复方杜仲片微生物限度检查方法验证方案+报告版Word格式文档下载.docx

复方杜仲片微生物限度检查方法验证方案+报告版Word格式文档下载.docx

《复方杜仲片微生物限度检查方法验证方案+报告版Word格式文档下载.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《复方杜仲片微生物限度检查方法验证方案+报告版Word格式文档下载.docx（39页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

3.2验证依据

验证依据：

《中国药典》2015年版四部、《验证与确认管理规程》、《验证与确认操作规程》、《微生物限度检查操作规程》。

4.验证目的

为了保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的准确可靠。

部门

人员

姓名

职责及分工

微生物检测员

负责起草验证方案并组织实施，总结验证结果、起草验证报告。

负责审核验证方案及报告，负责验证工作的组织实施。

确认/验证管理员

负责验证工作的组织与协调。

5.实施验证人员及职责

6.复方杜仲片微生物限度检验方法验证风险评估：

序号

项目

潜在的风险分析

潜在的失败后果

原因分析

严重程度（S）

发生概率（P）

可检测性（D）

起始风险等级

措施结果

采取的措施

风险等级

1

验证方案编写人员

编写人员未按照《中国药典》2015年版四部编写方案。

验证方法错误，导致验证结果不可靠。

人员培训考核不到位

3

2

RPN值12，高风险

对验证编写人员进行培训和考核，合格后方可编写。

RPN值2，低风险

试验人员

试验人员未按照编写的验证方案进行操作

操作不正确，导致试验结果不可靠

按照验证方案进行培训，培训合格后方可操作

培养箱、净化工作台

仪器未经校验或不在校验期内。

导致检验环境和培养环境不符合要求，最终导致验证失败。

使用人员使用前未对校验期进行检查

RPN值18，高风险

设备人员使用前对设备进行检查。

4

干热灭菌烘箱、压力蒸气锅

导致试验结果出现异常。

5

对照培养基、检查用培养基、检定菌

对照培养基、检查用培养基、检定菌失效

导致验证失败

使用前未对对照培养基、检查用培养基、检定菌有效期进行核查。

对管理人员进行培训，严格按照《ZYCWJ-SMP-10020-00培养基及检定菌管理规程》进行管理，使用前使用人对有效期进行确认。

6

培养基、缓冲液、消毒剂

培养基、缓冲液、消毒剂配制不正确

严格按照标准要求制备缓冲液和消毒剂

对实验人员进行验证培训

7

灭菌器具、洁净服

已灭菌器具和洁净服过效期

使用前未对已灭菌器具和洁净服有效期进行确认

使用前对已灭菌器具和洁净服有效期进行确认

RPN值1，低风险

8

验证方法不正确

1、验证方案编写不正确；

2、未严格按照验证方案开展验证工作

验证方案未经批准

RPN值8，中风险

对验证方案进行审核

9

控制菌检验结果不合格

实验组无菌落生长，供试品可能有抑菌性

1、供试品可能对试验菌存在抑制作用

2、检验员判断失误。

采用培养基稀释法消除抑菌性

10

实验组菌种回收率不达标

各试验组回收率低于或高于标准范围

2、检验人员计数错误。

11

样品储存环境

样品储存环境、温度异常。

导致样品被污染或失败

样品存放不当

严格控制样品存放环境的温湿度

12

洁净区环境

1、洁净区温湿度、压差异常

2、洁净区环境被污染

1.洁净区温湿度、压差控制不当

2.未定期对洁净区进行清洁和消毒；

3.未定期监测洁净区的环境

RPN值6，中风险

1.每天定期监察洁净区的温湿度；

2.按照SOP规定对洁净区进行消毒；

3.严格按照《洁净度监测管理规程》对洁净区环境进行监测。

7.变更和偏差处理

验证过程中如果出现偏差和变更，应立即通知确认与验证小组并对偏差和变更进行详细记录（参见偏差处理单，变更处理单），分析偏差产生的根本原因并提出解决方法。

所有偏差和变更得到有效处理后，验证方可进入下一步骤。

偏差处理单和变更处理单经过批准后其原件必须附在验证报告中。

变更和偏差处理记录

□本次验证无变更和偏差情况□本次验证发生变更和偏差差情况

出现阶段

变更和偏差说明

处理措施

处理结果

备注

检查人/日期：

复核人/日期：

7.验证内容

7.1验证前准备

7.1.1文件准备

7.1.1.1现场备《微生物限度检查法操作规程》、《培养基及检定菌管理规程》、《微生物限度检查方法验证方案》、相关品种的检验操作规程及相关的验证记录，并填写验证文件准备验证表。

验证文件准备验证表

文件名称

文件编码

生效日期

微生物限度检查操作规程

培养基及检定菌管理规程

复方杜仲片微生物限度检查方法验证方案

复方杜仲片中间产品操作规程

复方杜仲片成品检验操作规程

结论:

7.1.2验证用主要仪器准备

准备经检定或确认合格并处于校验有效期内的生化培养箱、高压蒸汽灭菌器等，填写《主要仪器验证表》，见下表。

主要仪器验证表

仪器名称

仪器编号

校验日期

校验有效期

SHP-150生化培养箱

DS-20002

MJ-160生化培养箱

DS-20003

DS-20042

SHP-350生化培养箱

DS-20048

DS-20049

LDZM-80KCS立式压力蒸汽灭菌器

DS-20009

LS-75HD立式压力蒸汽灭菌器

DS-20061

7.1.3.验证用试剂、培养基等的有效期

检查验证用试剂、培养基等在有效期内且质量符合要求，填写《试剂、培养基表》，见下表。

试剂、培养基表

品名

批号

生产厂家

有效期

胰酪大豆胨琼脂培养基

胰酪大豆胨液体培养基

沙氏葡萄糖琼脂培养基

沙氏葡萄糖液体培养基

麦康凯琼脂培养基

麦康凯液体培养基

pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液

肠道菌增菌液体培养基

紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基

RV沙门菌增菌液体培养基

木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基

7.1.4.检定菌验证

确认用于试验的检定菌在有效期内并生长良好，传代代数不超过第五代。

验证情况填写《检定菌验证表》，见下表。

名称

来源

编号

传代代数

传代编号

生长情况

枯草芽孢杆菌

CMCC（B）63501

金黄色葡萄球菌

CMCC（B）26003

黑曲霉

CMCC（F）98003

白色念珠菌

CMCC（F）98001

大肠埃希菌

CMCC（B）44102

乙型副伤寒沙门菌

CMCC（B）50094

铜绿假单胞菌

CMCC（B）44104

7.1.5.培训

验证方案起草人在方案批准后对本次验证相关人员进行培训，并记录在相关附件中。

如果在验证中涉及到其他培训，培训记录的复印件附在验证报告中。

培训时间

培训内容

培训对象

培训讲师

被培训人员签名

部门及岗位

7.2菌悬液的制备：

7.2.1取经30℃~35℃培养18～24小时的金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物1ml加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10－3～10－5为不大于10000cfu/ml和10－5～10－7为不大于100cfu/ml备用。

7.2.2取经20～25℃培养2～3天的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml，加入9ml0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至10－3为不大于10000cfu/ml和10－5为不大于100cfu/ml备用。

7.2.3将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，使大量的孢子成熟。

加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。

然后，采用适宜方法吸出孢子悬液无菌试管内用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至

10－3和10－5，制成每1ml含孢子数小于10000cfu和100cfu的孢子悬液。

7.2.4上述菌悬液制备后若在室温下放置，应在2小时内使用；

若保存在2～8℃，可在24内使用。

7.3供试品的制备：

取3个批号样品各10g，研细，加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，溶解、混匀，为1：

10供试液。

7.4需氧菌计数方法适用性试验

7.4.1试验组：

取片1:

10供试液分别加到5个灭菌的三角瓶中,每瓶10ml,分别加入金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,铜绿假单胞菌、白色念珠菌、黑曲霉0.1ml菌悬液（小于10000cfu）,制成每m1复方杜仲片1：

10供试液含菌数小于100cfu,取含菌的样品溶液1ml（小于100cfu）,置直径90mm的无菌平皿中,每个菌液注2个平皿，注入20m1温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养；

测定菌数。

7.4.2菌液对照组：

用小于100cfu菌悬液1ml，注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基约15～20ml，混匀，凝固，于30～35℃倒置培养3天点计菌落数。

各平行制备2个平皿。

7.4.3供试品对照组：

取复方杜仲片1:

10供试液1m1，置直径90mm的无菌平皿中,注2个平皿,注入20m1温度不超过45℃的溶化的胰酪大豆胨琼脂培养基,混匀,凝固,倒置培养；

测定供试品对照组菌数。

7.4.4阴性对照用同批配制、灭菌的胰酪大豆胨液体培养基1m1替代样品,进行阴性对照菌数测定。

需氧菌计数方法适用性试验结果见下表。

同法进行复方杜仲片1:

100供试液的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌,黑曲霉回收率试验,回收率均在50-200%之间。

需氧菌计数方法适用性试验表

（1）供试品批号：

种类

菌种名称

方法

（平皿）

供试品对照组

菌液对照组

试验组

回收率（%）

阴性对照

皿1

皿2

平均

需氧菌总数

1:

100

7.5霉菌和酵母菌总数计数方法适用性试验

7.5.1试验组：

10供试液分别加到2个灭菌的三角瓶中,每瓶10ml,分别加入白色念珠菌,黑曲霉的0.1ml菌悬液（小于10000cfu）,制成每m1复方杜仲片原液含菌数小于100cfu,取含菌的样品溶液1ml（小于100cfu）,置直径90mm的无菌平皿中,每个菌液注2个平皿,注入20m1温度不超过45℃的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基。

混匀,凝固,20～25℃倒置培养5天点计菌落数。

7.5.2菌液对照组：

取稀释后白色念珠菌、黑曲霉的菌悬液（小于100cfu）1ml，加沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定阳性对照菌数。

7.5.3供试品对照组用供试品替代试验组液体注皿,试验。

7.5.4阴性对照用同批配制,灭菌的稀释剂1ml替代样品注皿,注入20m1温度不超过45℃的溶化的沙氏葡萄糖琼脂培养基,混匀,凝固,培养、计数,测定阴性对照菌数。

霉菌和酵母菌总数方法适用性试验结果见下表。

100供试液的白色念珠菌、黑曲霉回收率试验,回收率均在50-200%之间。

霉菌和酵母菌总数方法适用性试验表

（2）供试品批号：

霉菌和酵母菌总数

7.6结果计算：

7.6.1回收率=（试验菌组的平均菌落数-供试品对照组的平均菌落数）/菌液对照组的平均菌落数×

100%

7.6.2结果判断：

回收率均在50-200%之间，则可判断该检查方法适合该品种的微生物限度检查。

7.7控制菌检查法验证

7.7.1大肠埃希菌检查法

7.7.1.1试验组：

取复方杜仲片1：

10供试液10ml加到灭菌的三角瓶中，加入大肠埃希菌菌悬液1ml（小于100cfu），加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部大肠埃希菌检查项进行试验。

7.7.1.2阳性对照：

取大肠埃希菌菌悬液1ml（小于100cfu），加入100ml胰酪大豆胨液体培养基中，按《中国药典》2015年版四部大肠埃希菌检查项进行试验。

7.7.1.3供试品对照组：

10供试液10ml加到灭菌的三角瓶中，加入100ml胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部大肠埃希菌检查项进行试验。

7.7.1.4阴性对照：

同批配置、灭菌100ml胰酪大豆胨液体培养基，按《中国药典》2015年版四部大肠埃希菌检查项进行试验。

试验结果如下表：

大肠埃希菌方法适用性试验表供试品批号：

步骤

阳性对照

胰酪大豆胨液体培养基，30～35℃培养18~24小时

麦康凯液体培养基，42～44℃培养24~48小时

取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，30~35℃培养18~72小时。

染色、镜检

7.7.2耐胆盐革兰阴性菌方法适用性试验

7.7.2.1供试液制备:

称取供试品10g,用胰酪大豆胨液体培养基稀释至100m1,用匀浆仪等适宜的方法混匀,制成1:

10,1:

100,1:

1000的供试液,20～25℃培养2h。

7.7.2.2试验组:

取10m1/支肠道菌增菌液体培养基6支,分别加入上述预培养的1:

10、1:

100、1:

1000的供试液各1m1,分别加入≤100cfu大肠埃希菌