丹参的多种鉴别方法Word下载.docx
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药用其根,因其根皮赤而肉紫且形状似参而得名“丹参”。
丹参作为传统中药在我国沿用已久,我国最早的药书《神农本草经》即收载有丹参,列为上品,中医理论认为丹参有祛淤止痛,活血通经,清心除烦之功效。
1 丹参形态学鉴别
1.1 植物学特性鉴别传统方法大多根据丹参的形态方面对药材的真伪进行别。
丹参为多年生草本,根砖红色,茎高40~80cm,多分枝,被长柔毛。
叶常为奇数羽状复叶。
叶柄长1~7cm,小叶3~7,顶端小叶较大。
小叶卵形或椭圆状卵形。
长1.5~8cm,宽0.8~5cm,先端钝,边缘具圆锯齿,两面被柔毛,下面较密,花序顶生或腋生轮伞花序有花6至多花,组成假总状花序,密被腺毛及长柔毛;
小苞片披针形;
花萼钟状,长1~1.3cm,先端二唇形,萼筒喉部密被白色柔毛;
花冠蓝紫色,二唇形,长2~2.7cm,花冠筒外伸,弯曲,上长达2cm,筒内有毛环;
雄蕊2,药隔长,花丝短,上臂药室发育,2下臂的药室不育且联合;
小坚果4,椭圆形,花期5~8月,果期8~9月。
根据丹参的植物学特征可以将丹参与混用的药材进行区分。
1.2 丹参药材根部性状鉴别丹参及其亲缘种类的药用植物甚多,以根部特征区别各类丹参也是沿用很久的经典方法。
丹参根的特征为:
丹参多为带根茎的根,根茎粗短,有茎基残余,下着生多数细长的根。
根呈圆柱形,稍弯曲,表面呈砖红色,
粗糙,具多数纵沟或皱纹,有须根痕,外部栓皮常鳞片状剥落,皮层有时开裂,长8~22cm,直径5~12mm,质坚脆,易折断,断面不平,疏松有裂隙,皮部棕渴色或砖红色,韧
皮部狭。
形成层明显,淡棕色,木质部导管束灰黄色或黄白色,放射状排列。
气微,
味微苦、涩,以条粗壮、色紫红者为佳。
1.3 水试鉴别法：
用水浸泡丹参根的方法对丹参进行鉴别,正品丹参根浸泡后的溶液无色,药材稍膨胀,颜色稍微变浅。
伪品丹参溶液显红色药材变为淡红色。
水
浸后续断会被染成红色,粉末中有草酸钙簇晶;
丹参水浸不染成红色,粉末中无草酸钙簇晶,但有石细胞及红棕色物为丹参。
从而将两者进行区分。
2 显微结构鉴别
2.1 根的横切面显微结构鉴别]根据丹参横切面显微结构特征与紫丹参进行区分,丹参（SalviamiltiorrhizaBge.）木栓层3~7列,木栓细胞长方形,切向延长,壁非木化或微木化;
外侧有时可见落皮层。
皮层窄,纤维单个散在或2~6个成群,孔沟放射状,层纹细密。
韧皮部较窄,由筛管群和薄壁细胞组成。
形成层明显成环。
木质部宽广,4~12mm呈放射状排列。
有些相邻的束在内侧合并,导管类圆形或多角形,有的沿径向延长,直径15~65mm,单个散在或2~12个成群,径向排列或切向排列;
木纤维发达,多成群分布于大导管周围;
有的本质部束内有1~2群木化薄壁细胞;
木射线宽广,射线细胞多木质化增厚。
紫丹参根茎表皮细胞1列,内含紫红色物质;
皮质薄壁细胞有的具纹孔;
髓部薄壁细胞壁呈连珠状增厚或稍增厚,具纹孔。
根本质部束常较小,导管也少。
2.2 根粉末的显微结构鉴别
丹参粉末呈红棕色。
木栓细胞黄棕色,表面观呈类方形或多角形,壁稍厚,胞腔内常含红棕色色素,色素溶解后,断面观细胞类长方形,排列较整齐。
木纤维多成束,长梭形,纹孔斜裂缝状或十字状,孔沟稀。
导管主要为网纹和具斜纹孔导管。
石细胞呈类圆形、类三角形、类梭形、类长方形或不规则形,也有延长呈纤维状,有的胞腔内含棕色。
2.3 花粉形态学特征对丹参及同属药用植物的鉴别一定的植物具有一定形态的花粉,因此花粉形态研究也是植物分类鉴别的依据之一。
丹参的花粉以外壁较薄、纹饰网眼较浅、网脊较粗、沟较宽、沟底具颗粒而区别于其他种。
3 理化学方法鉴别
3.1 根据丹参所含的化学成分进行鉴别经过大量分析研究说明丹参所含化学成分中二萜醌成分与系统发育有密切关系,二萜醌类化合物组成的不同可以作为种类鉴别的依据,根据二萜醌成分含量的多少对丹参组作丹参的药用植物的亲缘关系进行划分。
3.2 薄层色谱鉴别林佳等[采用薄层色谱定性鉴别的方法比较后指出在同一展开系统的条件下,无论是野生还是栽培品种,丹参的一些主要成分相同,以此可以作为识别丹参药材真伪的参考依据。
样品名称
S.丹酚酸B1,2.丹参（产于河北）3.丹参（产于陕西）4-6.丹参（产于山东）7,8.丹参（产于安徽）
相关条件
供试品溶液：
取丹参粉末0.2g，加75%甲醇25ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液浓缩至1ml
对照品溶液：
取丹酚酸B对照品，加75%甲醇制成每1ml含2mg的溶液。
薄
层
板：
高效硅胶GF254,预制薄层板（HPTLC-plateNano-DLRASIL-20，UV254，MN）。
点
样：
2μl；
条带状点样，条带宽度为1Omm.条带间距为5mm，原点距底边1Omm
展
开
剂：
甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（2:
3:
4:
0.5:
2），20ml。
缸：
双槽展开缸,20cm×
10cm。
开：
展开缸一侧槽中加入展开剂，预平衡15分钟，上行展开，展距为8cm。
检
视：
置紫外光灯（254nm）下检视。
3.3 紫外吸收光谱鉴别
丹参在253,277nm两处有吸收特征峰,而甘西鼠尾在264,248,218,203nm4处有吸收特征峰。
作丹参使用的药材紫外吸收光谱的范围不同,据此可以对两者进行鉴别。
丹参粉末处理后置紫外灯（365nm）下现察显亮蓝灰色荧光
3.4 紫外导数光谱：
李海鹰等研究认为丹参与番薯根的石油醚、甲醇及氯仿提取物的零阶和二阶导数光谱均可用于二者的鉴别。
3.5 丹参药材的近红外漫反射光谱模式识别法鉴别刘沭华等近红外漫反射光谱（NIRTDRS）模式识别法可以有效地应用于中药材自动鉴别、递归支持向量机等方法可以有效地完成自动分类和特征谱段选择。
不同种丹参药材的NIRTDRS丹参及属内植物为根茎类药材,其根茎中除含有大量的纤维素、淀粉等外,其他化学成分主要分脂溶性的其结果与化学成分测定一致。
NIRTDRS用于不同种丹参药材的鉴别,方法简便、结果可靠。
3.6 指纹图谱鉴别（HPLC法）
高效液相色谱（HPLC）具有色谱稳定性好、柱效高、应用范围广等特点,是中药指纹图谱研究中常用的手段。
对丹参等几种中药指纹图谱与代谢指纹图谱研究的结果,指出不同产地的药材在指纹图谱上存在较大差异。
4 分子生物学鉴别方法
RAPD鉴别法：
随机扩增的多态性DNA（RAPD）技术已经被广泛应用于物种鉴别。
4.1丹参主要居群DNA指纹图谱的建立
4.1.1基因组DNA的提取
表1实验所用材料
4.1.2RAPD一PCR扩增反应体系及扩增程序的优化
分别设计M扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度等单因子试验，同时保持扩增体系的其它成分浓度及扩增程序其它环节不变，以优化、确证适宜的M扩+、Taq酶、模板DNA的浓度及退火温度。
结果如下：
1.3鉴别丹参与其近缘和远缘植物的特征引物及其DNA指纹图谱
引物s2035、s222扩增结果不仅稳定、条带明亮，而且采用引物s2035、s232建立的指纹图谱丹参主产区的n个居群丹参的PCR扩增带型几乎相同（1一n泳道），其中有200一1100bp的七条共同的特异条带，即图6的条带Cl、CZ、C3、
C4、图7的CS、C6、C7，各丹参居群完全相同。
结果验证：
结果验证显示，PCR扩增重复性较好，取样合理，能够代表各居群。
4.2丹参EST序列中SSR信息的分析及建立
4.2.1丹参EST序列中SSR信息的分析
微卫星（Microsatellite）又称简单重复序列（Simplesequencerepeat），指的是基因组中由1～6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA，广泛分布于基因组的不同位置，长度一般在200bp以下SsR分子标记具有数量丰富，多性高，多等位基因，共显性，重复性高等优点。
根据建立SSR标记的序列性质不同可分为基因组SSR（GenomicSSR,gSSR）和表达序列标签SSR（ExpressedsequencetagSSR，EST-SSR）。
EST及表达序列标签是通过从cDNA文库中随机挑选的克隆进行大规模测序所获得的5’或3’端序列，长度一般在150~500bp。
4.2.2丹参EST序列中SSR信息的分析及建立
表2丹参EST-SSR引物情况表
从NCBI数据库下载鼠尾草属EST序列11747条，其中包括丹参EST
序列10228条和Salviafruti－cosa1519条，应用ActivePerl5.6.1.628对含有SSR的序列进行搜索。
搜索参数设置为：
单核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、
四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸最少重复次数分别为18次、6次、5次、4次、4次、3次
4.2.3丹参的EST-SSR分布频率与特点
丹参EST-SSR中共包含77种重复基元。
单核苷酸重复有1种A/T。
二核苷酸重复也为3种，以AG/CT为主，占64.21%。
三核苷酸重复为10种
表3丹参EST-SSR信息情况表
表4丹参二、三核苷酸重复基元情况表
4.2.3讨论：
丹参EST-SSR的出现频率高，重复基元的类型也比较丰富。
17.5%的EST序列中含有SSR，SSR出现频率为19.69%。
丹参EST-SSR信息比较丰富，覆盖了从单核苷酸重复到六核苷酸重复。
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