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1,志贺菌抗体与伤寒沙门菌能发生凝集吗?

为什么?

2,做玻片凝集试验时,应怎样操作才能使凝集现象明显,利于结果的判断?

报告者:

报告日期:

2

二、试管凝集试验(肥达反应常量法)

1,学会试管直接凝集试验的操作方法,熟练使用吸量管移液并进行连续二倍稀释。

2,能够正确进行首管血清喜事度的计算。

3,能够准确判断试管凝集试验的各级凝集程度和凝集效价,并准确报告结果。

肥达试验是用伤寒沙门菌的H(鞭毛)和O(菌体)以及甲型(A)、乙型(B)副伤寒沙门菌的诊断菌液与病人血清做凝集试验,对伤寒、副伤寒作辅助诊断。

如果需要,有些地区可增加丙型(C)副伤寒沙门菌等其他沙门菌的诊断菌液。

1,诊断菌液

2,待检血清

小试管、刻度吸管、试管架等

试管号

1

3

4

5

6

对照管

血清最终稀释度

TO菌液反应现象

TH菌液反应现象

PA菌液反应现象

PB菌液反应现象

*反应现象分别以—、

+、++、+++、++++表示。

1,如何进行血清的连续二倍稀释?

2,如果首管血清要求是1:

15稀释,稀释后的总液量是3ml,应该如何进行稀释?

3,试管直接凝集反应,是稀释抗原还是稀释抗体?

4,应如何观察试管凝集反应的结果?

三、大孔反应板法(肥达反应微量法)

1,待检血清

大孔反应板、吸量管、盖玻板

孔号

7生理阳性

盐水

血清

对照

PC菌液反应现象

实践二环状沉淀试验(CRP检测)

(一)实验目的

(二)实验原理

(三)实验材料

1,肺炎球菌C多糖(诊断试剂)

2,待检血清

3,小试管、毛细滴管、试管架等。

(四)实验结果记录

反应物实验管对照管待检血清+C多糖诊断试剂

待检血清+生理盐水

(五)实验报告

(六)实验讨论

应怎样进行环状沉淀试验的结果观察?

实践三免疫比浊测定法(IgG定量测定)

熟悉免疫比浊测定法的原理、方法及结果判断。

本试验以透射比浊法检测人血清IgG。

在反应系统中保持抗IgG(抗体)过量时,所形成的免疫复合物与IgG(抗原)的量呈正相关,而形成的浊度与入射光的衰减呈正相关,测

定吸光度A值可反映液相中的IgG量。

通过参照标准曲线得知待测血清红IgG含量。

1,待检血清、标准血清、人IgG参考品

2,聚乙二醇-氟化钠溶液

3,其他试剂:

羊抗人IgG抗血清、生理盐水、蒸馏水等

4,器材:

分光光度计721、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等

(四)操作方法

1,系列参考管用生理盐水稀释人

IgG参考标准品,使其浓度分别为

5.5g/L、11.0g/L、

22.0g/L、44.0g/L(浓度可根据不同制剂变动)

取上述IgG参考标准液各10μl分放于4

个试管中;

另取生理盐水

10μl,放于第5支试管中,作为空白对照。

分别做好标记。

2,血清测定管将待检血清和标准血清均做

1:

10稀释(0.1ml待检/标准血清+0.9ml生

理盐水),混匀。

各取10μl分放于预先标记的试管中。

3,抗体准备用

PEG-NaF溶液稀释羊抗人

IgG抗血清(按商品效价稀释)。

4,抗原抗体反应向上述参考管、

空白管、标准管、待测管中分别加入稀释抗血清

1.0ml,

混匀后置37℃水浴

30分钟。

5,比浊用分光光度计进行测定,

使用340nm波长,用生理盐水空白管校正零点。

逐次

测定各参考管、标准管和待测管,准确读取和记录各自的

A值。

(五)实验结果记录

7

参考标准品

10μl

10

16

20

32

待检血清

(1:

10)

标准血清

生理盐水

PEG-羊抗人IgG

1ml

340nm波长(A)

(六)实验报告

(七)实验讨论

实践四单向琼脂扩散试验(IgG定量检测)

1,1.0%琼脂凝胶

2,参考血清:

3,特异性抗血清:

4,待检血清

5,其他:

载玻片、三角烧杯、试管、移液管、微量加样器、有盖搪瓷盘、打孔器、温

箱等。

标准1标准2标准3标准4标准5测定

直径(mm)

绘制标准曲线:

8

实践五双向琼脂扩散试验、对流电泳

一、双向琼脂扩散试验

1,1%琼脂

2,待测抗原(抗体)、已知抗体(抗原)

3,其他物品:

载玻片、打孔器、带盖搪瓷盘、滴管等

62

53

报告者

9

二、对流电泳

1,缓冲液PH8.6醋酸-巴比妥钠

2,1%琼脂

3,抗体:

4,抗原:

5,电泳仪、打孔器、载玻片、加样器等

阳性对照阴性对照待检血清

结果

电泳时电压

电泳时间

实践六酶联免疫吸附试验

ELISA夹心法测HBsAg

1,试剂盒

3,酶联仪

1,试验过程中,洗涤的目的是什么?

2,ELISA阳性有何临床意义?

11

实践七斑点金免疫层析技术检测HCG

1,测试条

2,待检者尿液

对照线:

检测线:

试分析以下结果:

1,仅对照线呈红色。

2,检测线、对照线均未呈红色。

12

实践八中性粒细胞吞噬功能的检测

1,0.5%甘油

2,45.0g/LNaCl

3,葡萄球菌菌液

计数中性粒细胞总数吞噬葡萄球菌的中性粒细胞数

吞噬率%=

1,人体内的吞噬细胞有哪些?

3,中性粒细胞吞噬功能检测的注意事项是什么?

13

实践九血清总IgE的检测(ELISA法)

1,标准品检测结果记录

标准品浓度(U/ml)01050100吸光度值(A)

根据标准品检测结果制备标准曲线。

2,待检血清检测结果记录

反应物吸光度值IgE浓度待检血清

1,实验材料和操作方法对实验结果有何影响?

2,说明实验结果的临床意义。

14

实践十抗链O试验(胶乳法)

1,抗链O检测试剂盒

1,定性检测

反应物

反应现象

结果判断

(凝集或不凝集)

(阳性或阴性)

2,半定量检测

稀释倍数

2

4

8

待检血清中ASO含量

400

800

1600

(IU/ml)

检测结果

15

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