饮料中安赛蜜苯甲酸山梨酸等防腐剂的测定实验报告Word格式.docx
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1.分配色谱法
根据各待测物在互不相容的两相中的溶解度的不同,因而具有不同的分配系数。
在色谱柱上,随着流动相的移动,这种分配平衡需进行多次,造成各待测物的迁移速率不同,从而实现分离的过程。
通常使用C18柱或ODS柱。
流动相一般为极性或非极性溶剂。
若固定相的极性大于流动相的极性,因此进行的色谱过程叫做正向色谱,反之,就称为反向色谱。
2.离子对色谱法
采用离子对色谱法.在ZorbaxEclipseXDB-C8柱上.以甲醇;
水（38:
62）内含0.02M的HAc-NaAc和0.005M的四丁基溴化铵作流动相,紫外230nm检测.快速测定含乳饮料中的糖精钠、苯甲酸和山梨酸的三种食品添加剂的量。
3.卡尔曼滤波紫外光度法
在酸性条件下,用乙醚萃取、蒸干乙醚后,用NaHCO3溶解残渣,从复杂的样品中分离出苯甲酸和糖精,测定它们在245-281nm之间的紫外吸收
4.反相HPLC
采用反相高效液相色谱法,一次进样、同时测定食品中的人工合成甜味剂（糖精钠、安赛蜜、甜味素）、防腐剂（苯甲酸、山梨酸）、咖啡因、可可碱和茶碱。
以C18柱（150mm×
46mmi.d.,3μm）为分离柱,10mmol/LNaH2PO4（pH=4.00）乙腈（体积比为90∶10）为流动相,采用二极管阵列检测器进行检测。
整个分离过程在23min内完成。
该方法也可用于药品分析。
高效液相色谱法实验原理:
高效液相色谱由储液器,泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成,储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动是,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
一.实验部分
（一）仪器和试剂
1.仪器:
岛津液相色谱仪（LC-10AT）[配有紫外检测器,PhenomenexODS柱];
（微量注射器100μL、10μL各1支）;
容量瓶（10mL10个）;
洗瓶（1个）;
超声波清洗机（1台）;
抽虑装置（1套）
2.试剂:
甲醇为色谱纯;
乙酸铵、氢氧化钠、苯甲酸和山梨酸均为分析纯;
0.02mol/L乙酸铵:
称取1.54g乙酸铵溶于1000mL容量瓶中,溶解后加水稀释至刻度调节pH值为6.0。
0.02mol/L氢氧化钠:
称取0.8g氢氧化钠,置于1000mL容量瓶中,溶解后稀释至刻度。
实验用水为二次蒸馏水。
饮料样品市售饮料:
橙汁。
3.色谱条件
色谱柱:
PhenomenexODS色谱柱（4.6mm×
15cm）;
流动相:
甲醇:
0.02mol/L乙酸铵（pH6.0）=15:
85;
流速:
1.0mL/min波长:
230nm;
柱温:
30℃进样量:
20μL;
等梯度洗脱;
保留时间:
15min
4.标准溶液制备
山梨酸、苯甲酸标准储备溶液（1.0mg/mL）:
分别称取苯甲酸、山梨酸各0.1g,用甲醇溶解,定容至100mL,此溶液的浓度为1mg/ml。
安赛蜜标准溶液由实验室提供,浓度分别为:
0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL。
混合标准工作液:
量取苯甲酸、山梨酸标准贮备液10mL加入到50mL容量瓶中,用水定容至刻度,此溶液的浓度为0.2mg/mL。
（二）实验内容与步骤
1.在流速为1.0mL/min,进样量20μL时,将流动相中甲醇和乙酸铵的体积比选用10:
90、15:
85,20:
80分别进行试验,从而得出最适合的流动相配比。
使色谱条件优化。
2.样品制备
量取约30mL橙汁样品放入一烧杯中,因橙汁呈酸性,用0.02mol/LNaOH溶液慢慢调至接近中性,用针头挤压过滤橙汁,将过滤后的橙汁置于样品管中。
3.安赛蜜,苯甲酸,山梨酸的定性分析
在最佳条件下,用微量注射器分别进样0.05mg/mL的苯甲酸、山梨酸和安赛蜜各20μL,观察其记录保留时间,确定安赛蜜和苯甲酸、山酸梨的峰。
取样品20L进样测定,以标准谱图出峰时间定性。
4.安赛蜜,苯甲酸,山梨酸的定量分析
将浓度为0.2mg/mL苯甲酸、山梨酸标准储备溶液配制成:
0.002、0.005、0.01、0.02mg/mL的混合标样系列。
实验室提供0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL的安赛
蜜标液。
在最佳条件下,进样20μL0.002、0.005、0.01、0.02mg/mL的苯甲酸、山梨酸混合标液以及0.02、0.04、0.06、0.08mg/mL的安赛蜜标液。
取橙汁样品20μL进样测定,根据峰面积在工作曲线上查出安赛蜜和山酸梨、苯甲酸待侧液的浓度,并计算试样中四者的含量。
5.安赛蜜,苯甲酸,山梨酸回收率的测定
用微量注射器分别吸取70μL橙汁样品、20μL0.01mg/mL的苯甲酸山梨酸混合标液、10μL0.02mg/mL安赛蜜标液置于样品管中,将样品管置于超声波清洗机中震荡、混匀。
在最佳条件下,取样品管溶液20μL进样测定,根据峰面积增加的多少计算安赛蜜,苯甲酸,山梨酸的回收率。
二.实验结果与讨论
（一）安赛蜜、苯甲酸和山梨酸的定性分析
0.01.02.03.04.05.06.07.08.0
min
0.0
0.51.01.52.02.53.03.54.0μV（x100,000）
色谱
安赛蜜
苯甲酸
山梨酸
（二）安赛蜜、苯甲酸和山梨酸的定量分析
（三）样品中安赛蜜、苯甲酸和山梨酸的定量分析
（三）安赛蜜、苯甲酸和山梨酸分析方法的回收率测定
三.参考文献
1.仪器分析实验俞英主编北京:
化学工业出版社2008.6
2.高效液相色谱法测定饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精钠许传旭刘华（北京北分瑞利分析仪器（集团）有限责任公司色谱仪器中心,北京,100095）
3.高效液相色谱法同时测定食品中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠范燕斐何兰君李俊毅黄汝涛（揭阳市质量计量监督检测所广东揭阳522000）
0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.0
-0.5
0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0μV（x10,000）
4.高效液相色谱法同时测定多种食品添加剂[J].色谱,青川,于文莲,王静2001,19
（2）:
105108.
五.实验讨论:
1.高效液相色谱法的特点
特点:
高压、高效、高速、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
2.在选择溶剂时,溶剂的极性是选择的重要依据。
采用正相液-液分配分离时:
首先选择中等极性溶剂,若组分的保留时间太短,降低溶剂极性,反之增加。
也可在低极性溶剂中,逐渐增加其中的极性溶剂,使保留时间缩短。
3.选择流动相时应注意的几个问题
（1）尽量使用高纯度试剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
（2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。
如使固定液溶解流失;
酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。
（3）试样在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积。
（4）流动相同时还应满足检测器的要求。
当使用紫外检测器时,流动相不应有紫外吸收。
4.影响分离的因素与提高柱效的途径
（1）液体的黏度比气体大一百倍,密度为气体的一千倍,故降低传质阻力是提高柱效主要途径,降低固定相粒度可提高柱效。
（2）液相色谱中,不可能通过增加柱温来改善传质;
（恒温）
（3）改变淋洗液组成、极性是改善分离的最直接的因素。
5.高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点:
（1）进样方式的不同:
高效液相色谱只要将样品制成溶液,而气相色谱需加热气化或裂解;
（2）流动相不同,在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着
一定的相互作用力;
（3）由于液体的粘度较气体大两个数量级,使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级;
（4）由于流动相的化学成分可进行广泛选择,并可配置成二元或多元体系,满足梯度洗脱的需要,因而提高了高效液相色谱的分辨率（柱效能）;
（5）高效液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相,使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小,流动阻力增大,必须借助高压泵输送流动相;
（6）高效液相色谱是在液相中进行,对被测组分的检测,通常采用灵敏的湿法光度检测器,例如,紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等。
6.高效液相色谱的定性和定量分析的方法
定性:
①利用纯物质定性的方法
利用保留值定性:
通过对比试样中具有与纯物质相同保留值的色谱峰,来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。
不适用于不同仪器上获得的数据之间的对比。
利用加入法定性:
将纯物质加入到试样中,观察各组分色谱峰的相对变化。
②利用文献保留值定性
相对保留值r21:
相对保留值r21仅与柱温和固定液性质有关。
在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保留数据,可以用来进行定性鉴定。
定量:
有归一法、内标法、外标法
在定量分析中,采用测量峰面积的归一化法、内标法或外标法等,但高效液相色谱在分离复杂组分式样时,有些组分常不能出峰,因此归一化法定量受到限制,而内标法定量则被广泛使用。
7.本实验的定量分析方法要在这样的情况下才能使用
本试验采用外标法进行定量分析,对进样量的准确性控制要求较高,适用于大批量试样的快速分析。
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