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琼脂、葡萄糖、生长因子
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Ⅲ
琼脂、生长因子
A.该实验采用的是固体培养基
B.该实验可采用稀释涂布平板法接种
C.Ⅰ和Ⅲ对照,说明大肠杆菌的生长不需要生长因子
D.Ⅱ和Ⅲ对照,说明大肠杆菌的生长需要糖类
培养基中均加入了琼脂,故为固体培养基;
微生物接种的方法很多,最常用的是平板划线法或稀释涂布平板法;
Ⅰ组和Ⅲ组存在两个变量,不能说明大肠杆菌的生长是否需要生长因子;
Ⅱ组和Ⅲ组对照,自变量是葡萄糖的有无,说明大肠杆菌的生长需要糖类。
C
5.细菌培养基常在121℃压力锅中灭菌。
如果只是在100℃温度下将细菌培养基灭菌,下列生物仍会存活的是（ ）
A.大肠杆菌
B.一种青霉菌
C.枯草芽孢杆菌的芽孢
D.沙门氏菌
芽孢是为了抵御外界不良环境而形成的一种休眠体,100℃的温度不能将其杀死。
6.产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ）
A.一个细菌、液体培养基
B.许多细菌、液体培养基
C.一个细菌、固体培养基
D.许多细菌、固体培养基
菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体,形成于固体培养基上,有一定的形态结构,肉眼可见。
由一个细菌形成的菌落,形态结构是相同的。
如果有许多细菌形成的菌落,就可能不会有比较标准的形态。
7.下列操作属于灭菌的是（ ）
A.接种前用火焰灼烧接种环
B.接种前用酒精擦拭双手
C.将平板倒置,放入培养箱中培养
D.接种在酒精灯的火焰旁完成
要正确区分灭菌、消毒和防止杂菌污染的措施。
A属于灭菌,B属于消毒,C、D都是实验操作过程中防止杂菌污染的措施,与灭菌无关。
8.利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌,经培养后发现培养基上出现了多种菌落,不可能的原因是（ ）
A.培养基制备过程中被杂菌污染
B.接种过程中,无菌操作不符合要求
C.系列稀释时,无菌操作不符合要求
D.由大肠杆菌的种类不同造成的
大肠杆菌培养基中出现了多种菌落,说明污染了杂菌,杂菌可能来自培养基,也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求。
9.某同学为了纯化大肠杆菌,配制了如下培养基,下列相关叙述不正确的是（ ）
牛肉膏蛋白胨固体培养基配方
牛肉膏
g
蛋白胨
NaCl
将上述物质溶解后,添加蒸馏水,定容至1000mL
A.该培养基配方成分中缺少凝固剂
B.由该培养基配方可确认所培养微生物的同化类型
C.培养大肠杆菌,需进行接种,接种环境须做到无菌
D.进行接种时,接种环须进行酒精消毒
本题考查大肠杆菌需要的营养及功能、如何配制固体培养基、接种的环境及最常用的方法。
牛肉膏、蛋白胨含有C、H、O、N等元素,所以它们既是有机碳源又是有机氮源,大肠杆菌同化类型为异养型。
接种时应进行无菌操作,防止杂菌污染。
用于接种的接种环须进行灼烧灭菌而不是“酒精消毒”。
10.右图是微生物平板划线示意图。
划线的顺序为1、2、3、4、5。
下列操作方法正确的是（ ）
A.操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B.划线操作必须在火焰上进行
C.最可能得到所需菌落的区域是1
D.在1、2、3、4、5区域中划线前后都要对接种环灭菌
操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌;
划线操作必须在火焰旁进行,而不是火焰上;
最可能得到所需菌落的区域是5。
11.下列依次表示倒平板、接种的位置,以及划线法接种的路径示意图,其中错误的是（ ）
在划线法接种时,第二次划线应从第一次划线的线末开始。
D图第二次划线与第一次划线、第三次划线与第二次划线都有间隙。
12.稀释涂布平板法是微生物培养中常用的一种接种方法。
下列相关叙述错误的是（ ）
A.操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释
B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格的灭菌处理
若菌液浓度过大,形成的菌落连在一起,则得不到单个的菌落。
13.为了保持菌种的纯净,需要进行菌种的保藏,下列有关叙述不正确的是（ ）
A.对于频繁使用的菌种,可以采用临时保藏的方法
B.临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上
C.临时保藏的菌种容易被污染或产生变异
D.对于需要长期保存的菌种,可以采用低温-4℃保藏的方法
对于需要长期保存的菌种,可以采用甘油管藏的方法,保存于-20℃的冷冻箱中。
14.根据所学的微生物知识回答下列相关的问题。
（1）在大肠杆菌培养过程中,除考虑营养条件外,还要考虑 、 和渗透压等条件。
由于该种细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、 、 等优点,因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中,为防止杂菌污染,需对培养基和培养器皿进行 （填“消毒”或“灭菌”）;
操作者的双手需进行清洗和 ;
静止空气中的细菌可用紫外线杀灭,其原因是紫外线能使蛋白质变性,还能 。
（3）通常可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的 。
（4）培养大肠杆菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是 。
（5）若用大肠杆菌进行实验,使用过的培养基及培养物必须经过 处理后才能丢弃,以防止培养物的扩散。
大肠杆菌体积小、结构简单、变异类型容易选择、易培养、生活周期短,常作为遗传学研究的实验材料。
微生物培养的操作过程要保证在无菌条件中进行。
（1）温度 pH 易培养 生活周期短
（2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构 （3）鉴定（或分类） （4）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间,观察培养基上是否有菌落产生 （5）灭菌
15.下面是有关微生物的培养与应用的问题,请分析作答。
（1）图中是利用 法进行微生物接种,把聚集的菌种逐步 分散到培养基的表面。
为达到这一目的,操作上应注意
（答出一点即可）。
（2）菌落形成的根本原因是 。
将乳酸菌接种到彻底灭菌的固体培养基上,要使其正常生长必须给予的条件是 。
（3）下表是一种培养基配方,请回答下列问题。
成分
KH2PO4
Na2HPO4
MgSO4·
7H2O
葡萄糖
尿素
琼脂
含量/g
①该培养基的葡萄糖为微生物的生长繁殖主要提供 。
②如果要对培养基的菌落进行纯化,在培养基上划线操作中,操作的第一步及每次划线之前都要灼烧接种环,目的是对接种环进行 。
（1）根据图示可知,图中利用的是平板划线法接种。
每次划线前要灼烧接种环;
冷却后从上一区划线末端开始划;
首尾区不重叠等。
（2）乳酸菌是厌氧菌,要在无氧条件下培养。
（3）葡萄糖是微生物的能源物质,还提供碳源。
接种环进行灼烧,目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养基。
（1）平板划线 稀释 ①每次划线前要灼烧接种环;
②冷却后从上一区划线末端开始划线;
③首尾区不重叠（答出其中一点即可）
（2）子细胞成为群体 隔绝空气
（3）①碳源和能源 ②灭菌
16.检验饮用水中细菌、病毒的含量是有效监控部分疾病发生的必要措施。
请回答下列与检验饮用水中大肠杆菌有关的问题。
（1）检验大肠杆菌的含量时,通常将水样进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到固体培养基的表面进行培养,记录菌落数量,这种方法称为 。
下图所示的四种菌落分布图中,图 不是由该方法得到的,而是利用 得到的。
（2）有三种材料或用具需要消毒或灭菌:
培养细菌用的培养基与培养皿（A）;
玻璃棒、试管、烧瓶和吸管（B）;
实验操作者的双手（C）。
其中需要消毒的是 ,需要灭菌的是 。
（填代号）
（3）下表是一种培养基的配方,该培养基中的碳源是 ,氮源是 。
琼脂 （填“提供”或“不提供”）营养成分。
含量
乳糖
蔗糖
K2HPO4
显色剂
将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1000mL
（1）图中A、B、C为稀释涂布平板法得到的结果,D为平板划线法得到的结果。
（2）实验者的手要进行消毒,实验用具都要进行灭菌。
（3）含碳物质是碳源,含氮物质是氮源。
琼脂是凝固剂,不提供营养成分。
（1）稀释涂布平板法 D 平板划线法
（2）C A、B
（3）乳糖、蔗糖和蛋白胨 蛋白胨 不提供
题组2
1．固体培养基中需要加入琼脂的目的是（ ）
A．为菌体提供碳源 B．为菌体提供氮源
C．使培养基保持水分D．使培养基凝固
[答案] D
[解析] 加入琼脂的主要目的是使培养基凝固。
2．对下列有关平板划线接种法的操作错误的是（ ）
A．将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
3．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是（ ）
A．防止杂菌污染
B．消灭杂菌
C．培养基和发酵设备都必须灭菌
D．灭菌必须在接种前
[答案] B
4．下列关于灭菌的说法中，错误的是（ ）
A．灭菌是指杀死一定环境中所有微生物的细胞，不包括芽孢和孢子
B．对不同的生物材料，应当采取不同的灭菌方法
C．培养基一般采取高压蒸汽灭菌法
D．高压蒸汽灭菌法最终使菌体蛋白质凝固变性
[答案] A
[解析] 灭菌是一种严格的使所有微生物（包括胞体、孢子、芽孢等）均死亡的措施。
5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是（ ）
①待培养基冷却至40℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板
②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞
③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰
④用左手的拇指和食指完全打开皿盖
⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖
⑥等待平板冷却5～10s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上
A．①③④⑤B．④⑤⑥
C．③⑤D．①②④⑥
[答案] C
[解析] 琼脂是一种多糖，在98℃以上可溶解于水，在45℃以下凝固，倒平板时高于50℃则会烫手，低于50℃时若不能及时操作，琼脂会凝固。
无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。
6．煮沸消毒法与巴氏消毒法的主要区别是（ ）
A．温度不同
B．时间不同
C．前者适用于固体消毒，后者适用于液体消毒
D．没有区别
[解析] 煮沸消毒法所需温度为100℃，巴氏消毒法需70～75℃煮30min或80℃煮15min。
7．平板冷凝后要将平板倒置，其意义是（ ）
A．利于大肠杆菌的接种
B．防止杂菌污染
C．利于培养基的冷却
D．防止皿盖冷却水倒流入培养基
[解析] 平板倒置可避免凝集在皿盖上的水流入培养基。
8．利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是（ ）
A．培养基制备过程中被杂菌污染
B．接种过程中，无菌操作不符合要求
C．系列稀释时，无菌操作不符合要求
D．大肠杆菌的种类不同
[解析] 大肠杆菌培养基中出现了多种菌落，说明污染了杂菌，杂菌可能来自培养基，也可能是因为操作过程中无菌操作不符合要求。
9．人们常用琼脂培养基来培养微生物，它在加热后呈溶胶状态，在室温下又呈半透明的凝胶状态。
在凝胶状态下，其表面及内部不同部位可生长大量的不同代谢类型的肉眼可见的细菌菌落。
请用提供的材料和用具，设计一个实验来探究某种细菌是需氧型、厌氧型还是兼性厌氧型。
材料用具：
某种细菌的菌种、含琼脂培养基的试管2支、无菌接种设备、恒温箱、水浴锅。
实验步骤：
（1）将2支含琼脂培养基的试管水浴锅中加热熔化；
（2）在培养基冷却而凝固之前，__________________；
（3）将2支试管置于恒温箱内培养，每天观察培养基中的菌落情况并做好记录。
预测实验可能会出现的结果，并得出相应的结论。
Ⅰ.______________________________________________________________
_________________________________________________________________
Ⅱ.______________________________________________________________
Ⅲ.______________________________________________________________
[答案]
（2）用无菌接种设备将某种细菌菌种接种到一支试管中，振荡试管，使细菌均匀混于培养基中，另一只试管不接种作为对照。
（3）Ⅰ.若只在培养基的表面生长有这种细菌的菌落，则说明它是需氧型。
Ⅱ.若只在培养基的底部生长有这种细菌的菌落，则说明它是厌氧型。
Ⅲ.若在培养基的各个部位都有细菌菌落，则说明它是兼性厌氧型。
1．下表是关于四种生物能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述。
描述正确的一组生物是（ ）
硝化细菌
乳酸菌
根瘤菌
衣藻
能源
氧气、NH3
分解乳酸
固定N2
利用光能
碳源
CO2
糖类
氮源
NH3
N2
NO
代谢类型
自养需氧型
异养厌氧型
异养需氧型
A.硝化细菌与乳酸菌
B．乳酸菌与根瘤菌
C．根瘤菌与衣藻
D．硝化细菌与衣藻
2．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶采用的灭菌、消毒方法依次是（ ）
①化学消毒②灼烧灭菌
③干热灭菌④紫外线灭菌
⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤D．③④②①⑥⑤
3．外科手术器械和罐头食品的消毒，都要以能够杀死什么为标准（ ）
A．球菌B．杆菌
C．螺旋菌D．芽孢
[解析] 消毒一般以杀死芽孢、孢子为标准。
4．在平板划线时，若需多次取菌划线，应在哪次划线时灼烧接种环（ ）
A．每次都应灼烧B．只第一次
C．每次均不需灼烧D．第一次和最后一次
[解析] 平板划线时，每次划线都要灼烧接种环。
5．不同的微生物对营养物质的需要各不相同。
下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中，不正确的是（ ）
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．碳源物质也是该微生物的能源物质
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一
[解析] 自养微生物的能源物质为光能或化学能。
6．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（ ）
A．含碳有机物B．蛋白胨
C．含碳无机物D．花生粉饼等天然物质
[解析] 酵母菌为异养生物，无法利用无机碳。
7．高温灭菌的原理是（ ）
A．每种微生物生长的最适温度是一定的
B．微生物对高温环境不适应
C．高温破坏了细胞内的蛋白质、核酸，影响其生命活动
D．高温降低了环境中氧的浓度
[解析] 相对于动植物来说，微生物的耐高温能力是很强的。
灭菌即杀死各种微生物及其他生命形态（如芽孢），所以要采用更高温度以破坏微生物体内蛋白质、核酸的分子活性，以使其永远丧失生活能力。
8．产生标准形态菌落的细菌的最初数目和培养基分别是（ ）
A．一个细菌、液体培养基
B．许多细菌、液体培养基
C．一个细菌、固体培养基
D．许多细菌、固体培养基
[答案] C
[解析] 菌落是一个细菌或几个细菌的子细胞群体，形成于固体培养基上，有一定的形态结构，肉眼可见。
同种细菌形成的菌落，形态结构是相同的。
如果有许多细菌形成的菌落，就不可能有比较标准的形态。
二、非选择题
9．
（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑________、________和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、________、________等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
（2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养器皿进行________（消毒、灭菌）；
操作者的双手需要进行清洗和________；
静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能________。
（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的________。
（4）通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的________。
（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是________________________________________
_______________________________________________________________。
（6）若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过________处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
[答案]
（1）温度 酸碱度 易培养 生活周期短
（2）灭菌 消毒 损伤DNA的结构
（3）比例合适
（4）鉴别（或分类）
（5）将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生
（6）灭菌
题组3
1.下列可以作为自养微生物氮源的是（ ）。
、尿素
B.牛肉膏、蛋白胨
C.尿素、酵母粉
D.铵盐、硝酸盐
自养微生物需要吸收的是自然界中的无机物,包括无机碳源和无机氮源。
尿素、牛肉膏、蛋白胨、酵母粉均不能作为自养微生物的氮源,铵盐、硝酸盐可以作为自养微生物的氮源。
2.下列叙述正确的是（ ）。
A.培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质
D.微生物在固体培养基上生长时,可以形成肉眼可见的单个细菌
培养基是微生物生长繁殖的营养基质。
按培养基的形态分为固体培养基、半固体培养基和液体培养基。
固体培养基是液体培养基中加入凝固剂后制成的,加水不能再变成液体培养基。
单个细菌用肉眼看不见,肉眼可见的是培养基上形成的菌落。
3.下列操作与消毒、灭菌无关的是（ ）。
C.将平板放入培养箱中培养
D.接种要在酒精灯的火焰旁完成
灼烧接种环、酒精擦拭双手及接种时在火焰旁完成都是为了消毒、灭菌、避免杂菌污染。
将平板放入培养箱中培养,则与消毒、灭菌无关。
4.下列有关细菌培养的叙述,正确的是（ ）。
A.在琼脂固体培养基上长出的单个菌落含有多种细菌
B.在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长
C.向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长
D.在半固体培养基中接种细菌培养后可以观察其运动
A项,在琼脂固体培养基上长出的单个菌落是由一种细菌增殖而来的;
B项,青霉素能破坏细菌等原核生物的细胞壁而抑制细菌的增殖,对真菌没有明显作用;
C项,破伤风杆菌是厌氧菌,通入氧气会抑制其生长;
D项,半固体培养基中可以观察细菌的运动。
5.下列有关平板划线法的操作,错误的是（ ）。
A.将接种环放在火焰上灼烧
B.将已冷却的接种环伸入菌液中沾取一环菌液
C.沾取菌液和划线要在火焰旁进行
D.接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连
为了避免杂菌污染,沾取菌液和划线要在火焰旁进行。
每次划线之前都要对接种环进行灼烧灭菌,划线操作结束仍需灼烧接种环。
灼烧接种环之后,要冷却后才能伸入菌液,以免温度太高,杀死菌种。
进行平板划线时不能将最后一区的划线与第一区的划线相连。
6.微生物培养过程中,肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是（ ）。
A.细菌的大小、形状、颜色B.菌落的大小、形状、颜色
C.有无鞭毛D.培养基的不同
微生物的鉴别和分离,一般要用固体培养基,由于不同微生物在固体培养基上长出菌落的形状、颜色等各不相同,所以可以作为鉴别的标准。
而一个细菌细胞很小,肉眼无法看到其颜色、形状等。
B
7.用培养液培养三种细菌,让它们在三支不同的试管中生长,右图显示了细菌的生长层,如果此时往三支试管中通入氧气,则细菌的繁殖速度将是（ ）。
A.甲不变,乙减慢,丙加快
B.甲加快,乙加快,丙减慢
C.甲减慢,乙减慢,丙加快
D.甲减慢,乙加快,丙减慢
甲试管内的细菌在试管上部,为好氧菌,乙试管内的细菌均匀分布,为兼性厌氧菌,丙试管内的细菌在试管底部,为厌氧菌。
向试管内通入氧气,能够促进兼性厌氧菌和好氧菌的繁殖,抑制厌氧菌的繁殖。
8.外科手术器械和罐头食品的灭菌,都要以能够杀死什么为标准?
（ ）
A.球菌B.杆菌
C.螺旋菌D.芽孢
灭菌是采用强烈的理化因素杀死所有的微生物,包括芽
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