检验医学SOP文件5--生化室作业指导书Word文件下载.doc
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7
血清碱性磷酸酶测定
ABCD-3-SF-07
27
8
血清α-淀粉酶测定
ABCD-3-SF-08
31
9
血清葡萄糖己糖激酶法测定
ABCD-3-SF-09
35
血清尿素氮谷氨酸测定
ABCD-3-SF-10
39
11
血清肌酐苦味酸法测定
ABCD-3-SF-11
43
12
血清尿酸TBHBA法测定
ABCD-3-SF-12
46
血清总胆固醇酶试剂法测定
ABCD-3-SF-13
50
14
血清甘油三酯酶试剂法测定
ABCD-3-SF-14
54
15
血清镁二甲苯胺蓝法测定
ABCD-3-SF-15
58
血清无机磷磷钼酸法测定
ABCD-3-SF-16
61
17
血清钙偶氮胂Ⅲ法测定
ABCD-3-SF-17
65
18
血清载脂蛋白A1测定
ABCD-3-SF-18
68
血清载脂蛋白B测定
ABCD-3-SF-19
72
20
血清高密度脂蛋白胆固醇测定
ABCD-3-SF-20
76
21
血清低密度脂蛋白胆固醇测定
ABCD-3-SF-21
80
22
血清肌酸激酶(CK)法测定
ABCD-3-SF-22
84
血清肌酸激酶MB同工酶测定
ABCD-3-SF-23
88
24
血清乳酸脱氢酶DGKC法测定
ABCD-3-SF-24
92
25
血清乳酸脱氢酶测定
ABCD-3-SF-25
96
26
血清a-羟丁酸脱氢酶测定
ABCD-3-SF-26
99
血清总胆汁酸循环酶法测定
ABCD-3-SF-27
103
28
OLYMPUS钠、钾、氯离子测定
ABCD-3-SF-28
106
29
血清二氧化碳酶试剂法测定
ABCD-3-SF-29
112
30
血清糖化蛋白四氮唑蓝法测定
ABCD-3-SF-30
115
尿液或脑脊液总蛋白测定
ABCD-3-SF-31
118
32
血清g-谷氨酰转移酶测定
ABCD-3-SF-32
121
33
钾的电极电位法测定
ABCD-3-SF-33
124
34
钠离子电极电位法测定
ABCD-3-SF-34
127
氯的电极电位法测定
ABCD-3-SF-35
132
36
钙的比色法测定
ABCD-3-SF-36
137
37
血、尿、脑脊液葡萄糖测定
ABCD-3-SF-37
142
38
血、尿液尿素氮(BUN)测定
ABCD-3-SF-38
147
血、尿液肌酐(Cr)测定
ABCD-3-SF-39
152
40
血清天门冬氨酸测定
ABCD-3-SF-40
157
41
动脉血气电极法测定
ABCD-3-SF-41
163
42
血清乳酸脱氢酶速率法测定
ABCD-3-SF-42
168
血、尿液淀粉酶两点法测定
ABCD-3-SF-43
173
44
血清蛋白电泳法检查
ABCD-3-SF-44
178
45
高铁血红蛋白还原试验比色法
ABCD-3-SF-45
181
血清二氧化碳酶反应终点法测定
ABCD-3-SF-46
183
47
正常值、病理值复合控制品
ABCD-3-SF-47
188
48
载脂蛋白A1、B复合控制品
ABCD-3-SF-48
190
49
复合校准品
ABCD-3-SF-49
192
载脂蛋白A1、载脂蛋白B校准品
ABCD-3-SF-50
194
51
高、低密度脂蛋白胆固醇校准品
ABCD-3-SF-51
196
52
722分光光度计维护规程
ABCD-3-SF-52
198
53
血气分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-53
201
Medical低温冰箱操作维护规程
ABCD-3-SF-54
203
55
MEDICA90纯水机操作维护规程
ABCD-3-SF-55
205
56
AU1000ISE分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-56
207
57
AU1000生化分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-57
209
电泳仪操作维护规程
ABCD-3-SF-58
214
59
干化学分析仪操作维护规程
ABCD-3-SF-59
217
60
离心机操作维护规程
ABCD-3-SF-60
222
修订页
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修订页
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更改内容
批准人
批准日期
血清总胆红素(T-BIL)测定
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血清总胆红素(T-BIL)测定
1.实验原理
血清中的胆红素分为直接(结合)胆红素和间接(未结合)胆红素。
大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1,一些改良的方法已被用来增进反应。
这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应,生成一种有颜色的化合物,而间接胆红素需要一种溶剂,如表面活性剂后才能进行反应。
申能总胆红素试剂是改良的重氮法。
使用一种稳定的重氮盐,2,4-二氯苯胺重氮盐(DCA),与胆红素反应,形成红色偶氮化合物,它在540nm吸光度最大。
在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。
胆红素+DCA红色偶氮化合物
表面活性剂
2.标本:
2.1病人准备:
无特殊要求。
最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。
2.2类型:
血清、肝素或EDTA血浆,应避光保存。
3.标本存放:
15~25℃保存可稳定2天;
2~8℃保存可稳定7天;
-20℃保存可稳定3个月,如冰冻保存,不可反复冻融!
。
4.标本运输:
常温条件下避光保存运输。
5.标本拒收标准:
标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。
6.实验材料
6.1试剂:
申能总胆红素试剂盒(14108171701试剂1+试剂2)
6.1.1试剂组成
试剂1:
6×
64ml
磷酸缓冲液40mmol/L
氯化钠9g/L
表面活性剂,稳定剂适量
试剂2:
16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L
盐酸30mmol/L
表面活性剂适量
6.1.2试剂准备:
试剂为即用式。
6.1.3试剂稳定性与贮存
试剂避光保存于2~8℃,若无污染,可稳定至失效期。
试剂有效期为18个月。
试剂2必需避光保存。
试剂不可冰冻。
6.1.4变质指示:
当试剂有浊度时,表明有细菌污染,不能继续使用。
6.1.5注意事项:
此试剂为体外诊断用,不要入口,毒性还末确定;
警告!
腐蚀剂!
不要入口;
避免和眼睛,皮肤或衣服接触,如果接触到,立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟,接触到眼睛或吞服,立即寻找医疗保护。
6.2校准品:
使用DiaSys公司提供的TruCalU校准品对自动分析仪进行校准,参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3质控品:
参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7.仪器:
奥林巴斯AU1000生化分析仪
8.操作步骤
8.1项目基本参数:
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件。
8.2仪器操作步骤:
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件。
9.检验结果的判断与分析
10.质量控制:
在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析,以2S为质控警告限,3S为失控限,绘制质控图,判断是否在控。
质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。
11.计算方法:
以TruCalU复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算,以μmol/L报告。
手工测定计算方法为:
△Au
总胆红素(μmol/L)=×
校准液浓度
△As
12.参考值范围:
婴儿:
出生24小时内<150μmol/L
出生第2天22-193μmol/L
出生第3天12-217μmol/L
出生第4~6天1.7-216μmol/L
儿童:
>一个月3.4-17μmol/L
成年人:
1.7-21μmol/L
参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。
根据好的实验室经验,每个实验室应建立自己的参考值。
13.临床意义:
胆红素是血红蛋白的降解产物。
游离胆红素非极性很强,几乎不溶解于水。
在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。
在肝脏中,胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。
溶血(肝前黄疸)、实质的肝损伤(肝性黄疸)和胆管堵塞(肝后黄疸)都会导致血液胆红素增高,形成高胆红素血症。
人群中常见先天性慢性高胆红素血症,称为Gilbert综合症。
由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多,使60~70%的婴儿血液出现总胆红素增高。
常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。
直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素,因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。
14.操作性能
14.1线性范围:
1.2~513μmol/L
14.2精密度:
精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5,AU1000批内精密度小于3%或SD≤0.07,总精密度小于5%或SD≤0.10。
用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。
批内精密度
n=20
(μmol/L)
s
CV
(%)
批间精密度
样品1
15.22
0.464
3.05
14.88
0.408
2.74
样品2
17.44
0.405
2.32
19.66
0.686
3.49
样品3
82.60
0.785
0.95
79.52
2.274
2.86
14.3方法学比较:
本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对247个样品进行T-BIL检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:
y=1.00x-0.00mol/L;
r=1.000。
14.4灵敏度:
本试剂的检测限为1.2μmol/L。
14.5病人结果可报告范围:
15.超出范围结果处理:
本法线性上限为513μmol/L。
如样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:
1稀释,重新测定,结果乘以2。
16.病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μmol/L时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。
17.方法局限性
17.1本法线性上限为513μmol/L。
17.2干扰物质:
当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L,血红蛋白浓度≤5.00g/L,甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
18.补救措施:
当仪器发生故障时,迅速联系仪器厂家进行维修。
19.参考文献
1. ThomasLed.ClinicalLaboratoryDiagnostics.1sted.Frankfurt:
TH-BooksVerlagsgesellschaft;
1998.p.192-202.
2. TolmanKG,RejR.Liverfunction.In:
BurtisCA,AshwoodER.editors.TietzTextbookofClinicalChemistry.3rded.Philadelphia:
W.B.SaundersCompany;
1999.P.1125-77.
3. RandRN,diPasquaA.Anewdiazomethodforthedeterminationofbilirubin.ClinChem1962;
6:
570-8.
20.其他:
仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按《检验科废物处置管理规定》执行。
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血清直接胆红素(D-BIL)测定
直接胆红素与2,4-二氯苯胺重氮盐形成重氮化合物,在酸性条件下呈红色。
申能总胆红素试剂盒:
14108271701 试剂+试剂2
16×
64ml
EDTA-Na20.07mmol/L
氯化钠6.6g/L
氨基磺酸70mmol/L
16ml
2,4-二氯苯胺重氮盐0.09mmol/L
盐酸130mmol/L
EDTA-Na20.02mmol/L
6.1.3试剂稳定性与贮存:
此试剂为体外诊断用。
不要入口。
避免和眼睛,皮肤或衣服接触。
如果接触到,立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟。
接触到眼睛或吞服,立即寻找医疗保护。
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2仪器操作步骤:
参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件
检验结果的判断与分析
11.计算方法以TruCalU复合校准品校准仪器后,在病人结果可报告范围内,仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算,以μmol/L报告。
△Au
直接胆红素(μmol/L)=--------×
校准液浓度
△As
≤6.8mmol/L
1.7~171mmol/L
精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5,AU1000批内精密度小于4%或SD≤0.04,总精密度小于5%或SD≤0.07。
6.0
0.20
3.34
6.2
0.19
3.12
12.8
0.12
1.00
13.0
1.46
36.4
0.26
0.71
35.4
0.46
1.30
本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x),同时对85个样品进行DBIL检测,将检测结果作方法学比较,其统计结果如下:
y=0.95x+0.68μmol/L;
r=0.995。
1.7mmol/L。
1.7~171μmol/L
15超出范围结果处理本法线性上限为171mmol/L。
样品测定值超过上限时,应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:
16.病危报警值的处理无。
17.1本法线性上限为171mmol/L。
17.2干扰物质:
当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L,甘油三酯浓度≤22.6mmol/L时没有观察到干扰。
血红蛋白浓度≥0.50g/L将产生干扰。
19.参考文献:
Tietz,N.W.(Ed),FundamentalsofClinicalChemistry,3rdEdition,W.B.Saunders,1987.
VandenBergh,A.andMueller,P.,BiochemZ,77:
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Young,D.S.,EffectsofDrugsonClinicalLaboratoryTests,4thEdition,AACCPress,1995.
NCCLS,EvaluationProtocolEP5-T2,1992.
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Henry,J.,Cannon,D.C.,Winkelmann,J.V.,Clinicalchemistry,principlesandtechnics,Harper&
RowPublishersIns.,HagerstownMaryland,1974:
1042
Thomas,L.:
Laboranddiagnose,4thedition,DieMedizinischeVerlagsgesellschaft,Marburg,1992:
235
血清总蛋白液体测