推荐下载高效液相色谱法测定郁李仁中苦杏仁苷含量Word格式.docx
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结果苦杏仁苷峰分离良好,苦杏仁苷浓度在0.06613~
4.232g间线性关系良好,r=1.0000,平均回收率为95.91%(RSD=2.29%)。
结论本方法准
确、可靠,可用于郁李仁中苦杏仁苷的含量测定。
1
【关键词】郁李仁;
苦杏仁苷;
高效液相色谱法;
含量测定
Abstract:
ObjectiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofamygdalinin
SemenPruni.MethodsTheanalyticalcolumnwasSupelcoODSC18column(4.6mm250
mm,5m),withmethanol-water(20∶80)asmobilephase.Theflowratewas1.0mL/min,
andthedetectionwavelengthwas210nm.ResultsThelinearrangeforamygdalinwas0.066
13~4.232g(r=1.0000).Theaveragerecoverywas95.91%(RSD=2.29%).ConclusionThe
methodisaccurateandreliable,andcanbeusedinthedeterminationofamygdalininSemen
Pruni.
Keywords:
SemenPruni;
amygdalin;
HPLC;
contentdetermination
郁李仁为蔷薇科植物欧李PrunushumilisBge.、郁李PrunusjaponicaThunb.或长柄扁
桃PrunuspedunculataMaxim.的干燥成熟种子,前二者习称小李仁,后者习称大李仁,
具有润燥滑肠、下气、利水的功效[1]。
苦杏仁苷为郁李仁的主要成分之一,2005年版
《中华人民共和国药典》在该药材含量测定项下采用银量法测定,但银量法属于间接测
定方法,影响因素多,而目前采用其他方法对郁李仁进行含量测定的报道较少。
笔者采用
高效液相色谱(HPLC)法直接测定郁李仁中苦杏仁苷的含量,方法准确、可靠,为郁李仁中
苦杏仁苷的含量测定提供了依据和参考。
1仪器与试药
2
1.1仪器
Waters515泵高效液相色谱仪,Waters2487紫外检测器,ZW色谱柱,恒温箱(中国科学
院大连化物所),Empower色谱工作站,Agilent手动进样器(20十万分之一电子分析天平
(BP-211D型,德国Sartorius);
Cary50紫外分光光度计(美国瓦里安)。
1.2试药
苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号110820-200403);
郁李仁药材购自安
徽亳州药材市场,经鉴定分别为蔷薇科植物郁李和长柄扁桃的干燥成熟种子。
乙腈为色
谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱:
3
210nm,进样量:
20L。
色谱图见图1。
2.2对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的苦杏仁苷对照品42.32mg,置10mL量瓶中,
用70%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得苦杏仁苷4.232mg/mL的对照品溶液。
2.3供试品溶液的制备
取郁李仁粗粉0.3g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,加石油醚(60~90℃)50mL,回流提
取1h,过滤,以石油醚分3次洗涤滤渣及容器,每次10mL,弃去石油醚液,滤纸及滤渣挥干
溶剂,置原容器中,精密加入70%甲醇溶液50mL,精密称定,回流提取1h,放冷至室温,再
称重,用70%甲醇补足失重,抽滤,精密量取续滤液5mL置10mL量瓶中,以70%甲醇稀
释至刻度,以0.45m滤膜滤过,取续滤液即得。
2.4线性关系考察
精密量取苦杏仁苷对照品溶液1mL置10mL量瓶中,用70%甲醇稀释至刻度,再依次
稀释,制得含苦杏仁苷211.6、105.8、52.9、26.45、13.225、6.6125、3.30625g/mL的
4
对照品溶液。
分别精密吸取各20L进样测定,以峰面积积分值对浓度进行回归分析,得
苦杏仁苷回归方程为:
Y=22645X+10860,r=1.0000;
苦杏仁苷线性范围为0.06613~
4.232g。
2.5精密度试验
精密吸取同一供试品溶液重复进样6次,测得苦杏仁苷峰面积积分值的RSD=0.86%。
2.6重复性试验
取同一批次样品6份,按2.3项下方法制备供试品溶液,按照2.1项下色谱条件测定,
结果苦杏仁苷的平均含量为3.16%,RSD=1.35%。
2.7稳定性试验
tips:
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高效液相色谱法测定乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量
【摘要】目的建立乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。
方法采用高效液相色
谱法,色谱柱为HypersilODSC18(4.6mm250mm,5m),流动相为甲醇-水(70∶30),检测
波长275nm,流速为1.0mL/min。
结果淫羊藿苷在0.105~0.840g范围内,进样量与峰
面积呈良好的线性关系(r=0.9998),平均回收率为100.5%,RSD=1.14%(n=6)。
结论该方
法简便快捷,重复性好,可作为乳增宁胶囊中淫羊藿苷含量的测定方法。
【关键词】淫羊藿苷;
乳增宁胶囊;
ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentoficariinin
RuzengningCapsules.MethodsAHPLCmethodwassetuptowithHypersilODSC18(4.6
mm250mm,5m)column,andmethanol-water(70︰30)asmobilephase,theUVdetection
wavelengthwas275nmandtheflowratewas1.0mL/min.ResultThecalibrationcurvewas
showedgoodlinearity(r=0.9998)withintherangeof0.105~0.840gandtheaverage
6
recoverywas99.5%,RSDwas1.27%(n=6).ConclusionThemethodissimpleandrapid,and
withgoodreproducibilityforthedeterminationoficariininRuzengningCapsules.
icariin;
RuzengningCapsules;
乳增宁胶囊由艾叶、淫羊藿、柴胡、川楝子、天门冬、土贝母6味药材经加工制备
而成,具有疏肝解郁、调理冲任的功效,临床上用于肝郁气滞型及冲任失调型的乳腺增生
等的治疗[1]。
本试验参考文献[2-3]的方法,以高效液相色谱(HPLC)法测定乳增宁胶囊中
淫羊藿苷的含量,拟建立简便快捷、专属性和重复性均较好的含量测定方法。
日本岛津LC-10ATvp型高效液相色谱仪;
SPD-20Avp型紫外检测器;
KQ-100DB型数
控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定
所提供,批号110737-200312);
乳增宁胶囊(市售,批号分别为070901、080301、080302、
080303)。
甲醇为色谱纯;
其他试剂为分析纯。
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HypersilODSC18(4.6mm250mm,5流动相:
甲醇-水(70︰30);
275nm;
(30.01)℃;
保留时间:
约为10min;
进样量:
20理论塔
板数按淫羊藿苷计应不低于2000。
精密称取淫羊藿苷对照品适量,置棕色量瓶中,加甲醇制成每1mL含25g的溶液,即
得。
取本品装量差异项下的本品内容物,研细,混匀,精密称定约0.5g,置50mL棕色量瓶中,
加入70%乙醇约40mL,超声处理20min(功率100W,频率40kHz),取出,放冷,加70%乙
醇稀释至刻度,摇匀,静置,用0.45m微孔滤膜过滤,取续滤液,即得。
2.4空白试验
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取处方项下除淫羊藿以外的其余药材,按供试品溶液的制备方法制备阴性溶液,按上述
色谱条件分析。
在与对照品的相应位置上,无明显其他峰出现。
见图1。
2.5线性范围考察
配制52.5g/mL的淫羊藿苷对照品溶液。
分别精密吸取1.0、2.0、4.0、6.0、8.0mL
转移至10mL棕色量瓶中,用甲醇定容。
分别精密吸取上述溶液各20L进样。
以淫羊藿
苷对照品量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为:
Y=1.288
106X-3479.602,r=0.9998。
结果表明,淫羊藿苷对照品在0.105~0.840g范围与峰面积呈
良好的线性关系。
2.6精密度试验
取同一对照品溶液重复进样6次,测定,淫羊藿苷平均峰面积为722
896,RSD=0.41%(n=6),结果表明精密度良好。
2.7重复性试验
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取同一供试品溶液于配制后0、2、4、6、8、10、24h测定,计算峰面积RSD=1.11%,
表明供试品溶液在24h内稳定。
2.8加样回收率试验
精密称取已知含量的同一批次(批号080121)郁李仁粉末6份,每份约0.15g,脱脂后分
别精密加入4.232mg/mL的苦杏仁苷对照品溶液1mL,依法制备供试品溶液并测定。
结
果见表1。
表1加样回收率试验结果(略)
2.9样品含量测定
分别测定了小李仁、大李仁药材各3批,采用外标法计算苦杏仁苷的含量,结果符合要
求。
表2样品中苦杏仁苷含量测定结果(略)
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3讨论
本研究试验了多种流动相比例和流速[2-6],采用甲醇-水(20∶80)作为流动相,苦杏仁苷
峰能较好分离,且出峰时间适当;
水相中加入缓冲盐或酸对测定结果无明显影响,故水相选
择纯水;
色谱柱柱温设定25、35、40℃对分析结果无明显影响,故柱温设为25℃。
由于郁李仁中含有大量的油脂,如不除去测定时易引起干扰,且连续测定含油脂样品还
可能引起色谱柱柱效降低,故提取前应先脱脂;
文献报道[7]和本次试验结果均表明石油醚
脱脂效果优于乙醚,故选择石油醚作为脱脂溶剂。
苦杏仁苷易被苦杏仁苷酶水解,故一般
测定时采用甲醇为提取溶剂,但甲醇提取液直接进行测定时,苦杏仁苷峰前拖尾现象严重,
改用70%甲醇为提取溶剂时,峰形有很大改善,理论塔板数增加近1倍。
比较了不同时间
回流和超声提取效果,结果回流1h可将苦杏仁苷提取完全,效果优于超声提取。
2005年版《中华人民共和国药典》在郁李仁含量测定项下采用的是银量法,其原理是
用硝酸银滴定苦杏仁苷水解产生的氢氰酸来计算含量,苦杏仁苷的水解程度对结果影响
较大,且在判断滴定终点时不同操作人员之间存在较大误差;
采用HPLC法可直接测定药
材中苦杏仁苷含量,结果客观准确,方法可靠。
【参考文献】
11
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医药卫生栏目
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