交换树脂、凝胶或玻璃微球等填充剂。
在化学键合硅胶中以十六烷基硅烷键合硅胶最常用,辛基硅烷键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用。
近年来,由于蛋白质等生物大分子物质分离提纯技术的飞速发展,离子交换色谱柱、凝胶色谱柱的应用也越来越广。
11
3.2高效液相色谱柱的选择12
3.2.1申购前怎样选择填料粒度12
3.2.2如何保证良好的柱性能与柱寿命要做到以下几点：
12
4色谱柱的管理13
每一根新购进的色谱柱必须造册登记,内容包括:
生产公司、品名、型号、规格、购进时间、启用时间、单价、柱内保护溶液等。
13
每启用一根新色谱柱,在色谱柱上贴上标签,注明启用日期。
每根柱子每两个月保养一次,特别是对于一些使用频率少的柱子,因为放置时间长,容易干柱,每一次做好保养记录。
13
对于确已失效的柱子,做好停用记录,不能随意丢弃,专门存放,如果现用的柱子的填料需要填补,只要柱子类型相同，可以用存放的柱子的填料修复有缺陷的色谱柱。
13
4.1建立HPLC色谱柱的技术档案13
4.2色谱柱到货验收13
4.3新色谱柱注意事项14
5影响色谱柱使用寿命的因素14
5.1样品的制备与预处理。
14
5.2选用合适的流动相14
5.3正确操作HPLC仪器。
15
6色谱柱的维护和保养16
6.1色谱柱的安装与拆卸16
6.2色谱柱的维护与平衡17
6.3色谱柱清洗、再生和保养18
6.3.1液相色谱柱清洗18
6.3.2高效液相色谱柱的再生19
5.3.3色谱柱的保存20
6色谱柱的故障排除21
6.1液相色谱柱常见问题的解决21
6.2柱塌陷的处理24
7色谱柱使用的注意事项25
8保护柱的选择使用26
色谱柱故障排除及维护手册
1目的
在高端仪器检测分析过程中，色谱柱是关键部件之一，在分析中起着至关重要的作用，它是色谱仪器的核心。
在分析中峰形的对称性会直接影响到定量的准确性。
正确使用、维护色谱柱，不但能保证色谱分离与分析高效、高灵敏和快速进行，提高准确性与重现性，而且对延长色谱柱的寿命、保持长期稳定的工作具有重要的作用，因此，延长色谱柱的寿命无疑对节省投资、降低成本有重大意义。
更便于各实验室对色谱柱的管理、使用、故障及时排除等查阅使用。
2适用范围
本手册适用于具备液相、气相类仪器的实验室。
第一章：
气相色谱柱
1.气相色谱柱介绍
通常来说，一根毛细管色谱柱由两部分组成：
管身和固定相。
管身一般使用熔融二氧化硅或不锈钢作为基本材质：
而固定相种类就有许多了。
大部分的固定相是液体或胶状的高分子量，具有高热稳定性的聚合物，最常用的是聚硅氧烷（有时误称为硅氧烷）和聚乙二醇，另外还有一类是小的多孔粒子组成的聚合物或沸石（例如氧化铝、分子筛等）。
色谱柱管熔融二氧化硅即高纯度合成石英（以下通称熔融石英），通常在其表面涂上一层聚酰亚胺做为保护层。
涂层后的熔融石英毛细管呈褐色：
但是涂层后的毛细管之间的颜色却不尽相同。
色谱柱的颜色对于其色谱性能没有什么影响。
经过持续的较高温度处理后．聚酰亚胺涂层管的的温度会变得比以前更深：
标准的聚酰亚胺涂层管熔融石英管的温度上限为360℃，高温聚酰亚胺涂层管的温度上限为400℃。
1.1聚硅氧烷
聚硅氧烷在其用途的多用性、性质的稳定性上都有优良的表现也是目前最为常用的固定相。
标准的聚硅氧烷是由许多单个的硅氧烷重复联接构成：
每个硅原子与两个功能基团相连，功能基团的类型和数量决定了固定相总体类型和性质常见的四
种功能基团为甲基、氰丙基、三氟丙基和苯基。
最基本的聚硅氧烷是由100%甲基取代的。
1.2聚乙二醇
聚乙二醇是另外一类广泛应用的固定相。
有些我们称之为“WAX”。
聚乙二醇不象聚硅氧烷那样有多种取代集团，它是100%固定基质的聚合物。
相对于聚硅氧烷，聚乙二醇固定相色谱柱的寿命较短，而且容易受温度和环境（有氧环境等）的影响。
另外，聚乙二醇固定相在相应的GC实验条件下需保持液态。
但由于其独特的分离性能，聚乙二醇仍是我们常用的固定相之一。
常用的聚乙二醇GC固定相有两种，一种是能在较高温度下使用的，但是它的活性相对较高一些（也就是说有些化合物的色谱峰会有拖尾现象）。
另一种的使用温度上限较低，温度下限也较低，但使用中所表现出的再现性和惰性比上一种要好。
在分离指数上，上述两种固定相有轻微的差异。
还有一种是pH阳离子改性聚乙二醇固定相。
FFAP柱就是一类用对苯二甲酸改性的聚乙二醇作为固定相的。
这种色谱柱常用于分析分离酸性化合物。
另外，我们也用碱性化合物对聚乙二醇固定相改性用来分析分离碱性化合物（CAM）。
2气相色谱柱选择
目前，市场上出售的商品毛细管柱品种、规格、牌号繁多，这给使用毛细管柱的分析人员带来一定困难。
其实各供应商产品相互可以替代，不一定要追求某一特定的商品牌号。
色谱柱的选择是整个色谱分析条件优化过程中最重要的一环，色谱柱选择得是否恰当直接决定了分析结果的准确性、数据的重现性、峰型的美观等等。
目前，气相色谱中使用的色谱柱分为填充柱和毛细管柱两大类。
从使用范围来看，毛细管柱更广泛一些，但并不意味着填充柱不重要，比如一些永久性气体的分析、水分的测定等还必须用填充柱来做。
简单说就是各有各的应用范围。
下面简述毛细管柱使用时的一些注意事项。
2.1相似相溶原理是首要指导方针
在选择柱子的时候根本的原则是相似相溶，简单说就是分析非极性物质用非极性的柱子，分析极性物质用极性的柱子。
相似相溶的道理比较简单，被分析物和固定液之间作用的次数越多，理论塔板数就越大，柱效也就越高，有助于难分离组分的分离，同时峰的对称性也较好；如果被分析物和固定液之间没有作用力，或者作用力很弱，即几乎不保留，这时几乎不可能有分离，所有组分都死时间出峰，这不是我们的目的。
因此，选择柱子一定要先对分析物的极性有个大致的判断，根据相似相溶的基本原理进行选择。
选择不当结果差异很大。
2.2特殊样品需要用特殊柱子分析
在为很多新项目研发做分析工作时，经常会遇到一些奇特的样品，根本没有任何标准可以参考，都得自行摸索。
经常会遇到一些常用柱子无法分析的项目，比如胺类物质、杂环化合物等等。
由于这些物质多少都有碱性，对常规柱子伤害较大，且做出来的结果可靠性、峰型等不确定因素较多，因此对这类样品应该选择针对性较强的柱子。
此时选择柱子最好的办法就是多查阅相关资料、文献，再加上适当的实验摸索，才能选到合适的分析柱。
2.3必要时需用不同极性的柱子对目标物进行对比分析
对于多组分的反应液，仅仅靠一根柱子，存在有些杂质和目标峰没有分开（或者完全包在主峰里面）的问题，因此采用不同极性柱分析，做出来的结果进行对比可以有效地避免类似的情况发生。
如果二者不一致，需结合其他定性手段综合分析，决定柱子的选择。
这需要多摸索、多实践、多积累来完成。
2.4色谱柱参数对分离的影响
毛细管色谱柱的参数主要包括四个方面:
固定液极性、柱长、内经、膜厚等。
根据固定液极性的强弱可以分为非极性柱（DB-1或者等同的其它品牌）。
弱极性柱（DB-5或者等同的其它品牌）、中等极性柱（DB-17或者等同的其它品牌）、强极性柱（DB-WAX或者等同的其它品牌）。
在选择柱子的时候应该根据样品本身极性的强弱依据相似相溶原理进行选择。
对于非极性物质，一般选用非极性固定液。
此时各组分按沸点顺序分离,沸点低的先流出。
同系物则按碳数顺序流出,低沸点或低分子组分先流出。
对于中等极性物质选用中等极性固定液。
组分基本上按沸点顺序流出。
若是极性与非极性的混合物,则非极性组分先流出。
对于强极性物质，通常选用强极性固定液。
各组分流出顺序按极性大小排列，极性小的先流出，极性大的后流出。
柱长对分离的影响也很明显通常柱子越长，分离效果越好，但是保留时间增加的也很明显，这本身是个矛盾，需要找到一个平衡点。
对于特别难分离的物质，一般可以选用长柱子。
内径对柱容量和柱效有较大的影响，内径越小，柱效会变高，但柱容量会下降，这个参数选择的空间不是很大。
膜厚是一个选择空间比较大的参数，通常膜厚越厚，对分析物的保留会增加，保留时间增大，有助于分离；但是由于传质阻力的增加，柱效会降低。
因此，如果分析的是保留弱的物质（比如一些小分子），可以考虑厚液膜的柱子；反之则选择薄液膜的柱子。
3气体系统
3.1气源纯度选择
选择气体纯度时，主要取决于三个因素：
分析对象、色谱柱类型、检测器类型，即：
微量分析比常量分析要求高，毛细管柱比填充柱要求高，浓度型检测器比质量型检测器要求高。
火焰离子化检测器（FID）、电子捕获检测器（ECD）的载气（氮气）纯度≥99.998%，燃气氢气的纯度≥99.995，助燃气空气的纯度达到呼吸级。
一般建议在满足分析要求的前提下，尽可能选择纯度较高的气体。
安捷伦、瓦里安等厂商均提出使用纯度≥99.999%高纯气体的建议，以保持仪器的灵敏度及延长色谱柱寿命。
3.2气体过滤器的使用与更换
通常建议在FID的载气和尾吹气、空气和氢气管线上安装烃类过滤器，在ECD的载气和尾吹气管线上安装氧气和水分过滤器。
气体过滤器的安装位置离色谱仪越近越好，各种过滤器的安装顺序次为：
水分过滤器、烃类过滤器、氧气过滤器。
气体过滤器应适时更换，以免成为污染源。
3.3气体管路的材质与检漏
塑料管线通常存在渗漏问题，所以最好采用质量可靠的铜管或不锈钢管，并定期用体积比为1:
1的异丙醇水溶液检查管线接头。
安装新管线后，先用高纯氮吹扫，再接气体过滤器。
4色谱柱的安装
气相色谱柱安装色谱柱时应正确选择密封压环的材质及其孔径。
ECD必须使用石墨/聚酰亚胺混合的密封压环。
内径为0.5、0.32和0.53mm的色谱柱分别选择孔径规格为0.4、0.5和0.8mm的密封压环。
切割色谱柱时，确保切割面平整，不可出现斜切面或锯齿面。
每次更换不同规格尺寸的色谱柱后，务必在仪器控制面板上设定安色谱柱长度和孔径参数，然后按enter键，等待仪器重新初始化后数值得以更新。
王珂等报道说,由于实际使用的色谱柱内径为250um，而仪器控制面板上的设定值为320um，导致色谱峰保留时间改变、重复性变差。
5气相色谱柱的清洗
首先，污染的气相色谱柱最容易的补救方式是通过切除前端盘绕的色谱柱（大约50cm）。
如果污染物位于柱子前端，那么色谱柱的性能会立即得到改善。
如果柱性能没有得到改善，则可以判定污染物没有位于柱子的前端。
气相色谱柱固定相如果是化学键合性质的也可以进行溶剂冲洗，色谱柱是安全的。
并不破坏键合型固定相。
不过，要避免在Carbawax或DB-Wax这样的腊质性固定相上用甲醇和水作溶剂冲洗。
最佳方式是采用一组溶剂依次进行柱冲洗。
通常，最佳溶剂组为10ml甲醇，10ml二氯甲烷和10ml正己烷溶剂。
如果必须用水去除盐类的话，那么在用甲醇冲洗之前，先用10ml水进行冲洗。
冲洗的方式是按照正常载气流速的反方向，从检测器端至进样口端方向进行冲洗。
在所有冲洗结束之后，色谱柱重新使用之前，要用氮气通过柱子吹干30min-40min。
在柱子加温之前，要用载气慢速吹干以防止损害固定相。
目前，这种柱冲洗装置已市场销售，其价格不比一根新色谱柱贵。
冲洗柱子是去除污染物的最佳方式，但一般情况下，绝大多数人还喜欢选择高温老化方式去除柱内污染物。
因为高温老化比较简便，因此也是一种去除污染物的有效方法。
不过应注意，高温老化色谱柱也不是经常有效的，因为它仅仅去除挥发性和半挥发性组分。
如果污染物粘附在进样口或污染物是非挥发性的，那么长期高温老化色谱柱则难以解决这一问题
6气相色谱柱的老化
老化色谱柱时，在50℃通载气20分钟，再以5℃/min缓慢升温至老化温度，恒温2小时。
一般老化2～3遍即可，旧色谱柱老化时，进样有机溶剂有利于残留组分的流出。
色谱柱的老化温度一般为高于样品分析终温20℃，但不超过色谱柱的恒温上限。
老化色谱柱时，勿将柱末端接在检测器上，检测器用无孔螺帽封堵。
FID允许接色谱柱老化，但检测器温度必须升至300℃方可运行老化程序。
7气相色谱柱的保存
高温、载气中微量的水汽和氧、化学损伤、被污染是影响柱寿命的主要因素。
要延长色谱柱的寿命，应尽量使用高纯度气源、安装并定期维护气体捕集阱、对管线定期检漏、开机时在色谱柱低温状态下通载气20分钟；选用优质的密封材料；在满足要求的情况下选择较低的使用温度；样品处理要“干净”，减少高沸点杂质组分；分析比较“脏”的样品时使用预柱或选择填有玻璃棉的衬管；色谱柱长期不用时，从仪器上拆下并封堵两端保存，同时标注色谱柱的进样口端或检测器端。
8色谱柱污染
尽管固定相的化学损伤是不可补救的，但在实际中可以去除绝大多数污染物，使色谱柱获得功能性恢复。
通常，色谱工作者涉及两种类型污染，第一种不能洗脱的非挥发性物质；第二种最终能从柱子洗脱出来的半挥发性物质。
柱子污染的症状为，产生吸附，出现鬼峰、脱尾峰、前延峰，发生分解，造成柱固定相过度流失和柱选择性改变。
潜在的污染源包括：
注射的样品、橡胶隔膜和金属垫碎屑、载气和捕集器中杂质以及其它来自外部如器皿和注射器中的杂质。
污染的气相色谱柱的功能恢复有一些容易解决的方法。
首先，也是最容易的补救方式是通过切除前端盘绕的色谱柱（大约50cm）。
如果污染物位于柱子前端，那么色谱柱的性能会立即得到改善。
如果柱性能没有得到改善，则可以判定污染物没有位于柱子的前端，下一步骤就是清洗进样系统。
进样口石英衬管将是造成柱子污染的主要原因，要及时更换清洗。
如果进样口石英衬管没有污染，而且污染物又不位于柱子的前端，那么，可以判定整个柱子的固定相遭到严重污染。
气相色谱柱冲洗柱子通常需冲洗装置和有经验者进行，此处不做描述。
一般情况下，绝大多数人还喜欢选择高温老化方式去除柱内污染物。
因为高温老化比较简便，因此也是一种去除污染物的有效方法。
不过应注意，高温老化色谱柱也不是经常有效的，因为它仅仅去除挥发性和半挥发性组分。
如果污染物粘附在进样口或污染物是非挥发性的，那么长期高温老化色谱柱则难以解决这一问题。
事实上，高温老化色谱柱所带来的弊病远远大于解决这一问题获得的好处。
如果污染物是活性和非挥发性的，那么长期高温老化色谱柱则会缩短柱子的使用寿命。
9毛细管色谱柱常见问题的解决
9.1峰丢失（进样后没有峰出现）的原因：
（1）注射器有毛病，采用新注射器做验证；
（2）未接入检测器或检测器不起作用，检查设定值；
（3）进样温度太低，检查温度，并根据需要调整；
（4）柱温温度太低，检查温度，并根据需要调整；
（5）无载气流量，检查压力调节阀，并检查泄露，验证柱样品流速；
（6）柱断裂，如果柱断裂是在柱进样口端或检测器末端，是可以补救的，切去断裂部分，重新安装。
9.2前沿峰的原因：
（1）柱超载，减少进样量；
（2）两个化合物共洗脱，提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20℃，以使峰分开；
（3）样品冷凝，检查进样口和柱温，如有必要可以升温；
（4）样品分解，采用失活化进样器衬管或调低进样器温度。
9.3拖尾峰的原因：
（1）进样器衬套或柱吸附活性样品：
更换衬套。
如解决不了就将柱进样端截1~2cm，再重新安装；
（2）柱或进样器温度太低：
升温（不要超过柱最高使用温度）。
进样器温度应比样品最高沸点高20℃；
（3）两个化合物共洗脱：
提高灵敏度和减少进样量，使温度降低10~20℃，以使峰分开；
（4）柱已损坏：
请更换柱；
（5）柱污染：
将柱进样端截去1~2cm，再重新安装。
9.4只有溶剂峰的原因：
（1）注射器有毛病：
采用新注射器验证；
（2）不正确的载气流速（太低）：
检查流速，如有必要，调整之；
（3）样品浓度太稀：
请提高仪器灵敏度，或增加注入量；
（4）柱箱温度太高：
检查温度并根据需要调整；
（5）柱不能从溶剂中分离出组分：
更换高膜厚的色谱柱或不同极性；
（6）栽气泄露：
检查泄露处（肥皂水）；
（7）进样器衬套或柱吸附活性样品：
更换衬套。
如解决不了就将柱进样端截去1~2cm，再重新安装。
9.5宽溶剂峰的原因：
（1）由于柱子安装不当，在进样口产生死体积：
重新安装柱；
（2）进样技术差（进样太慢）：
采用快速平稳进样技术；
（3）进样器温度太低：
提高进样器温度；
（4）样品溶剂与检测相互影响{二氯甲烷/ECD}：
更换样品溶剂。
（5）柱内残留样品溶剂：
调整或清洗；
（6）隔垫清洗不当：
调整或清洗；
（7）分流比不正确{分流排气流速不足}：
调整流速。
9.6假峰的原因：
（1）柱吸附样品，随后解吸：
更换衬管，如不能解决问题，就从柱进样口端去掉1~2圈，再重新安装；
（2）注射器污染：
用新的注射器及干净的溶剂试一试，如假峰消失，就将注射器冲洗几次；
（3）样品进样量太大：
减少进样量；
（4）进样技术太差、进样太慢：
采用快速平稳的进样技术。
9.7过去工作良好的柱出现未分辨峰的原因：
（1）柱温不对：
检查并调整温度；
（2）不正确的载气流速：
检查并调整流速；
（3）样品进样量太大：
减少样品进样量；
（4）进样技术水平太差（进样太慢）：
采用快速平稳进样技术；
（5）柱和衬套污染：
更换衬套，如不能解决问题，就从柱进口端去掉1~2圈，并重新安装。
9.8基线不规则或不稳定的原因：
（1）柱流失或污染：
更换衬套。
如不能解决问题，就从柱进口端去掉1~2圈，并重新安装。
（2）检测器或进样器污染：
清洗检测器和进样器;
（3）载气泄露：
更换隔垫，检查柱泄露;
（4）载气控制不协调：
检查载气等气源压力是否充足。
如压力≦500psi，请更换气瓶;
（5）载气有杂质或气路污染：
更换气瓶，使用载气净化装置清洁金属管;
（6）载气流速不在仪器最大/最小限定范围之内（包括FID用氢气和空气）：
测量流速，并根据使用手册技术指标予以验证;
（7）检测器出毛病：
参照仪器使用手册进行检查;
（8）进样器隔垫流失：
老化或更换隔垫。
9.9同一根柱保留时间长短不一的原因：
（1）柱温太低或太高，检查冰并调节柱温;
（2）载气流速太高或太低，在柱出口处用适当的，经标定气源测量流速;
（3）进样器隔垫或柱泄露，如必要，请检查并修复;
（4）柱污染或损坏，重新老化或换柱;
（5）样品超载，减少进样量;
（6）记录仪出毛病，检查记录仪;
（7）载气控制不协调，检查载气源，看压力是否足够,如压力≦500psi，请更换气瓶。
第二章：
液相色谱柱
1色谱柱的类型
常用的色谱柱填充剂有硅胶和化学键合硅胶、离子交换树脂、凝胶或玻璃微球等填充剂。
在化学键合硅胶中以十六烷基硅烷键合硅胶最常用,辛基硅烷键合硅胶次之,氰基或氨基键合硅胶也有使用。
近年来,由于蛋白质等生物大分子物质分离提纯技术的飞速发展,离子交换色谱柱、凝胶色谱柱的应用也越来越广。
3.2高效液相色谱柱的选择
3.2.1申购前怎样选择填料粒度
目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。
粒度越小，填充柱的柱效越高；在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，但不是唯一的因素。
如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料是很有用的，3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30％；然而，3um的色相谱的背压却是5um的2倍。
3.2.2如何保证良好的柱性能与柱寿命要做到以下几点：
（1）认证阅读色谱柱使用说明书；
（2）使用填充良好的色谱柱；
（3）尽量减少压力波动，避免机械及热冲击；
（4）使用保护柱及在线过滤器；
（5）经常以强溶剂冲洗色谱柱；
（6）充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分；
（7）用稳定的固定相（C18最稳定）；
（8）在中等PH值操作（6～8），用有机缓冲溶液；
（9）色谱柱使用温度最好小于40℃；
（10）硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0—8.0；
（11）在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠；流动相中含有缓冲溶液，应注意应95：
5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5％；
（12）过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（乙晴最好）。
4色谱柱的管理
每一根新购进的色谱柱必须造册登记,内容包括:
生产公司、品名、型号、规格、购进时间、启用时间、单价、柱内保护溶液等。
当我们接到一根新的色谱柱时，使用前应先检查产品包装、外观是否完好，是否配备产品说明书或性能测试报告。
认真阅读产品说明书及性能测试报告，了解新柱子的最佳性能指标，如某色谱条件下的柱压、柱效等；了解使用范围及最佳适用的实验条件，并建立该色谱柱的技术档案。
每启用一根新色谱柱,在色谱柱上贴上标签,注明启用日期。
每根柱子每两个月保养一次,特别是对于一些使用频率少的柱子,因为放置时间长,容易干柱,每一次做好保养记录。
对于确已失效的柱子,做好停用记录,不能随意丢弃,专门存放,如果现用的柱子的填料需要填补,只要柱子类型相同，可以用存放的柱子的填料修复有缺陷的色谱柱。
4.1建立HPLC色谱柱的技术档案
色谱柱的技术档案包括：
生产厂家、柱编号、填料类型、购进时间、启用时间、保护液名称等。
厂方提供的性能测试报告。
诸如生产日期填料名称、粒度、形状、表面积、孔穴直径柱管材料及尺寸、柱效、以及测定柱效用的样品组成与色谱分离条件，计算公式及附带的色谱图等。
4.2色谱柱到货验收
通常根据厂方提供的技术指标在同样的色谱条件下，采用相同的样品与浓度进行测试，观察实测结果是否与厂方提供数据吻合。
若检验合格，实测数据是今后使用过程中柱性能是否下降的基准；若检验不合格，那么实测数据是与厂方交涉的重要技术依据。
如果没有厂家说明书（证书）指定的样品时，可使用具体检测项目的标准品进行验收色谱柱，判定标准？
验收过程中一定要记录保存色谱柱的一些性能指标，如柱效、柱压、死体积V等，供今后参考。
4.3新色谱柱注意事项
新柱有时分析用的流动相与柱子的保存试剂不同，故在分析样品之前，应使用合适的试剂将柱子中的保存试剂清洗出来，要注意清洗用的流动相与保存溶剂的相溶性。
反相C18柱通过出厂测试后多保存在乙腈中，可用10～20倍柱体积的甲醇或乙腈来平衡色谱柱。
流速要缓慢提高，如开始0.3～0.5mL／min，1O～15min后可慢慢加快。
硅胶柱和极性色谱柱通过出厂测试后一般保存在正庚烷中。
如果分析时需要使用含水的流动相，则使用前须用乙醇或异丙醇冲洗，流速0．1～0．3mL／min，将正庚烷
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