HIV检测技术课件PPT资料.ppt

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防止输血传播HIV而进行的检测，包括献血员筛查和原料血浆筛查。

HIV抗体检测目的,筛查试验初筛复检确证试验,HIV抗体检测程序,筛查试验,筛查试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，其中酶联免疫试剂应批批检合格。

推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。

HIV抗体筛查样品血清、血浆、滤纸干血斑、唾液和尿液。

筛查方法酶联免疫吸附试验（ELISA）化学发光或免疫荧光试验（CLIA）：

采用发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。

快速检测（RT）及其它检测试验

（1）明胶颗粒凝集试验（PA）

（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验（3）免疫层析试验,HIV抗体筛查试验,初筛试验对呈阴性反应的样品，可出具HIV抗体阴性（-）报告；

对呈阳性反应的样品，需要进一步做复检试验和确证试验。

复检试验对初筛呈阳性反应的样品，应使用原有试剂和另外一种不同原理（或厂家）的试剂，或另外两种不同原理或不同厂家的试剂进行复检试验。

如果初筛检测使用抗原抗体联合试剂，则复检必须包括一种抗原抗体联合试剂。

艾滋病检测筛查实验室复检判定为阳性反应的样品，确证实验室可以直接进行确证试验。

HIV抗体筛查检测流程图,

（1）酶联免疫吸附试验（ELISA）,可使用血液、唾液、尿液样品单纯HIV抗体检测试剂HIV抗原抗体联合检测试剂：

同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体。

HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶标记的HIV抗原或抗体，加底物显色，用酶标仪测定结果。

有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。

四代艾滋病酶联免疫试剂比较,第四代,病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24Ab,IgM/IgG抗体HIV-1/-2/-Op24抗原,病毒裂解液重组抗原合成肽HIV-1/-2/-Oanti-p24抗体,method,间接,间接,夹心,夹心,间接法检测抗体,双抗原夹心法检测抗体,ELISA测定中的干扰因素,内源性干扰因素外源性干扰因素,内源性干扰因素,类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子等,外源性干扰因素,溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融,操作中的注意事项,加样温育洗板显色,标准化操作及流程,试剂准备、标本收集、测定方法和仪器操作写出正确的“标准操作程序”（SOP），所有的实验技术人员在进行相关测定时，必须严格按相应的SOP进行操作。

ELISA法结果判断,临界值概念:

将检测的阳性和（或）阴性对照的OD值代入计算公式计算出来的判断阳性和阴性结果的界值判断标准:

标本OD值与临界值的比值大于等于1（S/CO1）为阳性（对间接法及双抗原夹心法）注意:

不同厂家、不同方法临界值计算公式不同cutoff=NC+0.1（0.15,0.12）cutoff=NC*2.1,酶联免疫吸附试验（ELISA）,优点：

准确性高、价格低廉、判断结果标准客观、结果便于记录和保存用途：

流行病学监测及临床大量标本的检测,

（2）化学发光或免疫荧光试验,采用发光或荧光底物，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。

HIV抗原或抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原或抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。

（3）快速检测（RT）及其它检测试验,优点:

试验简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测。

不需专门设备和人员培训,一般可在1030分钟内得出结果。

缺点:

肉眼判断较主观、价格较贵、结果不易保存。

（1）明胶颗粒凝集试验（PA）将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温（一般为室温）。

当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。

快速诊断试剂,PA法原理,

（2）斑点EIA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状固定在膜上,加血清样品。

斑点EIA法用酶标记抗体，以后步骤同ELISA。

斑点免疫胶体金（或胶体硒）用红色的胶体金（或胶体硒）A蛋白标记，用渗滤法作为洗涤方法。

阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。

反应时间在10min以内，使用抗原量少。

快速诊断试剂,金标诊断试验原理,快速诊断试验,（3）免疫层析试验（金标法、硒标法）以硝酸纤维膜为载体。

加样区：

预包被胶体金-抗原/胶体金-proteinA结合物测试区（T）：

固定有重组HIV抗原，质控区：

抗HIV单克隆抗体/抗-proteinA抗体,快速诊断试剂,全血样品加50ul样品于样品垫中,手指血方法,静脉血方法,加一滴缓冲液,15分钟内读取结果,硒标法操作步骤,病人条,质控条,快速诊断试验,优点:

注意：

一定要将试剂平衡至室温,快速诊断试剂,HIV抗体确认试验,确认试验的试剂：

必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂。

确认试验方法：

免疫印迹试验（WB）条带免疫试验（LIATEKHIV）放射免疫沉淀试验（RIPA）及免疫荧光试验（IFA）国内常用的确认试验方法是WB。

HIV抗体确认实验结果,WB确认HIV感染的判定标准和判定结果的基本原则,HIV-1抗体阳性：

gp41和Gp120/gp160或加上gp41加上P24阴性：

无HIV抗体特异带出现。

可疑：

出现HIV抗体特异条带，但不足以判定阳性,HIV抗体确认试验不确定结果,P24：

非特异性反应（孕妇，正常人）Gp160：

非特异性反应，感染早期，感染晚期Gp160，gp120：

非特异性反应，感染早期，感染晚期Gp160，p24：

非特异性反应，感染早期，感染晚期,HIV抗体确认试验不确定结果,P24：

非特异性反应，感染早期，感染晚期Gp160，gp120，p24：

感染早期，感染晚期污染？

筛查试验阳性反应样品,HIV抗体确证检测流程图,HIV抗体检测的要点1、根据目的选择检测方法及检测策略。

2、严格遵守实验室SOP。

3、筛查试验阳性，须作确证实验。

4、筛查试验阴性，不应做确证实验。

5、筛查及确证试验阳性均应做好咨询工作。

HIV抗体检测不能用来诊断：

HIV急性感染新生儿HIV感染,艾滋病病毒感染产妇所生儿童,阳性,阴性,用另一种不同原理或不同厂家生产的筛查试剂再次检测,12个月进行HIV抗体筛查试验,确证试验,18个月时再进行HIV抗体筛查试验,报告HIV抗体检测结果阴性,艾滋病感染产妇所生儿童HIV抗体检测流程,阳性,阴性,阴性,阳性,用另一种不同原理或不同厂家生产的筛查试剂再次检测,阴性,阴性,阳性,报告HIV抗体检测结果阳性,提供咨询，继续随访，4周后再次进行确证试验,不确定,阳性,婴幼儿HIV感染的抗体检测,适用范围：

HIV感染产妇所生婴幼儿；

已满18个月的婴幼儿，其母亲HIV感染状态不详，儿童出现HIV相关临床表现，临床怀疑HIV感染的儿童。

婴儿应于12个月进行HIV抗体检测，结果阴性则排除感染，纳入正常儿童保健；

阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染。

谢谢！