培养基配方及配置文档格式.docx

培养基配方及配置文档格式.docx

《培养基配方及配置文档格式.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《培养基配方及配置文档格式.docx（13页珍藏版）》请在冰点文库上搜索。

生根培养。

B5培养基特点：

•含较低的铵

•双子叶植物尤其木本植物组培可选择

MS培养基特点：

无机盐、离子浓度高，硝酸盐含量较高。

MS培养基是目前应用最多最普遍的培养基。

无机盐的浓度较高，能保证组织培生长所需的矿物质营养。

并且因为离子浓度高，在配制、贮存、消毒过程中，即使有些成分略有出入，也不致影响培养基中的离子平衡

培养基配方明细表：

培养基成分：

一、无机盐：

氮枝叶生长需要氮素，缺氮老叶先发黄；

氮过量，枝叶过度茂盛。

磷缺磷，植株生长缓慢，老叶暗紫色。

钾促进花卉生长健壮，增强抗性，茎秆挺拔。

缺钾，叶尖、叶缘枯焦，叶片呈皱曲状，老叶发黄或火烧状。

钴缺钴，叶片失绿而卷曲，整个叶片向上弯曲凋枯。

二、有机物

碳水化合物：

选用种类：

蔗糖（或葡萄糖、果糖）等

•蔗糖浓度：

2%～3%，胚培养为4%～15%

•大生产时可用白糖

糖在培养基的作用：

1）为细胞提供合成新物质的碳骨架

2）为细胞的呼吸代谢提供底物和能量

3）维持渗透压

维生素

种类：

VB1（盐酸硫胺素）、VB6（盐酸吡哆醇）、VB3（烟酸）、Vc（抗坏血酸

浓度：

0.1－1.0mg/L

作用：

VB1促愈伤组织产生，提高活力

VB6促根生长

Vc防组织褐变

VB3与植物代谢和胚的发育有关系

氨基酸：

甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等等。

因培养基的种类不同，其种类和浓度不同。

肌醇：

又称环己六醇，在糖类的转化中起作用

天然复合物

椰乳：

促愈伤组织和细胞培养，用量10－20%，使用注意茎尖大小

香蕉泥：

用量150－200ml/L，应用在兰花组培

马铃薯汁液：

用量150－200g/L，使苗壮

水解酪蛋白：

浓度100－200mg/L，应用在微茎尖培养

三、激素

自然界中，植物激素是植物新陈代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的量影响到植物的细胞分化、生长、发育，影响到植物的形态建成、开花、结实、成熟、脱落、衰老和休眠、萌发等许多生理生化活动。

在培养基中，其各种成分对培养物影响最大的最显著的就是激素。

激素的种类、浓度、以及配比都会显著的影响愈伤组织的形成、不定根、不定芽的分化，胚状体的形成等。

通常，不同植物，或不同品种，甚至同一植物的不同位置对激素的要求有很大的变化，这主要取决于植物的内源激素水平。

组织培养中使用的激素有的是天然的，如脱落酸（ABA）等，有的是合成的，如二氯苯氧乙酸（2，4－D）

（一）、激素的种类：

1、生长素类：

在自然界中，生长素影响茎和节间的伸长、向性、顶端优势、叶片脱落和生根等现象

在组织培养中的主要作用是：

诱导细胞的分裂和根的分化，诱导愈伤组织）

组织培养中常用的生长素：

1二氯苯氧乙酸（2，4－D）

2萘乙酸（NAA）

3吲哚乙酸（IAA）

4吲哚－－3－丁酸（IBA）

NAA、IAA、IBA被广泛用于生根，2，4－D有利于愈伤组织的诱导和生长。

IAA容易光解，注意用棕色试剂瓶保存，保存时间不要太久。

溶解方法：

1MNaOH或95％酒精，以前者为好保存：

配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

2、细胞分裂素

自然界中，细胞分裂素影响细胞分裂，顶端优势的变化和茎的分化等

组织培养中，细胞分类素主要促进细胞分裂和由愈伤组织上或器官上分化不定芽。

细胞分裂素常常与生长素相互配合，用以调节细胞分裂，细胞伸长，细胞分化和器官形成。

常用的细胞分裂素有：

6－苄氨基嘌呤（6－BA）

激动素（6-糠氨基嘌呤、KT）

玉米素（ZT）

噻二唑苯基脲（thidiazuron、TDZ）

溶解方法：

1MHCL

保存：

3、赤霉素

由日本人黑泽1926年发现。

自然界中，赤霉素能够打破休眠、促进果实成长等效果。

虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究，但在培养基中很少添加，因为它的作用往往是负面的。

虽然也有赤霉素能刺激不定胚发育成正常小植株的报道，但在使用中仍需慎重，不可轻易添加。

赤霉素有20多种，其中在组织培养中最常用的是GA3。

在组织培养中与生长素和细胞分裂素相比，赤霉素不太常用，据报道赤霉素能刺激不定胚正常发育成小植株

95％酒精

保存：

配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，容易分解

灭菌：

高温易分解，要过滤灭菌

4、脱落酸

在自然界中，脱落酸能阻碍发育、促进老化、形成休眠芽等作用。

经试验表明，脱落酸有利于胚性愈伤组织形成正常不定芽。

材料的试管保存，加上脱落酸能抑制生长，使继代培养时间延长。

溶解：

易溶于NaHCO3溶液、氯仿或丙酮。

具有热稳定性，但容易发生光解。

配成一定浓度后，冰箱冷藏保存

四、培养体支持材料

•1.琼脂

•用量7－10g/L（0.7%-1%）

注意：

1若浓度过高，培养基就会变得很硬，营养物质就难于扩散到培养的组织中。

2当进行营养需要研究时，应注意不要使用琼脂，因为市场供应所有琼脂含有杂质，特别是含有Ca,Mg和微量元素。

•3.其它

卡拉胶、玻璃纤维、滤纸桥、海绵等

五、辅助性物质

•1）.抗生素：

1.常用种类：

青霉素　链霉素庆大霉素等

•2.用量：

5%－20%

•3.作用：

防止由外植体内生菌造成的污染。

•4过滤灭菌

•2.）抗氧化物：

常用抗氧化剂及使用：

•半胱氨酸VC（50－200mg/L液洗涤外植体伤口表面）。

•3）活性炭：

•1.作用：

具吸附作用；

茎尖初代培养可防褐化；

促进新梢增殖（浓度0.1－0.2%）；

促进生根；

防止组培苗玻璃化（浓度0.3%）。

利于胚胎培养。

•2.常用浓度：

0.5－10g/L

•3.活性炭的作用

•①对生长的抑制：

其吸附了植物激素

•②对生长的刺激：

其吸附了有抑制作用的物质

•

培养基配制

（二）母液配制要求：

•1.母液浓缩倍数：

10-100，大量元素10；

微量元素、铁盐100；

有机物50；

•2.选用蒸馏水、重蒸馏水、分析纯或化学纯试剂

•3.防止沉淀

•4.激素母液浓度：

1mg/ml,1次配成50或100ml

•5.激素溶解：

IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容；

•NAA先溶于热水或95%酒精再加水；

•2，4-D先溶于1MNaOH再加水；

•KT、BA先溶于1MHCl再加水。

MS培养基母液的配制

培养基熬制：

1.将定容好的培养液取1/3倒入铝锅中，同时加入称好的蔗糖和琼脂，边煮边搅拌，防止糊底。

2.用旺火煮开，再用文火加热，直至琼脂全部融化。

3.将容量瓶中剩余的液体一并倒入铝锅中，摇晃使均匀。

调PH值：

•用0.1MNaOH或HCl调PH值为6.0。

分装：

趁热分装，100ml的三角瓶约装入30－40ml。

扎口与灭菌:

•要求封口松紧适宜，系活扣，便于接种操作。

•培养基应及时灭菌，防止变质。

灭菌后，应尽快地转移培养瓶使其冷却，一般应将灭菌后的培养基储藏于30℃以下的室内名，最好储藏在4－10℃的条件下。

应当注意的是，某些生长调节物质如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素是不稳定的，不能和其他的培养基一起高压灭菌，而要进行过滤灭菌。